徐 韜 徐先祥 林小鳳 吳雅清 許瑞安

福建省泉州市華僑大學(xué)分子藥物學(xué)研究所＆分子藥物教育部工程研究中心，福建 泉州 362021

隨著抗生素在臨床的廣泛使用，耐藥問題也日益突出，尋找新的抗菌藥物或逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥已成為國際上研究的熱點(diǎn)。不少研究顯示中藥具有抗菌活性或逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥的作用，不少中藥具有抗菌活性，而且具有副作用小、很少發(fā)生耐藥現(xiàn)象等優(yōu)點(diǎn)［1］。賽霉安散由石膏、朱砂等藥組成，具有清熱止血、收斂祛濕、化腐生肌功效，臨床對于感染具有抗菌的效果［2］。本文從朱砂及石膏單味中藥入手，研究賽霉安的抑菌性能，為今后賽霉安的二次開發(fā)提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株

革蘭氏陽性菌:金黃色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach)，非耐藥表皮葡萄球菌 (Methicillin sensitive Staphylococcus aureus)CMCC26069，枯草芽孢桿菌 (B acillus subtilis)。革蘭氏陰性菌:大腸埃希氏菌 (Escherichia coli)CMCC44825，銅綠假單孢桿菌 (Pseudomonas aeruginosa)CICC 10204，肺炎克雷伯氏菌 (Klebsiella pneumoniae)CICC 10033，普通變形桿菌 (Proteus vulgaris)AS 1．1527，菌株購自廣東省微生物種質(zhì)資源庫。

1.2 藥品

朱砂、石膏，由泉州亞泰制藥有限公司提供。左氧氟沙星，南陽普康集團(tuán)衡淯制藥有限責(zé)任公司提供。

1.3 實驗儀器

TS 100倒置顯微鏡，Nikon公司。DHG－9076干燥箱，上海圣欣科學(xué)儀器公司。DHP－9052恒溫培養(yǎng)箱，上海圣欣科學(xué)儀器公司。恒溫震蕩培養(yǎng)箱，Thermo公司。

2 方法

2.1 菌液制備

取各菌種的凍存菌種活化，接種到含10 ml LB液體培養(yǎng)基的試管中，37℃震蕩培養(yǎng)過夜，取100μl菌液接種到20μl LB固體培養(yǎng)基的平皿，培養(yǎng)過夜，挑取單菌落，10 ml LB液體培養(yǎng)基，37℃振蕩培養(yǎng)過夜;取以上活化后菌液1ml作為菌懸液母液。

菌懸液a:吸取菌懸液母液50μl于950μl生理鹽水中混勻，計數(shù)后調(diào)節(jié)菌濃為106CFU/ml，用于抑菌圈測定。

菌懸液b:吸取菌懸液母液500μl，加入到10ml LB液體培養(yǎng)基中，計數(shù)后調(diào)節(jié)菌濃為106CFU/ml，用于最小抑菌濃度 (MIC)的測定。

2.2 抑菌圈測定

用無菌移液器吸取菌懸液a 100μl滴加于LB瓊脂培養(yǎng)基表面，用涂布棒涂布均勻，靜置5min后，每板放置經(jīng)高壓滅菌的牛津杯4個，放置5min，待菌液浸入且牛津杯吸附牢固后，每杯加100μl的各制備藥液，陰性對照杯為PH值調(diào)為7的模擬人工腸液，陽性對照為左氧氟沙星。置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，測定抑菌圈直徑。

2.3 最小抑菌濃度 (MIC)的測定［4］

96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔加100 μl菌懸液b，用PH值調(diào)為7的模擬人工腸液分別稀釋各藥品原制備液，采用二倍稀釋法分別稀釋至8個濃度梯度，分別加入到96孔板中，每孔100μl，置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，測定最小抑菌濃度 (MIC)。加樣時，每列為一個藥濃度，第一列設(shè)為LB液體培養(yǎng)基空白對照，第二列為左氧氟沙星陽性對照，第三列為未加藥的空白菌對照。每行為同一菌種，自上而下依次為銅綠假單孢桿菌 (綠膿桿菌)、肺炎克雷伯氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、非耐藥表皮葡萄球菌、普通變形桿菌。

表1 測MIC試驗中藥品稀釋終濃度 (mg/ml)

2.4 統(tǒng)計學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 抑菌圈測定結(jié)果

朱砂可顯著抑制銅綠假單孢桿菌、肺炎克雷伯氏菌，抑菌圈直徑可達(dá)35mm以上;對于枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、非耐藥表皮葡萄球菌、普通變形桿菌具有較好的抑制效果，抑菌圈直徑范圍在12－20mm之間;對于大腸埃希氏菌，未檢測到抑制效果。且對于銅綠假單孢桿菌、枯草芽孢桿菌、非耐藥表皮葡萄球菌的抑制效果要好于陽性對照。

石膏制備液對金黃色葡萄球菌、普通變形桿菌有抑制效果，但均不顯著，見表2。表中數(shù)據(jù)為受試菌抑菌圈的直徑(±s)mm。

表2 朱砂、石膏制備液抑菌效果

3.2 最小抑菌濃度 (MIC)的測定結(jié)果

微量倍比稀釋法測定朱砂與石膏制備液對各菌株的最小抑菌濃度 (MIC)，與抑菌圈的實驗結(jié)果相比，朱砂與石膏制備液對各菌株的最小抑菌濃度具有與之類似的結(jié)果，朱砂制備液對于肺炎克雷伯氏菌以及銅綠假單孢桿菌有較好的抑制效果，MIC較其他菌種要低;石膏的制備液對于普通變形桿菌以及金葡菌有較弱的抑制效果，對于其他菌種基本無效。具體結(jié)果見表3。

表3 朱砂、石膏最小抑菌濃度 (MIC)測定結(jié)果

4 討論

朱砂與石膏均為重要的傳統(tǒng)礦物中藥，兩種也是中藥復(fù)方賽霉安中主要藥物。朱砂外用具有清熱解毒功效，在胃腸道中可以溶出汞的各種含硫配合物［4］;石膏“生用不但能治病，且善于治瘡，且善于解毒”［5］。從本文實驗結(jié)果可以看出:朱砂體外對于傷口感染常見的菌種均有較好的抑制效果，以對肺炎克雷伯氏菌以及銅綠假單孢桿菌的抑制效果最為顯著，符合朱砂清熱解毒的功效特點(diǎn)。但石膏體外對于多數(shù)的受試菌株均無抑制效果，只對于普通變形桿菌以及金葡菌有較弱的抑制效果，其具體原因有待進(jìn)一步研究。由本文結(jié)果提示，可以考慮在控制朱砂用量以及其毒性的前提下，運(yùn)用君臣佐使的指導(dǎo)原則，適當(dāng)提高朱砂在重新組方的成藥中的比例，從而增強(qiáng)賽霉安的抑菌效果。

［1］蔡燕，邢艷，謝文光．中藥抗菌作用研究進(jìn)展［J］．中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2011;8(6):9－10．

［2］江絮萍．賽霉安散局部治療在剖宮產(chǎn)術(shù)后切口感染28例效果觀察［J］．山東醫(yī)藥，2011;51(2):17．

［3］Soultos N，Tzikas Z，Christaki E，et al．The effect of dietary oregano essential oil on microbial growth of rabbit carcasses during refrigerated storage［J］．Meat Science，2009，81:474 －478．

［4］曾克武，王旗，楊曉達(dá)，等．朱砂溶出的體外研究［J］．中國中藥雜志，2007;32(3):231．

［5］王世民．石膏的外用方法［J］．山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008;9:426－27．