邢 莉,柳志文,孫早喜,杜永秀,蔡秋雁,黃 茜,潘英瑜

(1.中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬?？谑腥嗣襻t(yī)院口腔中心，?？?570208；2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院口腔中心，長(zhǎng)沙 410011；3.海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院外科，?？?570102)

·經(jīng)驗(yàn)交流·

Nd:YAG激光對(duì)根管內(nèi)糞腸球菌殺菌效果的實(shí)驗(yàn)研究*

邢 莉1,柳志文2△,孫早喜3,杜永秀1,蔡秋雁1,黃 茜1,潘英瑜1

(1.中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬?？谑腥嗣襻t(yī)院口腔中心，?？?570208；2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院口腔中心，長(zhǎng)沙 410011；3.海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院外科，?？?570102)

目的分析脈沖型Nd:YAG激光對(duì)根管內(nèi)糞腸球菌的殺傷效果。方法將感染3周的32顆牙隨機(jī)分為A、B、C、D共4組。A、B、C組的激光照射劑量分別為1.5、2.1、2.1 W，單次照射30 s，A、B組均照射1次，C組照射3次，每次間隔15 s；D組為2.5%NaOCl沖洗的對(duì)照組。各組選2個(gè)標(biāo)本進(jìn)行電鏡分析。結(jié)果A、B組根管內(nèi)細(xì)菌量明顯減少，但有少量細(xì)菌存留于牙本質(zhì)小管內(nèi)；C組根管腔內(nèi)細(xì)菌大部分被殺滅，無細(xì)菌存留于牙本質(zhì)小管內(nèi)；D組根管腔內(nèi)細(xì)菌大部分被殺滅，較多細(xì)菌存留于牙本質(zhì)小管。結(jié)論脈沖型Nd:YAG激光照射可有效地殺滅根管內(nèi)的糞腸球菌，特別是重復(fù)照射效果更好。

腸球菌，糞；激光；根食療法

研究表明，糞腸球菌是頑固性或繼發(fā)性根管內(nèi)感染的主要致病菌，是評(píng)價(jià)各種感染清除措施時(shí)常用的目標(biāo)菌種[1-5]。傳統(tǒng)的糞腸球菌清除方法的研究主要集中于機(jī)械預(yù)備清除和不同種類化學(xué)藥物的沖洗，如次氯酸鈉、氯已定等殺菌。Nd:YAG激光因具有良好的滅菌、去除玷污層、封閉牙本質(zhì)小管的作用而被廣泛研究[6-7]。本實(shí)驗(yàn)用不同劑量、不同作用時(shí)間的脈沖Nd:YAG激光進(jìn)行根管糞腸球菌消毒，并以電鏡分析Nd:YAG激光的殺菌效果。

1 材料與方法

1.1 材料 離體上頜中切牙32顆，單根管、根尖孔發(fā)育完全，無近髓齲壞死或充填體，未做過牙髓治療，牙根無裂痕。糞腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC29212(中國(guó)微生物菌種保藏中心)。

1.2 主要儀器 脈沖Nd:YAG激光治療儀(HSM-Ⅲ型，四川航天制導(dǎo)公司)，S-3000N型掃描電子顯微鏡(日本Hitachi公司)。

1.3 糞腸球菌根管感染模型 將準(zhǔn)備好的上頜中切牙進(jìn)行高溫、高壓滅菌(121 ℃、15 MPa、15 min)。取樣本用BHI肉湯培養(yǎng)48 h，確定根管內(nèi)滅菌徹底。以BHI血瓊脂增菌培養(yǎng)ATCC29212共24 h。取McFarland為2(6.0×108CFU/mL)的菌液接種于無菌根管內(nèi)(40 μL /根管)，37 ℃培養(yǎng)，隔日更換新鮮菌液共21 d。取樣本進(jìn)行電鏡檢查，觀察根管糞腸球菌感染情況。

1.4 分組與治療 被感染的32顆離體上頜中切牙隨機(jī)分為4組，各組均8顆。A、B、C組脈沖Nd:YAG激光照射劑量分別為1.5、2.1、2.1 W，每次照射時(shí)間為30 s；A、B組均照射1次，C組照射3次，每次間隔15 s；D組為對(duì)照組，以2.5% NaOCl沖洗消毒。

1.5 電鏡標(biāo)本的制備 用2.5%戊二醛磷酸鹽緩沖液4 ℃固定治療前后的標(biāo)本4 h并保存。金鋼砂車針沿標(biāo)本牙根長(zhǎng)軸縱行劈開牙根，暴露根管內(nèi)牙本質(zhì)壁。以乙醇梯度脫水、丙酮脫水后，CO2臨界點(diǎn)干燥，離子濺射儀噴金。

1.6 電鏡分析 電鏡下觀察治療前后根管中1/3牙本質(zhì)壁表面、管壁縱剖面及牙本質(zhì)小管內(nèi)的糞腸球菌情況。由于標(biāo)本縱剖面存在高低不平區(qū)域，非均一平面，為取得清晰的觀察影像，在1.5～5.5 K不同倍數(shù)下觀察。

2 結(jié) 果

2.1 脈沖型Nd:YAG激光照射前 根管腔內(nèi)細(xì)菌大量生長(zhǎng)，細(xì)菌形成集落群，細(xì)菌間以絲狀纖維聯(lián)接成生物膜(圖1A)，細(xì)菌以鏈條式侵入牙本質(zhì)小管深處(圖1B)。

A:3.0 K×;B:3.5 K×。

圖1 激光照射前

2.2 A組治療后 根管內(nèi)細(xì)菌生物膜結(jié)構(gòu)破壞，細(xì)菌量明顯減少，但仍可見較多散在的細(xì)菌(圖2A)，而牙本質(zhì)小管內(nèi)僅觀察到少量細(xì)菌存留(圖2B)。

A:3.5 K×;B:5.5 K×。

圖2 A組治療后

2.3 B組治療后 根管腔內(nèi)細(xì)菌生物膜結(jié)構(gòu)被破壞，細(xì)菌量明顯減少(圖3A)，牙本質(zhì)小管內(nèi)少量細(xì)菌存留(圖3B)。

A:5.0 K×;B:1.5 K×。

圖3 B組治療后

2.4 C組治療后 根管腔內(nèi)絕大部分細(xì)菌被裂解(圖4A)，牙本質(zhì)小管內(nèi)未觀察到細(xì)菌(圖4B)。

A:5.0 K×;B:3.5 K×。

圖4 C組治療后

2.5 2.5%NaOCl沖洗組情況 根管腔內(nèi)細(xì)菌大部分溶解(圖5A)，牙本質(zhì)小管深處見較多細(xì)菌(圖5B)。

A:2.0 K×;B:3.0 K×。

圖5 NaOCl沖洗后

3 討 論

牙髓病、根尖周病的主要病因之一是混合細(xì)菌感染，有效地清除根管內(nèi)細(xì)菌可提高治療效果。清除根管內(nèi)細(xì)菌的方式通常是機(jī)械預(yù)備、化學(xué)沖洗和藥物消毒。盡管機(jī)械預(yù)備和化學(xué)沖洗能去除根管內(nèi)大部分細(xì)菌、壞死牙髓組織，但無法清除牙本質(zhì)小管深處等細(xì)微結(jié)構(gòu)內(nèi)的細(xì)菌及其毒素。氫氧化鈣制劑雖然具有良好的殺菌性、安全性，刺激性小，但溶解性較差，發(fā)揮效能的鈣離子與氫氧根離子釋放的速度緩慢，是慢性消毒劑[8-12]。因此，學(xué)者們不斷地探索新的根管消毒方法：微波消毒、高頻電刀消毒、激光等。脈沖Nd:YAG激光具有柔韌精細(xì)的光纖輸出末端，方便口腔環(huán)境的臨床操作，能夠插入根管至根尖孔區(qū)，對(duì)根管起到消毒、清理、成形、封閉牙本質(zhì)小管口、減輕術(shù)后疼痛反應(yīng)并促進(jìn)根尖周組織的愈合等，在根管治療中獨(dú)具優(yōu)勢(shì)[4,6-7，9]。

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Nd:YAG激光和次氯酸鈉溶液均能破壞根管腔內(nèi)糞腸球菌生物膜結(jié)構(gòu)，起到殺菌效應(yīng),與國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的結(jié)果基本一致[4,6-7,11,13]。激光重復(fù)照射時(shí)，其殺菌效果更佳，特別是對(duì)牙本質(zhì)小管深處細(xì)菌的作用效果強(qiáng)，如C組的Nd:YAG激光治療效果優(yōu)于A、B組。盡管2.5%次氯酸鈉沖洗治療也具有根管腔內(nèi)細(xì)菌殺菌效果，但對(duì)牙本質(zhì)小管深處細(xì)菌的殺滅效果差，如D組治療后，牙本質(zhì)小管深處仍有較多細(xì)菌，而A、B組較少。激光劑量與殺菌效果無明顯關(guān)系，如激光劑量為1.5、2.1 W單次治療時(shí)，A、B組根管內(nèi)牙本質(zhì)小管內(nèi)可觀察到僅有少量細(xì)菌存留，而D組牙本質(zhì)小管深處可觀察到仍存留有較多的細(xì)菌。此外，激光殺菌快速、便捷，不良反應(yīng)少，而次氯酸鈉具有較強(qiáng)的刺激性和腐蝕性，沖出根尖孔時(shí)對(duì)細(xì)胞有損害。由此可見，使用激光進(jìn)行根管消毒、根管內(nèi)感染的控制較次氯酸鈉具有一定的優(yōu)越性。

脈沖Nd:YAG激光可快速、有效地殺滅感染根管內(nèi)生物膜狀態(tài)下的糞腸球菌，激光穿透力強(qiáng)，可作用于根管深部，對(duì)侵入牙本質(zhì)小管深處的細(xì)菌殺滅效果更佳,在根管治療中具有廣闊的應(yīng)用前景[6-7，9]。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2015.26.027

海口市重點(diǎn)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2009-049-4)。

：邢莉(1973-)，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事口腔基礎(chǔ)與臨床研究?！?/p>

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R781

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1671-8348(2015)26-3682-03

2015-03-08

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