梁曉輝+龍小軍+趙豐+龍智文+李信冬+竇培沖

摘 要：該文對解磷巨大芽孢桿菌JL-1生長的影響因素及生長特性進行了實驗研究。單因子實驗結(jié)果顯示，菌株生長的最適溫度為25～30℃，最適pH為6.0～7.0，接種量為5%，裝液量為50mL/250mL；正交優(yōu)化實驗結(jié)果顯示，各因素中對解磷菌JL-1生長影響的大小依次為：溫度>pH>接種量>裝液量，最優(yōu)組合為溫度30℃、起始pH6.0、接種量6%、裝液量40mL/250mL，該條件下培養(yǎng)物中的菌體密度達到了3.98×109cfu/mL。

關(guān)鍵詞：解磷巨大芽孢桿菌JL-1；發(fā)酵條件；初步優(yōu)化

中圖分類號 Q789 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）24-27-03

磷是植物生長所必需的礦質(zhì)元素之一，植物的光合作用和體內(nèi)的生化過程都必須有磷元素參與[1]。然而我國耕地土壤磷素狀況卻不容樂觀，有資料顯示，我國約有74%的耕地土壤缺磷，且土壤中95%以上的磷為無效態(tài)磷[2]。國外有研究表明，自然界存在相當數(shù)量具有解磷作用的微生物，包括解磷細菌、解磷真菌、解磷放線菌等幾大類，主要分布在根際土壤中，它們能夠把土壤中不溶性磷轉(zhuǎn)化為可供植物利用的可溶性磷，而植物根系能夠為這些解磷微生物提供生長所必須的糖類等有機碳[3]，這層關(guān)系的發(fā)現(xiàn)促生了新的生物技術(shù)的出現(xiàn)，如利用解磷菌制成生物有機肥用于農(nóng)業(yè)，以提高作物的產(chǎn)量[4]。我國也有相關(guān)的研究，如劉麗麗、郜春花等[5～6]的研究表明，解磷微生物可使小麥、燕麥等增產(chǎn)，能夠促進作物對肥料和土壤磷素的吸收。

本實驗室從土壤中分離到一株具有解磷作用的巨大芽孢桿菌，初步實驗顯示，其能夠顯著增加土壤中的可溶性磷含量，在生物有機肥生產(chǎn)中具有重要的應用價值。本研究擬對其液態(tài)發(fā)酵條件進行優(yōu)化，以獲得高密度的菌液，為巨大芽孢桿菌在發(fā)酵生產(chǎn)中的應用提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料 菌種：巨大芽孢桿菌JL-1，由本實驗室自行分離保存。培養(yǎng)基：酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、瓊脂30g/L、NaCl5g/L，pH7.0。

1.2 方法

1.2.1 種子液的制備 將斜面種子接入液體培養(yǎng)基，30℃、170r/min振蕩培養(yǎng)24h，以5%（v/v，下同）接種量轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基中30℃、170r/min振蕩培養(yǎng)12h至對數(shù)期得到種子液。

1.2.2 液體發(fā)酵產(chǎn)酶條件的研究 對影響巨大芽孢桿菌生長的溫度、培養(yǎng)基初始pH、接種量、裝液量、搖床轉(zhuǎn)速等因素進行單因子實驗，再選擇影響較大的因素進行正交優(yōu)化，最終獲得菌株JL-1的最佳培養(yǎng)條件。

1.2.3 菌株JL-1生長量的測定 采用OD600標示菌株的生長量，細胞密度計數(shù)采用涂平板法。

2 結(jié)果分析

2.1 單因子實驗結(jié)果

2.1.1 培養(yǎng)溫度的影響 向250mL三角瓶中裝入45mL培養(yǎng)基，接入5mL種子液，分別于不同的溫度下進行培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速均為170r/m，16h后取樣測定培養(yǎng)物的吸光值（OD600），每個溫度做3個重復，吸光值取平均值。從圖1可以看出，菌株JL-1生長的最適溫度在25～30℃，此時培養(yǎng)物的吸光值為0.985～1.035，超出這一范圍時，菌體密度均有不同程度的下降，其中在20℃時，培養(yǎng)物吸光值為0.851，15℃時，培養(yǎng)物吸光值下降為0.512；當培養(yǎng)溫度高于30℃時，菌體密度迅速下降，35℃時，吸光值為0.731，40℃時培養(yǎng)物吸光值僅有0.22。

圖1 培養(yǎng)溫度對菌株JL-1生長的影響

2.1.2 pH對菌株JL-1生長的影響 向250mL三角瓶中裝入45mL培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)其初始pH分別為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，接入5mL種子液，于30℃、170 r/m條件下培養(yǎng)，16h后取樣測定培養(yǎng)物的吸光值（OD600），每個溫度做3個重復，吸光值取平均值。從圖2可以看出，pH對菌株JL-1的生長有明顯的影響，最適生長pH為6.0～7.0，培養(yǎng)物吸光值為0.981～0.952，說明菌株適合在微酸的環(huán)境中生長，超出這一范圍時，菌體生長量均有不同程度的下降，如當培養(yǎng)基初始pH為4.0，培養(yǎng)物的吸光值下降為0.42，相比之下，堿性環(huán)境對菌株JL-1生長的影響更為明顯，如當培養(yǎng)基初始pH為9.0時，培養(yǎng)物的吸光值僅有0.15，菌株生長收到了極大的抑制。

圖2 pH對菌株JL-1生長的影響

2.1.3 接種量對JL-1生長的影響 取5組250mL三角瓶，裝入適量的培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)其初始pH為6.0，分別接入1%、3%、5%、7%、9%的種子液，使三角瓶中總裝液量為50mL，于30℃、170r/m條件下培養(yǎng)，16h后取樣測定培養(yǎng)物的吸光值（OD600），每個溫度做3個重復，吸光值取平均值。從圖3可以看出，隨著接種量的增加，菌株JL-1的生長量逐漸增加，當接種量為5%時，培養(yǎng)物的吸光值達到0.958；之后繼續(xù)增加接種量，菌株生長量的增加不明顯，可見在發(fā)酵菌株JL-1時接種量達到5%即可。

圖3 接種量對菌株JL-1生長的影響

2.1.4 裝液量對菌株JL-1生長的影響 取7組250mL三角瓶，裝入適量的培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)其初始pH為6.0，接入5%的種子液，使三角瓶中總裝液量分別為20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL，于30℃、170r/m條件下培養(yǎng)，16h后取樣測定培養(yǎng)物的吸光值（OD600），每個溫度做3個重復，吸光值取平均值。從圖4可以看出，隨著裝液量的增加，菌株JL-1的生長量先增加后減少，當裝液量為50mL時，生長量達最大值，培養(yǎng)物的吸光值為0.951，可見在發(fā)酵菌株JL-1時裝液量以50mL/250mL為宜。裝液量的多少決定了微生物細胞接觸空氣機會的多少和收到機械創(chuàng)傷力的大小，當裝液量較少時，雖然細胞更多的機會接觸到空氣，細胞同時也受到了較大的機械創(chuàng)傷力，隨著裝液量的增加，細菌細胞所受到的機械創(chuàng)傷力減小，與空氣接觸機會的多少對生長的影響起了主導作用，2種因素相互作用，使50mL的裝液量成為一個最佳結(jié)合點。

圖4 裝液量對菌株JL-1生長的影響

2.1.5 搖床轉(zhuǎn)速對菌株JK-1生長的影響 取4組250mL三角瓶，裝入45mL培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)其初始pH為6.0，接入5%的種子液，培養(yǎng)溫度為30℃，分別于70r/min、120r/min、170r/min、220r/min條件下培養(yǎng)，16h后取樣測定培養(yǎng)物的吸光值（OD600），每個溫度做3個重復，吸光值取平均值。由圖5可知，隨著搖床轉(zhuǎn)速的增加，菌株JL-1的生長量也在不斷增加，這是因為轉(zhuǎn)速的增加，使得細菌細胞接觸空氣的幾率增大，這亦可說明菌株JL-1是一株好氧菌，但搖床轉(zhuǎn)速的增加也加大了菌體細胞所受到機械創(chuàng)傷力，考慮到搖床自身性能的限制，轉(zhuǎn)速應不超過220r/min。

圖5 搖床轉(zhuǎn)速對菌株JL-1生長的影響

2.2 菌株JL-1生長曲線的測定 向250mL三角瓶中裝入45mL培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)其初始pH為6.0，接入5%的種子液，于30℃，220r/min條件下培養(yǎng)，每隔2h取樣1次，測定培養(yǎng)物的吸光值（OD600）。共做3個重復，吸光值取平均值。從圖6可以看出，接種后的前2h為生長的延滯期，隨后進入對數(shù)生長期，培養(yǎng)14～18h間為穩(wěn)定期，其培養(yǎng)物的吸光值維持在0.978～0.997，18h后吸光值有所下降，進入衰亡期，因此，為獲得最大數(shù)量菌體，將菌株培養(yǎng)14h即可。

圖6 菌株JL-1生長曲線的測定

2.3 正交優(yōu)化實驗 對其他因素即溫度、起始pH、接種量、裝液量進行正交優(yōu)化實驗，采用L9（34）正交表，表頭設(shè)計及實驗結(jié)果分別見表1、表2。

表1 正交實驗因素水平

[序號＼&A溫度（℃）＼&B起始（pH）＼&C接種量（%）＼&D裝液量（mL）＼&1＼&25＼&5＼&4＼&40＼&2＼&30＼&6＼&5＼&50＼&3＼&35＼&7＼&6＼&60＼&]

表2 正交實驗結(jié)果

[試驗號＼&A＼&B＼&C＼&D＼&＼&1＼&25＼&5＼&4＼&40＼&0.851＼&2＼&25＼&6＼&5＼&50＼&1.02＼&3＼&25＼&7＼&6＼&60＼&0.954＼&4＼&30＼&5＼&5＼&60＼&0.861＼&5＼&30＼&6＼&6＼&40＼&1.153＼&6＼&30＼&7＼&4＼&50＼&1.054＼&7＼&35＼&5＼&6＼&50＼&0.732＼&8＼&35＼&6＼&4＼&60＼&0.839＼&9＼&35＼&7＼&5＼&40＼&0.767＼&K1＼&2.825＼&2.444＼&2.744＼&2.771＼&＼&K2＼&3.068＼&3.012＼&2.648＼&2.806＼&＼&K3＼&2.338＼&2.775＼&2.839＼&2.654＼&＼&k1＼&0.942＼&0.815＼&0.915＼&0.924＼&＼&k2＼&1.023＼&1.004＼&0.883＼&0.935＼&＼&k3＼&0.780＼&0.925＼&0.946＼&0.885＼&＼&R＼&0.240＼&0.190＼&0.064＼&0.051＼&＼&]

極差分析顯示，試驗各因素中對菌株JL-1生長影響最大的是溫度，其它依次為起始pH、接種量、裝液量，最優(yōu)組合為A2B2C3D1，在此條件下對菌株JL-1的生長進行試驗，結(jié)果顯示，該條件下3個重復的吸光值分別為1.281、1.309、1.323，平均值為1.304，高于任何實驗組，說明優(yōu)化實驗得到了較好的效果。通過平板計數(shù)得知，此時培養(yǎng)物中的細胞數(shù)量達到了3.98×109cfu/mL（表3）。

表3 優(yōu)化條件下活菌的計數(shù)

[重復＼&吸光值（OD600）＼&活菌數(shù)（×109cfu/mL）＼&重復1＼&1.281＼&4.15＼&重復2＼&1.309＼&3.97＼&重復3＼&1.323＼&3.82＼&平均＼&1.304＼&3.98＼&]

3 結(jié)論與討論

巨大芽孢桿JL-1是一株重要的解磷細菌，在生物有機肥的生產(chǎn)上有著重要的應用價值。本文對其生長的影響因素及生長特性進行了研究，得到如下結(jié)論：（1）單因子實驗結(jié)果顯示，菌株JL-1生長的最適溫度為25～30℃，最適pH為6.0～7.0，接種量為5%，裝液量為50mL/250mL，搖床轉(zhuǎn)速為220r/min。菌株JL-1接種后2h進入對數(shù)生長期，14～18h為穩(wěn)定期。（2）正交實驗結(jié)果顯示，各因素中對解磷菌JL-1生長影響的大小依次為：A>B>C>D，最優(yōu)組合為A2B2C3D1，該條件下培養(yǎng)物中的菌體密度達到了3.98×109cfu/mL。（3）從實驗結(jié)果來看，菌株JL-1是一株好氧菌，培養(yǎng)基中的溶氧對其生長具有明顯的影響，若應用于工業(yè)生產(chǎn)，為獲得高細胞密度發(fā)酵產(chǎn)物仍需對其攪拌速率、通氣量等因素作進一步的研究。

參考文獻

[1]何玉龍，周青平.解磷微生物研究進展[J].青海畜牧獸醫(yī)雜志，2012，42（2）：36-38.

[2]楊艷菊，王改蘭，張海鵬，等.解磷微生物的研究現(xiàn)狀及在農(nóng)業(yè)上[J].湖南農(nóng)業(yè)科學，2012（11）：23-25.

[3]A.Deubel，A.Gransee，W.Merbach.Transformation of organic rhizodeposits by rhizoplane bacteria and its influence on the availability of tertiary calcium phosphate[J].Plant Nutrition Soil Sci.，2000，163：387-392.

[4]R.K.Gothwal，V.K.Nigam，M.K. Mohan，D.Sasmal，P.Ghosh. Phosphate solubilization by rhizospheric bacterial isolates from economically important desert plants[J] Indian Microbiol.，2006，46（4）：355-361.

[5]劉麗麗，陳立新，王廣朝.9320-SD系列菌的溶磷研究[J].南開大學學報，1998，31（3）：75-79.

[6]郜春花，王崗，董云中.解磷菌劑盆栽及大田施用效果[J].山西農(nóng)業(yè)科學，2003，31（3）：40-43.

（責編：張宏民）

圖4 裝液量對菌株JL-1生長的影響

2.1.5 搖床轉(zhuǎn)速對菌株JK-1生長的影響 取4組250mL三角瓶，裝入45mL培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)其初始pH為6.0，接入5%的種子液，培養(yǎng)溫度為30℃，分別于70r/min、120r/min、170r/min、220r/min條件下培養(yǎng)，16h后取樣測定培養(yǎng)物的吸光值（OD600），每個溫度做3個重復，吸光值取平均值。由圖5可知，隨著搖床轉(zhuǎn)速的增加，菌株JL-1的生長量也在不斷增加，這是因為轉(zhuǎn)速的增加，使得細菌細胞接觸空氣的幾率增大，這亦可說明菌株JL-1是一株好氧菌，但搖床轉(zhuǎn)速的增加也加大了菌體細胞所受到機械創(chuàng)傷力，考慮到搖床自身性能的限制，轉(zhuǎn)速應不超過220r/min。

圖5 搖床轉(zhuǎn)速對菌株JL-1生長的影響

2.2 菌株JL-1生長曲線的測定 向250mL三角瓶中裝入45mL培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)其初始pH為6.0，接入5%的種子液，于30℃，220r/min條件下培養(yǎng)，每隔2h取樣1次，測定培養(yǎng)物的吸光值（OD600）。共做3個重復，吸光值取平均值。從圖6可以看出，接種后的前2h為生長的延滯期，隨后進入對數(shù)生長期，培養(yǎng)14～18h間為穩(wěn)定期，其培養(yǎng)物的吸光值維持在0.978～0.997，18h后吸光值有所下降，進入衰亡期，因此，為獲得最大數(shù)量菌體，將菌株培養(yǎng)14h即可。

圖6 菌株JL-1生長曲線的測定

2.3 正交優(yōu)化實驗 對其他因素即溫度、起始pH、接種量、裝液量進行正交優(yōu)化實驗，采用L9（34）正交表，表頭設(shè)計及實驗結(jié)果分別見表1、表2。

表1 正交實驗因素水平

[序號＼&A溫度（℃）＼&B起始（pH）＼&C接種量（%）＼&D裝液量（mL）＼&1＼&25＼&5＼&4＼&40＼&2＼&30＼&6＼&5＼&50＼&3＼&35＼&7＼&6＼&60＼&]

表2 正交實驗結(jié)果

[試驗號＼&A＼&B＼&C＼&D＼&＼&1＼&25＼&5＼&4＼&40＼&0.851＼&2＼&25＼&6＼&5＼&50＼&1.02＼&3＼&25＼&7＼&6＼&60＼&0.954＼&4＼&30＼&5＼&5＼&60＼&0.861＼&5＼&30＼&6＼&6＼&40＼&1.153＼&6＼&30＼&7＼&4＼&50＼&1.054＼&7＼&35＼&5＼&6＼&50＼&0.732＼&8＼&35＼&6＼&4＼&60＼&0.839＼&9＼&35＼&7＼&5＼&40＼&0.767＼&K1＼&2.825＼&2.444＼&2.744＼&2.771＼&＼&K2＼&3.068＼&3.012＼&2.648＼&2.806＼&＼&K3＼&2.338＼&2.775＼&2.839＼&2.654＼&＼&k1＼&0.942＼&0.815＼&0.915＼&0.924＼&＼&k2＼&1.023＼&1.004＼&0.883＼&0.935＼&＼&k3＼&0.780＼&0.925＼&0.946＼&0.885＼&＼&R＼&0.240＼&0.190＼&0.064＼&0.051＼&＼&]

極差分析顯示，試驗各因素中對菌株JL-1生長影響最大的是溫度，其它依次為起始pH、接種量、裝液量，最優(yōu)組合為A2B2C3D1，在此條件下對菌株JL-1的生長進行試驗，結(jié)果顯示，該條件下3個重復的吸光值分別為1.281、1.309、1.323，平均值為1.304，高于任何實驗組，說明優(yōu)化實驗得到了較好的效果。通過平板計數(shù)得知，此時培養(yǎng)物中的細胞數(shù)量達到了3.98×109cfu/mL（表3）。

表3 優(yōu)化條件下活菌的計數(shù)

[重復＼&吸光值（OD600）＼&活菌數(shù)（×109cfu/mL）＼&重復1＼&1.281＼&4.15＼&重復2＼&1.309＼&3.97＼&重復3＼&1.323＼&3.82＼&平均＼&1.304＼&3.98＼&]

3 結(jié)論與討論

巨大芽孢桿JL-1是一株重要的解磷細菌，在生物有機肥的生產(chǎn)上有著重要的應用價值。本文對其生長的影響因素及生長特性進行了研究，得到如下結(jié)論：（1）單因子實驗結(jié)果顯示，菌株JL-1生長的最適溫度為25～30℃，最適pH為6.0～7.0，接種量為5%，裝液量為50mL/250mL，搖床轉(zhuǎn)速為220r/min。菌株JL-1接種后2h進入對數(shù)生長期，14～18h為穩(wěn)定期。（2）正交實驗結(jié)果顯示，各因素中對解磷菌JL-1生長影響的大小依次為：A>B>C>D，最優(yōu)組合為A2B2C3D1，該條件下培養(yǎng)物中的菌體密度達到了3.98×109cfu/mL。（3）從實驗結(jié)果來看，菌株JL-1是一株好氧菌，培養(yǎng)基中的溶氧對其生長具有明顯的影響，若應用于工業(yè)生產(chǎn)，為獲得高細胞密度發(fā)酵產(chǎn)物仍需對其攪拌速率、通氣量等因素作進一步的研究。

參考文獻

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[2]楊艷菊，王改蘭，張海鵬，等.解磷微生物的研究現(xiàn)狀及在農(nóng)業(yè)上[J].湖南農(nóng)業(yè)科學，2012（11）：23-25.

[3]A.Deubel，A.Gransee，W.Merbach.Transformation of organic rhizodeposits by rhizoplane bacteria and its influence on the availability of tertiary calcium phosphate[J].Plant Nutrition Soil Sci.，2000，163：387-392.

[4]R.K.Gothwal，V.K.Nigam，M.K. Mohan，D.Sasmal，P.Ghosh. Phosphate solubilization by rhizospheric bacterial isolates from economically important desert plants[J] Indian Microbiol.，2006，46（4）：355-361.

[5]劉麗麗，陳立新，王廣朝.9320-SD系列菌的溶磷研究[J].南開大學學報，1998，31（3）：75-79.

[6]郜春花，王崗，董云中.解磷菌劑盆栽及大田施用效果[J].山西農(nóng)業(yè)科學，2003，31（3）：40-43.

（責編：張宏民）

圖4 裝液量對菌株JL-1生長的影響

2.1.5 搖床轉(zhuǎn)速對菌株JK-1生長的影響 取4組250mL三角瓶，裝入45mL培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)其初始pH為6.0，接入5%的種子液，培養(yǎng)溫度為30℃，分別于70r/min、120r/min、170r/min、220r/min條件下培養(yǎng)，16h后取樣測定培養(yǎng)物的吸光值（OD600），每個溫度做3個重復，吸光值取平均值。由圖5可知，隨著搖床轉(zhuǎn)速的增加，菌株JL-1的生長量也在不斷增加，這是因為轉(zhuǎn)速的增加，使得細菌細胞接觸空氣的幾率增大，這亦可說明菌株JL-1是一株好氧菌，但搖床轉(zhuǎn)速的增加也加大了菌體細胞所受到機械創(chuàng)傷力，考慮到搖床自身性能的限制，轉(zhuǎn)速應不超過220r/min。

圖5 搖床轉(zhuǎn)速對菌株JL-1生長的影響

2.2 菌株JL-1生長曲線的測定 向250mL三角瓶中裝入45mL培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)其初始pH為6.0，接入5%的種子液，于30℃，220r/min條件下培養(yǎng)，每隔2h取樣1次，測定培養(yǎng)物的吸光值（OD600）。共做3個重復，吸光值取平均值。從圖6可以看出，接種后的前2h為生長的延滯期，隨后進入對數(shù)生長期，培養(yǎng)14～18h間為穩(wěn)定期，其培養(yǎng)物的吸光值維持在0.978～0.997，18h后吸光值有所下降，進入衰亡期，因此，為獲得最大數(shù)量菌體，將菌株培養(yǎng)14h即可。

圖6 菌株JL-1生長曲線的測定

2.3 正交優(yōu)化實驗 對其他因素即溫度、起始pH、接種量、裝液量進行正交優(yōu)化實驗，采用L9（34）正交表，表頭設(shè)計及實驗結(jié)果分別見表1、表2。

表1 正交實驗因素水平

[序號＼&A溫度（℃）＼&B起始（pH）＼&C接種量（%）＼&D裝液量（mL）＼&1＼&25＼&5＼&4＼&40＼&2＼&30＼&6＼&5＼&50＼&3＼&35＼&7＼&6＼&60＼&]

表2 正交實驗結(jié)果

[試驗號＼&A＼&B＼&C＼&D＼&＼&1＼&25＼&5＼&4＼&40＼&0.851＼&2＼&25＼&6＼&5＼&50＼&1.02＼&3＼&25＼&7＼&6＼&60＼&0.954＼&4＼&30＼&5＼&5＼&60＼&0.861＼&5＼&30＼&6＼&6＼&40＼&1.153＼&6＼&30＼&7＼&4＼&50＼&1.054＼&7＼&35＼&5＼&6＼&50＼&0.732＼&8＼&35＼&6＼&4＼&60＼&0.839＼&9＼&35＼&7＼&5＼&40＼&0.767＼&K1＼&2.825＼&2.444＼&2.744＼&2.771＼&＼&K2＼&3.068＼&3.012＼&2.648＼&2.806＼&＼&K3＼&2.338＼&2.775＼&2.839＼&2.654＼&＼&k1＼&0.942＼&0.815＼&0.915＼&0.924＼&＼&k2＼&1.023＼&1.004＼&0.883＼&0.935＼&＼&k3＼&0.780＼&0.925＼&0.946＼&0.885＼&＼&R＼&0.240＼&0.190＼&0.064＼&0.051＼&＼&]

極差分析顯示，試驗各因素中對菌株JL-1生長影響最大的是溫度，其它依次為起始pH、接種量、裝液量，最優(yōu)組合為A2B2C3D1，在此條件下對菌株JL-1的生長進行試驗，結(jié)果顯示，該條件下3個重復的吸光值分別為1.281、1.309、1.323，平均值為1.304，高于任何實驗組，說明優(yōu)化實驗得到了較好的效果。通過平板計數(shù)得知，此時培養(yǎng)物中的細胞數(shù)量達到了3.98×109cfu/mL（表3）。

表3 優(yōu)化條件下活菌的計數(shù)

[重復＼&吸光值（OD600）＼&活菌數(shù)（×109cfu/mL）＼&重復1＼&1.281＼&4.15＼&重復2＼&1.309＼&3.97＼&重復3＼&1.323＼&3.82＼&平均＼&1.304＼&3.98＼&]

3 結(jié)論與討論

巨大芽孢桿JL-1是一株重要的解磷細菌，在生物有機肥的生產(chǎn)上有著重要的應用價值。本文對其生長的影響因素及生長特性進行了研究，得到如下結(jié)論：（1）單因子實驗結(jié)果顯示，菌株JL-1生長的最適溫度為25～30℃，最適pH為6.0～7.0，接種量為5%，裝液量為50mL/250mL，搖床轉(zhuǎn)速為220r/min。菌株JL-1接種后2h進入對數(shù)生長期，14～18h為穩(wěn)定期。（2）正交實驗結(jié)果顯示，各因素中對解磷菌JL-1生長影響的大小依次為：A>B>C>D，最優(yōu)組合為A2B2C3D1，該條件下培養(yǎng)物中的菌體密度達到了3.98×109cfu/mL。（3）從實驗結(jié)果來看，菌株JL-1是一株好氧菌，培養(yǎng)基中的溶氧對其生長具有明顯的影響，若應用于工業(yè)生產(chǎn)，為獲得高細胞密度發(fā)酵產(chǎn)物仍需對其攪拌速率、通氣量等因素作進一步的研究。

參考文獻

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（責編：張宏民）