陳凱

【摘要】目的：分析生鱉甲與醋鱉甲抗肝纖維化有效物質(zhì)部位HPCE指紋圖譜。方法：通過毛細管區(qū)電泳法，57cm×75μm的熔融未涂層石英毛細管，100mmol/L三氰甲基氨基甲烷-20mmol/L磷酸氫二鈉的運行緩沖液，18KV的分離電壓，254nm的檢測波長，20℃的柱溫，分別構(gòu)建10批醋鱉甲與生鱉甲有效物質(zhì)部位HPCE指紋圖譜，以此進行相關(guān)對比分析。結(jié)果：17個生鱉甲指紋圖譜共有峰，094以上的HPCE圖譜相似度;19個醋鱉甲指紋圖譜共有峰，0.93以上的HPCE圖譜相似度;但對照10批醋鱉甲與生鱉甲指紋圖譜，兩批相似度下降，為086-093。此外，10批生鱉甲與醋鱉甲指紋圖譜相似度也下降，為086～092。結(jié)論：炮制鱉甲前后含量與化學(xué)成分都會發(fā)生變化，而且在炮制后會有新有效成分產(chǎn)生。

【關(guān)鍵詞】 鱉甲，指紋圖譜，HPCE，有效成分

【中圖分類號】R2841【文獻標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）01-0009-01

鱉甲為鱉科動物鱉的背甲，具有軟堅散結(jié)、滋陰潛陽以及除蒸退熱功效，常用于治療肝纖維化，入藥一般為醋制鱉甲[1]。中醫(yī)認為，生鱉甲具有非常強的潛陽熄風(fēng)與養(yǎng)陰清熱功效，主要用于虛風(fēng)內(nèi)動、內(nèi)傷虛熱或者熱病傷陰等病癥。

1實驗材料

5000型BeckmanP/AsystemHPCE儀;FD-1A-50冷凍干燥機;78-1型磁力加熱攪拌器;KQ-250B超聲波清洗器。水為雙蒸水，鱉甲藥材來自浙江衢化醫(yī)院，其中所選10批醋鱉甲是根據(jù)《中華藥典》由10批生鱉甲炮制而成。

2方法與結(jié)果

21供試品溶液的制備稱取25g生鱉甲粉，加水200ml進行20min的超聲提取，抽濾，所留殘渣加10ml水，超聲10min，合并濾液，抽濾，冷凍，取凍干粉，加入少量水進行溶解，并放在透析膜中，200ml的純水膜外溶液，2次透析，5h/次，合并膜外溶液，同時冷凍干燥。對50mg/ml凍干粉水溶液進行精密稱取，在通過022μm的濾膜進行過濾，根據(jù)鱉甲供試品相同炮制方法，對醋鱉甲供試品溶液進行炮制。

22有效組分對照組與對照品溶液的制備從本實驗中鱉甲有效抗肝纖維化物質(zhì)中所分離出的活性五肽，進行01mg/ml濃度水溶液的配制，并將其視為對照品溶液;同時把實驗中藥理篩選與經(jīng)柱色譜分離出的活性組酚酞，進行01mg/ml濃度水溶液的配制，并將其視為有效組分對照組溶液，對兩溶液進行分析對比。

23色譜條件57cm×75μm的熔融未涂層石英毛細管，49cm的有效長度，100mmol/L優(yōu)級純?nèi)杓谆被淄?20mmol/L磷酸氫二鈉的運行緩沖液，18KV的分離電壓，254nm的檢測波長，20℃的柱溫[2]。

24指紋圖譜的測定

241生鱉甲有效物質(zhì)部位HPCE指紋圖譜通過毛細管區(qū)電泳法對供試品溶液進行制備，并根據(jù)以上色譜條件對生物鱉有效物質(zhì)部位HPCE進行測定，對電泳圖進行30min的記錄。對17個共有峰進行標(biāo)定，指紋圖譜中峰面積較大與較穩(wěn)定的14號峰屬于參照峰s，對各共有峰保留時間和相對峰面積進行測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，17個生鱉甲指紋圖譜共有峰，存在094以上的HPCE圖譜相似度。

242醋鱉甲有效物質(zhì)部位HPCE指紋圖譜 ?采用相同方法對供試品溶液進行制備，并根據(jù)以上色譜條件對生物鱉有效物質(zhì)部位HPCE進行測定，對電泳圖進行30min的記錄。對19個共有峰進行標(biāo)定，指紋圖譜中峰面積較大與較穩(wěn)定的15號峰屬于參照峰s，對各共有峰保留時間和相對峰面積進行測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，19個生鱉甲指紋圖譜共有峰，存在093以上的HPCE圖譜相似度。

對照10批醋鱉甲與生鱉甲指紋圖譜，兩批相似度下降，為086-093。此外，對照10批生鱉甲與醋鱉甲指紋圖譜，兩批相似度也下降，為086-092。由此表明，鱉甲醋制前后，其含量與化學(xué)成分存在很大差異性。

3討論

實驗對炮制鱉甲前后的HPCE指紋圖譜進行對比與分析發(fā)現(xiàn)，生鱉甲與醋鱉甲抗肝纖維化有效物質(zhì)部位HPCE指紋圖譜峰面積與指紋峰數(shù)量都有非常大的差異性，而且醋鱉甲指紋峰要比生鱉甲多，由此表明，醋鱉甲中含有新活性五肽HGRFG指紋峰，從而闡釋了醋鱉甲抗桿纖維化要比生鱉甲效果好，同時也為醋鱉甲治療肝纖維化提供有效科學(xué)依據(jù)，為鱉甲醋法炮制機理進行深入探討奠定良好基礎(chǔ)。

參考文獻

[1] 高建蓉，張赤志，邵志華，等.鱉甲對肝星狀細胞增殖影響的研究[J].實用醫(yī)學(xué)雜志，2007，23（11）：1618-1620.

[2]陳進文，高建蓉，王光忠，等.鱉甲抗肝纖維化有效物質(zhì)部位高效毛細管電泳指紋圖譜研究[J].中藥材，2009，32（6）：848-851.

（收稿日期：20131115）