袁榮獻劉天翔曾 真梁 會

（1.貴陽中醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院，貴州貴陽550001；2.貴州省建筑醫(yī)院，貴州貴陽550001）

正交法優(yōu)化復方腫節(jié)風合劑提取工藝研究

袁榮獻1劉天翔2曾 真1梁 會1

（1.貴陽中醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院，貴州貴陽550001；2.貴州省建筑醫(yī)院，貴州貴陽550001）

目的：建立復方腫節(jié)風合劑制備工藝。方法：采用正交試驗法，對復方腫節(jié)風合劑制備工藝進行研究，以其有效成分反丁烯二酸的提取量為考察指標，對浸泡時間、煎煮次數(shù)、溶劑用量、提取時間等主要影響因素進行考察，篩選最佳提取工藝。結果：最佳提取工藝參數(shù)為浸泡1h，第1次加8倍量水（扣除藥材吸水），第2、3次加6倍量水，提取時間0.5h，煎煮3次。結論：本產品各項技術參數(shù)與工藝優(yōu)選條件相同，且工藝條件穩(wěn)定，說明工藝可行，適合批量生產。

復方腫節(jié)風合劑 提取工藝 反丁烯二酸 正交試驗

復方腫節(jié)風合劑是由處方腫節(jié)風、魚腥草等組成，是在貴陽中醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院五官科長期臨床實踐的經驗方基礎上，按照國家第6類中藥新藥的要求研制的新藥，主治急慢性咽炎及扁桃體炎[1]。

原工藝生產可行，質量穩(wěn)定，臨床療效確切，但原劑型為湯劑，不能起到局部理療的作用，藥液不能直接到達患處，因此，將該品改變劑型為合劑（使用前將其霧化），使用方便，起霧效果好。經口腔黏膜超聲霧化給藥后，既起到局部理療的作用，又使藥液直達患處以清熱解毒、抗炎、消腫止痛、潤喉利咽。

本實驗在沿用原工藝路線基礎上，以復方腫節(jié)風合劑君藥腫節(jié)風有效成分反丁烯二酸的提取量指標對工藝進行評價，采用L9（34）正交試驗，篩選最佳提取工藝條件，同時對主要有效成分進行定性、定量控制，提高了質量標準，以期獲得更好的療效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀；梅特勒-托利多AL204電子分析天平；真空干燥箱；電熱鼓風干燥箱；EM-202MS1微波真空干燥機。

1.2 試藥 反丁烯二酸 （中國藥品生物制品檢定所，批號:1541-200001）；乙腈為色譜純 （江蘇漢邦）；娃哈哈純凈水；磷酸、乙醇均為分析純；液相用水為超純水。

2 方法與結果

2.1 指標選擇 為了使工藝能充分反映藥物療效，并結合本方藥物組成的特點及功能主治，以本方中腫節(jié)風的有效成分反丁烯二酸的提取量為考察指標對工藝進行評價。

2.2 反丁烯二酸含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為 Hypersil ODS2柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相乙腈-0.1%磷酸溶液（2∶98），檢測波長210nm，柱溫30℃，進樣量5μL；流速1.0mL/min，色譜圖見圖1。

圖1 對照品（a）、復方腫節(jié)風合劑（b）的HPLC圖

2.2.2 供試品溶液的制備 按1/45處方量取藥材39g，精密稱定，加8倍量水煎煮3次，每次煎煮0.5h，藥液用200目濾布過濾后，定容到100mL，搖勻，精密量取5mL置50mL量瓶中，加蒸餾水至刻度，定容，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 對照品溶液的制備 精密稱取反丁烯二酸對照品適量，置10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，超聲，搖勻，即得2.49μg/mL的對照品溶液。

2.3 提取工藝優(yōu)化

2.3.1 單因素考察

2.3.1.1 藥材吸水率的測定 按1/10處方量稱取藥材（魚腥草除外）175g，加10倍量水浸泡，浸泡不同時間，濾過，稱濕藥重量（至藥材重量不再增加為止），測定藥材吸水率。結果見表1?？梢娝幉奈蕿?10%，為方便操作，以吸水率為200%計算，即藥材吸水量為藥材重的2.0倍。因此首次水提時應該多加2.0倍量的水。

表1 藥材吸水率考察

2.3.1.2 浸泡時間的考察 稱取魚腥草藥材8份，每份250g，剪碎，分別裝入水蒸氣蒸餾裝置中，各自加入10倍量水，浸泡0、1、3、5h，于水沸后6h收集餾出液，將收集到的混合液倒入分液漏斗，加入一定量的石油醚萃取，減壓旋轉蒸發(fā)去溶劑，即可得深黃色精油。用電子天平稱重精油，計算產率，結果見表2。單因素方差分析結果表明，P＜0.05，說明不同的浸泡時間揮發(fā)油提取率有顯著性差異，而浸泡1、3、5h之間揮發(fā)油提取率無顯著性差異，因此根據(jù)節(jié)約時間及成本的需要，選用浸泡時間為1h。

表2 魚腥草浸泡時間考察

2.3.1.3 提取時間的考察 稱取魚腥草藥材8份，每份250g，剪碎，分別裝入水蒸氣蒸餾裝置中，各自加入10倍量水，浸泡1h，于水沸后2、4、6、8h收集餾出液，將收集到的混合液倒入分液漏斗，加入一定量的石油醚萃取，減壓旋轉蒸發(fā)去溶劑，即可得深黃色精油。用電子天平稱重精油，計算產率，結果見表3。單因素方差分析結果表明，P＜0.05，說明不同的提取時間揮發(fā)油提取率有顯著性差異；6h的提取率遠大于2、4h，6h與8h之間提取率無顯著性差異。因此，為節(jié)約成本起見，選用提取時間為6h。

表3 魚腥草提取時間考察

2.3.2 正交試驗設計 根據(jù)單因素考查結果，本試驗以溶劑用量（A）、煎煮次數(shù)（B）、煎煮時間（C）為考察因素，每個因素3個水平，進行L9（34）正交試驗，每次試驗平行3份，篩選最佳工藝條件，因素水平見表4，正交試驗結果見表5，主體間效應的檢驗見表6。從表6的結果分析得知，各因素作用主次為B＞A＞C，B因素有顯著性差異，且因素B中B3＞B2＞B1，則應選擇B3為水提工藝條件參數(shù)；其他A、C均無顯著性差異，且A3＞A2＞A1，C3＞C1＞C2，但結合大生產實際，無顯著性差異的A、C因素應選擇A1、C1為水提工藝條件，故選擇水提工藝A1B3C1，即煎煮3次，第1次加8倍量水（扣除藥材吸水），第2、3次加6倍量水，每次提取0.5h。

表4 L9（34）正交試驗設計因素水平

表5 煎煮工藝條件L9（34）正交試驗安排及結果

表6 主體間效應的檢驗表（因變數(shù)：總固體物得率）

2.3.3 優(yōu)化工藝的驗證 對優(yōu)選的工藝進行了驗證試驗，結果見表7，按條件A1B2C1進行3次重復試驗。結果可見，驗證試驗結果與正交結果相一致，說明此水提工藝條件基本穩(wěn)定。

表7 正交結果驗證

3 結語

結合腫節(jié)風、魚腥草等的有效成分、藥理學的研究、臨床應用及功能主治的特色，腫節(jié)風在本方中用水提取是合理的。

在沿用原工藝路線的基礎上，為提高復方腫節(jié)風合劑藥物利用率，將原劑型湯劑改變?yōu)楹蟿瑫r，為了提高質量標準，本試驗對原工藝進行驗證、細化，對主要有效成分進行定性、定量控制，以期獲得更好的療效。本研究以復方腫節(jié)風合劑中反丁烯二酸的含量為考察指標，考察了最佳水提工藝。在單因素試驗的基礎上，選取溶劑倍量、提取時間、煎煮次數(shù)進行正交試驗，通過正交試驗優(yōu)化，確定最佳提取工藝為浸泡1h，煎煮3次，第1次加8倍量水（扣除藥材吸水），第2、3次加6倍量水，每次提取0.5h。本試驗優(yōu)化的工藝簡便、重復性好，其各項技術參數(shù)與工藝優(yōu)選條件相同，且工藝條件穩(wěn)定，說明工藝可行，適合批量生產。

[1] 李松林，崔熙，喬傳卓，等.五種金粟蘭屬植物揮發(fā)油成分及其抗真菌活性研究.中藥材，1992，15（7）：28

R289.5

A

1672-397X（2015）06-0061-03

袁榮獻（1972—），女，本科學歷，副主任藥劑師，主要從事藥劑學研究。

曾真，碩士。yuanrongxianyr@163.com

2014-11-04

編輯：吳 寧

貴州省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥、民族醫(yī)藥科學技術課題研究資助項目（QZYY2011-26）；貴陽中醫(yī)學院科研項目（貴中醫(yī)科院內[201204]號）