劉月平李心亮蔡俊龍鄭 兵謝芳一

（1.湖南省兒童醫(yī)院，湖南 長沙 410007；2.湖南省中醫(yī)研究院，湖南 長沙 410013；3.湖南省懷化市第一人民醫(yī)院，湖南 懷化 418000）

·研究報告·

血府逐瘀湯對自發(fā)性高血壓大鼠血管重塑的影響*

劉月平1李心亮2△蔡俊龍3鄭 兵2謝芳一2

（1.湖南省兒童醫(yī)院，湖南 長沙 410007；2.湖南省中醫(yī)研究院，湖南 長沙 410013；3.湖南省懷化市第一人民醫(yī)院，湖南 懷化 418000）

目的觀察血府逐瘀湯對自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）血管形態(tài)學的影響并對其可能存在的降壓機制進行探索。方法將40只SHR按隨機數(shù)字表法隨機分成模型對照組，硝苯地平片組，血府逐瘀湯（中藥）高、中、低劑量組5組；另取8只Wistar大鼠作為空白對照組，上述動物均灌胃給予相應藥物，其中空白和模型對照組給予等量蒸餾水，連續(xù)6周。每周于固定時間采用無創(chuàng)血壓計檢測大鼠尾動脈收縮壓；放射免疫分析法測定血漿血管緊張素Ⅱ、醛固酮、6-酮前列環(huán)素及TXB2含量；HE染色顯微鏡拍照后檢測胸主動脈中膜厚度、血管內(nèi)徑并計算壁腔比。結(jié)果與空白組比較，模型組大鼠灌胃蒸餾水6周收縮壓持續(xù)升高，血漿TXB2含量、胸主動脈中膜厚度、壁腔比比值均顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，硝苯地平片組，中藥高、中、低劑量干預后大鼠收縮壓均顯著下降（P＜0.05或P＜0.01）；中藥高、中劑量組大鼠血漿血管緊張素Ⅱ、醛固酮含量顯著升高（P＜0.05）；中藥高、中、低劑量組大鼠血漿TXB2活性顯著降低（P＜0.01）；中藥高、中劑量組大鼠胸主動脈中膜厚度、壁腔比比值均顯著降低（P＜0.01）。結(jié)論血府逐瘀湯能夠顯著降低自發(fā)高血壓大鼠收縮壓，改善高血壓血管重塑。其降壓機制可能與阻斷血管緊張素Ⅱ與其受體結(jié)合以及糾正TXA2和PGI2失衡有關。

血府逐瘀湯 高血壓 血管緊張素Ⅱ TXB2PGI2自發(fā)性高血壓大鼠

高血壓?。╤ypertension）是一種以體循環(huán)動脈壓升高為主要特征的具有多重危險因素的綜合癥，它既是多種心、腦、腎等疾病的重要病因，又是心腦血管疾病最重要的危險因素，可影響心、腦、腎等重要臟器的結(jié)構(gòu)和功能，是心腦血管疾病死亡的重要原因之一［1］。高血壓血管重塑是在高血壓環(huán)境下動脈血管結(jié)構(gòu)和功能的適應性改變，主要包括血管壁增厚、壁腔比改變和微小動脈立體構(gòu)筑疏松，隨之產(chǎn)生血管功能的異常［2］?；A與臨床研究顯示血管重塑伴隨高血壓病的始終，是導致靶器官損害的直接原因［3］。2005年高血壓指南明確將頸動脈中膜厚度作為衡量高血壓患者靶器官損害的指標之一，強調(diào)了其在高血壓血管重塑中的重要性。血府逐瘀湯是活血化瘀經(jīng)典方，由桃仁、紅花、當歸、生地黃、牛膝、川芎、桔梗、赤芍、枳殼、甘草、柴胡組成，具有活血化瘀、行氣止痛的功效。臨床上常用于治療冠心病心絞痛、風濕性心臟病、腦血栓等?，F(xiàn)代醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)血府逐瘀湯對高血壓有較好療效［4］。臨床研究顯示血府逐瘀湯治療高血壓頭痛（瘀血證）者，能夠降低血壓水平，改善患者證候積分，提高生活質(zhì)量［5］，對高血壓內(nèi)皮功能障礙也有一定效果［6］。但是其降壓作用機制尚不明確。本研究主要通過觀察血府逐瘀湯對SHR尾動脈收縮壓的影響對血府逐瘀湯的有效性進行系統(tǒng)評價；通過觀察血府逐瘀湯對自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）腎素血管緊張素系統(tǒng)、血栓素B2（TXA2）與前列環(huán)素（PGI2）平衡的影響來探討血府逐瘀湯可能存在的降壓作用機制；觀察血府逐瘀湯對SHR胸主動脈形態(tài)學的影響來研究血府逐瘀湯對高血壓血管重塑的影響?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 動物 40只SPF級自發(fā)性高血壓大鼠（SHR），雄性，6周齡，體質(zhì)量180～220 g；8只SPF級性Wisrar大鼠，雄性，6周齡，體質(zhì)量180～220 g，以上動物均購自北京維通利華實驗動物中心，許可證號SCXK（京）2012-0001。動物合格證號43004700012458。

1.2 藥品與試劑 血府逐瘀湯干膏粉（湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所中藥制劑室，批號120512）；硝苯地平片（購自長沙永康堂大藥房，批號20120813）；血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮、6-酮前列腺素F1α和TXA2放免試劑盒（購自中生北控生物制劑有限公司）。

1.3 儀器 BP-98A型無創(chuàng)血壓計 （北京阮龍科技有限責任公司），AY-120電子分析天平 （日本島津公司），TG16-WS臺式高速離心機（湖南湘儀有限責任公司），TS-12A型生物組織自動脫水機（湖北康隆電子科技有限責任公司），BM-V3型生物組織包埋機（湖北康隆電子科技有限責任公司），BM-Ⅷ型生物組織包埋機（冷凍臺）（湖北康隆電子科技有限責任公司），CS-VI組織攤片烤片機 （湖北康隆電子科技有限責任公司），BX43奧林巴斯生物顯微鏡（上海賴氏電子科技責任有限公司）

1.4 動物分組與給藥 分組：6周齡SHR 40只，Wistar大鼠8只，分籠飼養(yǎng)，每籠4只，適應性喂養(yǎng)3 d。將SHR按隨機數(shù)字表法隨機分成5組，每組8只，分別為模型對照組、陽性藥對照組（硝苯地平）、血府逐瘀湯（中藥）高、中、低劑量組；Wistar大鼠作為空白對照組。模型對照組、空白對照組，蒸餾水灌胃；陽性藥對照組，硝苯地平片3.6 mg（10 mL·kg）灌胃給藥；中藥高、中、低劑量組分別為2.4 g（10 mL·kg）、1.2 g（10 mL·kg）、0.6 g（10 mL·kg）灌胃給藥，連續(xù)10周。

1.5 血壓測量與取材 每周于固定時間測量大鼠血壓，方法如下：打開BP-98A無創(chuàng)血壓計電源，電加熱溫度設定為38℃，預熱30 min后將大鼠放入鼠套內(nèi)加熱10 min，將血壓探測器套在大鼠尾根部，待大鼠血壓穩(wěn)定后，取3 min內(nèi)連續(xù)且波動小于5的3個值求平均值作為大鼠血壓值。取材：給藥10周后將大鼠禁食不禁水12 h后，用肝素鈉抗凝采血管腹主動脈取血4 mL，搖勻，4℃3000 r/min離心15 min，取上清液，送湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院放免中心檢測血漿AngⅡ、醛固酮、6-酮前列腺素F1α、TXA2含量。摘取大鼠胸主動脈弓后約1 cm置于4%多聚甲醛溶液中固定。

1.6 胸主動脈形態(tài)學檢查 將摘取的動脈酒精梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，常規(guī)切片，HE染色后中性樹膠封片，顯微鏡下觀察，在統(tǒng)一放大10×40倍鏡下，測量腹主動脈血管中膜厚度（MT），按順時針方向測5個值取其均值；10×5倍鏡下測量血管內(nèi)徑（LD），計算血管中膜厚度/血管內(nèi)徑（MT/LD）比值。

1.7 統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示。兩組資料比較采用非配對t檢驗，多組資料比較采用One-way ANOVA統(tǒng)計方法進行分析，組問比較采用q檢驗。P＜0.05或P＜0.01為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組給藥6周后SHR收縮壓比較 見表1。結(jié)果示給藥前SHR各組血壓接近且均高于空白組，空白對照組大鼠蒸餾水給藥0周血壓無明顯變化。與空白對照組比較，模型對照組大鼠給藥蒸餾水6周血壓持續(xù)升高（P＜0.01）。與模型對照組比較，陽性對照組給藥硝苯地平6周血壓明顯下降（P＜0.01）；中藥高劑量組給藥6周血壓顯著降低（P＜0.01）；中藥中劑量給藥3周后血壓顯著降低（P＜0.05）。

2.2 各組SHR血漿血管緊張素Ⅱ、醛固酮、6-酮前列環(huán)素F1α、TXB2水平比較 見表2。 結(jié)果示與空白對照組比較，模型對照組大鼠血漿AngⅡ、TXB2含量均顯著升高（P＜0.01）。與模型對照組比較，中藥高、中劑量組大鼠血漿血管緊張素含量顯著升高 （P＜0.05）；SHR血漿AngⅡ水平升高，與模型對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05）；中藥高、中劑量組大鼠血漿TXB2水平顯著降低（P＜0.05）；中藥低劑量組給藥10周后，SHR血漿AngⅡ水平也略有升高，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表1 各組SHR收縮壓比較（mmHg，±s）

表1 各組SHR收縮壓比較（mmHg，±s）

與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組別 n空白對照組 8模型對照組 8陽性對照組 8 5 W 6 W 1 2 4 . 3 ± 1 2 . 8 1 2 8 . 3 ± 7 . 3 1 9 6 . 8 ± 1 2 . 6**2 0 8 . 4 ± 6 . 3**1 4 0 . 3 ± 4 . 5**△△1 4 5 . 4 ± 6 . 3**△△中藥高劑量組 8 1 6 2 . 6 ± 9 . 5**1 6 2 . 8 ± 1 1 . 4**△△1 6 5 . 3 ± 9 . 6**△△1 6 8 . 3 ± 1 7 . 3**△△1 6 9 . 6 ± 8 . 7**△△1 6 8 . 8 ± 1 3 . 3**△△1 7 0 . 8 ± 7 . 7**△△中藥中劑量組 8 1 6 1 . 1 ± 9 . 3**1 7 0 . 4 ± 1 0 . 2**1 7 5 . 4 ± 1 2 . 0**1 7 5 . 5 ± 8 . 5**△1 7 9 . 2 ± 1 1 . 7**△1 8 5 . 3 ± 9 . 5**△1 8 8 . 8 ± 2 0 . 6**△中藥低劑量組 8 1 6 3 . 9 ± 1 2 . 7**1 7 8 . 8 ± 1 4 . 0**1 8 3 . 9 ± 1 2 . 1**1 8 8 . 7 ± 1 7 . 7**1 9 0 . 8 ± 1 6 . 2**1 9 1 . 8 ± 1 7 . 5**1 9 5 . 6 ± 1 4 . 5**0 W 1 W 2 W 1 2 3 . 9 ± 7 . 9 1 2 3 . 1 ± 5 . 8 1 2 4 . 7 ± 4 . 4 1 6 2 . 8 ± 1 3 . 6**1 7 4 . 5 ± 8 . 7**1 7 9 . 1 ± 8 . 7**1 6 2 . 7 ± 1 1 . 6**1 3 9 . 7 ± 1 0 . 1*△△1 4 0 . 6 ± 7 . 9*△△3 W 1 2 3 . 7 ± 4 . 8 1 8 4 . 9 ± 8 . 7**1 3 9 . 5 ± 6 . 2*△△4 W 1 2 3 . 0 ± 9 . 9 1 8 9 . 3 ± 1 0 . 7**1 3 6 . 5 ± 8 . 2**△△

表2 各組SHR腎素-血管緊張素指標及TXA2與PGI2水平的比較（±s）

表2 各組SHR腎素-血管緊張素指標及TXA2與PGI2水平的比較（±s）

組別 n空白對照組 8模型對照組 8陽性對照組 8 6 -K -P G F 1 α（n g / L）5 2 . 5 9 ± 1 5 . 4 1 6 5 . 7 6 ± 2 2 . 6 7 5 5 . 3 1 ± 1 4 . 9 8中藥高劑量組 8 1 4 5 1 . 4 3 ± 7 0 . 8 3△2 . 0 2 ± 1 . 0 6**2 6 8 . 4 9 ± 1 9 3 . 2 7△△5 4 . 7 0 ± 1 9 . 0 4中藥中劑量組 8 1 4 4 7 . 7 4 ± 5 8 . 9 9△2 . 1 4 ± 1 . 0 5**3 1 6 . 4 4 ± 3 1 9 . 5 7△5 9 . 9 8 ± 2 3 . 1 1中藥低劑量組 8 1 4 0 9 . 6 9 ± 6 3 . 6 0 1 . 8 5 ± 1 . 0 3*4 5 6 . 1 1 ± 1 3 3 . 6 4*6 8 . 7 1 ± 1 6 . 6 2 T X B2（n g / L）1 4 3 4 . 3 6 ± 9 4 . 2 9 0 . 3 3 ± 0 . 1 2 2 9 4 . 9 7 ± 2 4 7 . 3 4 1 3 7 4 . 6 5 ± 7 7 . 2 1**1 . 4 6 ± 1 . 4 6*4 9 7 . 2 9 ± 6 8 1 . 1 0**1 3 8 4 . 3 3 ± 8 6 . 4 3**1 . 4 3 ± 1 . 0 7*3 6 9 . 4 3 ± 3 4 7 . 6 2*△血管緊張素Ⅱ（n g / L）醛固酮（p m o l / L）

2.3 各組SHR胸主動脈形態(tài)學比較 見表3，圖1，圖2。與空白對照組比較，模型對照組大鼠胸主動脈中膜厚度，壁腔比比值均顯著升高（P＜0.01）。與模型對照組比較，中藥高、中、低劑量組大鼠胸主動脈中膜厚、壁腔比比值均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。

表3 血府逐瘀湯對SHR胸主動脈血管重塑的影響（±s）

表3 血府逐瘀湯對SHR胸主動脈血管重塑的影響（±s）

組別 n空白對照組 8模型對照組 8陽性對照組 8 M T（μ m） L D（半徑）（μ m） M T / L D 3 4 7 . 1 4 ± 3 7 . 3 2 2 6 6 7 . 4 0 ± 4 0 1 . 2 2 0 . 1 3 ± 0 . 0 2 6 3 0 . 5 8 ± 2 3 3 . 7 2**3 0 3 3 . 8 3 ± 4 2 0 . 2 4 0 . 2 1 ± 0 . 0 7**5 1 9 . 9 2 ± 1 2 5 . 6 3**2 7 3 1 . 3 4 ± 3 5 7 . 6 5 0 . 1 9 ± 0 . 0 3**中藥高劑量組 8 3 4 2 . 4 5 ± 5 1 . 6 0△△2 7 3 5 . 7 3 ± 2 6 7 . 5 2 0 . 1 3 ± 0 . 0 2△△中藥中劑量組 8 4 2 9 . 6 1 ± 1 0 3 . 8 7△2 8 9 7 . 6 6 ± 5 9 1 . 1 9 0 . 1 6 ± 0 . 0 7#中藥低劑量組 8 4 9 8 . 8 1 ± 8 4 . 4 9△2 9 9 0 . 3 0 ± 4 8 6 . 9 9 0 . 1 6 ± 0 . 0 2#

圖1 血府逐瘀湯對SHR胸主動脈形態(tài)學的影響（×500）

圖2 血府逐瘀湯對SHR胸主動脈形態(tài)學的影響（×400）

3 討 論

3.1 動物模型的選擇與血府逐瘀湯的有效性 SHR因其與人類原發(fā)性高血壓有許多相似之處而被認為是研究人類原發(fā)性高血壓的最佳動物模型，現(xiàn)已被廣泛應用于高血壓發(fā)病機制和抗高血壓藥物療效的實驗研究中［7］。本實驗以SHR為動物模型，對血府逐瘀湯有效性進行了評價。結(jié)果顯示血府逐瘀湯可顯著降低SHR收縮壓，且其降壓效果與給藥劑量成正比。

3.2 血府逐瘀湯對SHR腎素-血管緊張素系統(tǒng)的影響 腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）是對血壓進行調(diào)節(jié)的最重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)［8］。AngⅡ是已知最強的縮血管活性物質(zhì)之一，同時也是RAS中最重要的組成部分。AngⅡ主要是通過與血管緊張素1型受體（AT1）結(jié)合，促進AT1表達，作用于血管平滑肌，可使全身微動脈收縮，動脈壓升高。AngⅡ還可強烈刺激腎上腺皮質(zhì)球狀帶細胞促進其合成和釋放醛固酮，醛固酮可促進腎小管對Na+的重吸收，使細胞外液數(shù)量增加引起水納潴留。本實驗的結(jié)果顯示血府逐瘀湯給藥后SHR血壓顯著降低的同時，血漿中AngⅡ含量顯著上升，且給藥劑量越高血漿中AngⅡ含量越高。眾所周知，血管緊張素Ⅱ升高與血壓升高之間的關鍵是AngⅡ與其AT1結(jié)合而激活達到收縮血管、升高血壓的目的。同時血府逐瘀湯給藥量越大其AngⅡ含量高。另有大量研究顯示AngⅡ受體拮抗劑（ARB）在給藥后普遍出現(xiàn)血漿血管緊張素含量升高的現(xiàn)象［9-10］，原因是AngⅡ受體拮抗劑可競爭性與AngⅡ受體結(jié)合而造成血漿局部AngⅡ含量升高［11］。因此筆者推測血府逐瘀湯是通過競爭性拮抗AngⅡ與AT1體結(jié)合而達到降血壓的目的。醛固酮是RAS下游的重要組成部分，通過與組織中的鹽皮質(zhì)激素受體結(jié)合而參與維持機體的水和電解質(zhì)平衡。過量的醛固酮可導致心臟、血管、腎臟等重要臟器損傷。給予血府逐瘀湯后，SHR血漿中醛固酮含量略有上升，可能是由AngⅡ含量升高引起的。

3.3 血府逐瘀湯對SHR血液TXA2與前列環(huán)素平衡的影響 TXB2和6-酮前列環(huán)素F1α分別是TXA2和PGI2的穩(wěn)定代謝產(chǎn)物，可代表體內(nèi)TXA2與PGI2活性。在生理狀態(tài)下二者保持動態(tài)平衡。當因TXA2含量上升而打破上述動態(tài)平衡可引起血管收縮、血壓升高。研究表明TXA2和PGI2失衡是高血壓重要的發(fā)病的機制［12］。本實驗結(jié)果顯示血府逐瘀湯在不影響PGI2活性的前提下能夠明顯降低SHR血漿中TXA2活性，提示其能有效地抑制血小板粘附，降低血液黏度糾正TXA2和PGI2失衡而達到降低血壓的目的。

3.4 血府逐瘀湯對SHR血管重塑的影響 血管重塑是臨床上預測高血壓靶器官損害的重要指標之一，是血管為適應血壓的改變對形態(tài)和功能的自我調(diào)整，主要包括血管細胞的改變和細胞外基質(zhì)的改變過程。高血壓血管重塑是指高血壓所導致的血管結(jié)構(gòu)和功能的異常，主要包括：血管壁增厚、血管壁/管腔直徑比值增大、小動脈立體構(gòu)筑疏松，隨之產(chǎn)生血管功能障礙［13］。高血壓血管重塑是高血壓重要的發(fā)病機制之一。本實驗的結(jié)果顯示血府逐瘀湯給藥后能夠顯著降低SHR胸主動脈厚度、降低壁腔比比值，說明血府逐瘀湯能夠有效逆轉(zhuǎn)高血壓血管重塑，從而降低血壓，降低靶器官損害。

綜上所述，血府逐瘀湯其降壓作用機制可能是通過爭性拮抗AngⅡ與AT1受體結(jié)合、糾正TXA2和PGI2失衡而達到降低血壓的目的；通過逆轉(zhuǎn)高血壓血管重塑而降低靶器官損害。

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A Preliminary Study of the Anti-hypertensive Mechanism of Xuefu Zhuyu Decoction on SHR

LIU Yueping，LI Xinliang，CAI Junlong，et al. Children′s Hospital，Hunan，Changsha 410007，China

Objective：To study the antihypertensive effect of hospital preparation of Xuefu zhuyu Decoction on spontaneously hypertensive rats and preliminary inquiry its hypotensive mechanism.Methods：40 spontaneously hypertensive rats were randomly divided into 5 groups-the control group，the nifedipine group，groups of Xuefu zhuyu Decoction high，medium and low dose with intragastric administration.8 wistar rats as the blank control group were given distilled water for 6 weeks.In the fixed time every week，the systolic pressure of rats′tail artery were tested with Sphygmomanometer，as well as the content of AngiotensinⅡ，aldosterone，6-Keto-PGF1αand TXB2with radioimmunoassay.Taken photos by HE staining microscope，media thickness of thoracic aorta，blood vessel diameter were also tested and the ratio of wall to cavity was calculated.Results：Compared with the control group，the systolic pressure of the model group was constantly increasing after Ig distilled water for 6 weeks，as well as the content of TXB2in the Plasma，media thickness of thoracic aorta，ratio of wall to cavity，with statistical significance（P＜0.01）.Compared with the model group，the systolic pressure of the groups of nifedipine and Xuefu zhuyu Decoction high，medium and low dose decreased obviously，with statistical significance（P＜0.05 or P＜0.01）.In the groups of Xuefu zhuyu Decoction high，medium and low dose，AngiotensinⅡ，the content of aldosterone increased obviously（P＜0.05）and TXB2in the Plasma，as well as media thickness of thoracic aorta，ratio of wall to cavity，decreased obviously（P＜0.01），with statistical significance.Conclusion：Xuefu zhuyu Decoction can significantly reduce systolic pressure of spontaneous hypertensive rats and improve the reshape of hypertensive vascular.The hypotensive mechanism may related with the blocking-up of the combination of AngiotensinⅡand its recipient and correcting the unbalance of TXA2and PGI2.

Xuefu zhuyu Decoction；Hypertension；Angiotensin II；TXB2；PGI2；Spontaneous hypertensive rat

R285.5

A

1004-745X（2015）08-1376-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.08.023

2015-04-25）

湖南省中醫(yī)藥研究院院級課題

△通信作者（電子郵箱：hankey001＠163.com）