宋雅文 江龍 謝雪 王鐵霖 馬嘉瑜 曹瑩月 母波

川北醫(yī)學(xué)院，四川南充 637000

泡椒鳳爪中雙氧水含量測(cè)定及對(duì)1型糖尿病人的健康影響

宋雅文 江龍 謝雪 王鐵霖 馬嘉瑜 曹瑩月 母波

川北醫(yī)學(xué)院，四川南充 637000

目的該研究通過(guò)測(cè)定市場(chǎng)散售泡椒鳳爪中雙氧水含量殘留，觀察其對(duì)糖尿病小鼠器官造成的影響來(lái)判定泡椒鳳爪中殘留的雙氧水是否對(duì)糖尿病人健康有影響。方法通過(guò)高錳酸鉀滴定法檢測(cè)市場(chǎng)散售鳳爪中的雙氧水的殘留含量，并以不同濃度（1.0%、10%、15%）的雙氧水處理1型糖尿病模型小鼠兩周，斷頸法處死小鼠，摘取各組小鼠的腎臟，脾臟，胃部，肝臟制作病理切片。觀察不同組的炎癥反應(yīng)情況，血糖及細(xì)胞形態(tài)的改變。結(jié)果糖尿病小鼠飼喂不同濃度的雙氧水后均造成血糖濃度明顯升高，其中用15%的雙氧水飼喂的糖尿病小鼠血糖濃度升高了33%。HE染色病理切片，鏡下觀察，雙氧水濃度越高對(duì)糖尿病小鼠臟器損傷越嚴(yán)重，且胃腸道、腎臟、肝臟損害較重，但所有實(shí)驗(yàn)組未見到細(xì)胞形態(tài)明顯改變。結(jié)論市場(chǎng)散售泡椒鳳爪中雙氧水殘留含量達(dá)到1.0%，濃度高于1.0%的雙氧水對(duì)1型糖尿病小鼠肝臟、腎臟具有較為明顯損害，損傷主要表現(xiàn)為臟器組織炎癥反應(yīng)，并未見細(xì)胞形態(tài)明顯改變。

泡椒鳳爪；雙氧水；四氧嘧啶；血糖

近年來(lái)，泡椒鳳爪深受大家喜愛，但市場(chǎng)上銷售的泡椒鳳爪雙氧水殘留含量并無(wú)明確標(biāo)示。根據(jù)我國(guó)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)家已明令禁止在食品加工中使用工業(yè)雙氧水,食品在出廠前必須要把過(guò)氧化氫成分全部分解掉或除掉，成品不得檢出有殘留。雖然現(xiàn)在食品添加劑過(guò)氧化氫已廣泛應(yīng)用于食品加工，然而，食品級(jí)雙氧水的生產(chǎn)成本遠(yuǎn)高于工業(yè)級(jí)雙氧水。一些不法商人趁機(jī)用工業(yè)級(jí)雙氧水代替食品級(jí)雙氧水[1]。研究表明工業(yè)雙氧水含有砷、重金屬等多種有害物質(zhì)，也會(huì)嚴(yán)重危害食用者的健康[2]。但是對(duì)各個(gè)臟器是否具有損傷研究較少，特別是對(duì)糖尿病患者的影響未見報(bào)道。我國(guó)目前約有3千萬(wàn)糖尿病患者，隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展和生活方式的改變有明顯增加趨勢(shì)[3]。因此，對(duì)于研究食品中雙氧水含量殘留對(duì)糖尿病患者健康的影響，指導(dǎo)糖尿病患者的飲食尤為重要。該實(shí)驗(yàn)通過(guò)四氧嘧啶建造糖尿病小鼠模型，并用不同濃度雙氧水飼喂糖尿病模型小鼠，研究泡椒鳳爪雙氧水殘留對(duì)糖尿病患者的危害并為其飲食提供相應(yīng)的指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

泡椒鳳爪150 g(0.1 mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，用0.1 mol/L草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定。過(guò)氧化氫標(biāo)準(zhǔn)溶液：吸取35 mL 30%過(guò)氧化氫（分析純）溶液用蒸餾水稀釋至1 L。

用草酸標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

1.0 %，10%，15%的雙氧水溶液，四氧嘧啶主要儀器:血糖儀，血糖試紙，電子分析天平，真空泵，離心機(jī)（3000轉(zhuǎn)/分），酸式滴定管、電爐。

1.3 方法

取3份樣品，每份5 g,第1份不經(jīng)加熱處理，第2份加熱除去雙氧水，第3份加熱蒸餾取餾出液測(cè)定,前兩份樣品消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液量的差再減去第3份試樣所消耗的高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，計(jì)算出雙氧水的含量[4]。

2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

2.1 分組

雌性昆明小鼠24只，重量30～35 g，生理狀況基本相同，健康狀況也基本一致的成年昆明小鼠，普通環(huán)境喂飼，并分為空白組及A～F共8個(gè)組。

2.2 試驗(yàn)方法

四氧嘧啶致糖尿病雄性小鼠病死率高于雌性小鼠，故用雌性小鼠造四氧嘧啶糖尿病小鼠模型病死率更低.將選定的雌性小鼠，隨機(jī)均分為八組小鼠，每組3只。編為空白對(duì)照組及A,B,C,D, E,F，適應(yīng)性喂養(yǎng)四天，禁食12 h。分別用浸泡了1.0%，10%，15%,的雙氧水的飼料飼分別飼喂A,B,C組，用150 mg/kg的四氧嘧啶溶液一次性腹腔注射D,E,F組，72 h后禁食不禁水，尾靜脈采血，測(cè)定血糖，挑選出血糖高于11.1 mmol/L的小鼠，分別用浸泡了1.0%，10%，15%,的雙氧水的飼料飼喂D,E,F組；放在條件相同且適宜的普通環(huán)境中飼喂兩周。兩周后進(jìn)行體檢。并連續(xù)幾天用血糖儀記錄觀察其血糖濃度變化情況。兩周后，將各組小鼠稱重后，處死用福爾馬林液固定其脾臟，腎臟，肝臟，胃作HE切片，脫水，透明，浸蠟包埋，制成4 um厚石蠟切片并用HE染色。顯微鏡下觀察小鼠各組織切片的病理變化，各組小鼠不同器官的炎癥反應(yīng)及損傷程度，以及有無(wú)細(xì)胞異形性，并記錄下來(lái)。

表1 各組小鼠器官組織HE切片病理變化

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

測(cè)得樣品中雙氧水的濃度為1.08%。過(guò)氧化氫檢驗(yàn)管樣品陽(yáng)性，呈橙黃色。高倍顯微鏡下可見各組處理過(guò)的小鼠臟器大小不一的炎性病灶，可見各組小鼠都是以肝臟，腎臟損傷為主，其腎臟，肝臟HE病理切片較為典型（見圖1～4），各組小鼠各器官組織切片病理變化均有明顯改變（見表1），并且高血糖組對(duì)雙氧水損傷更敏感（見圖5）。

圖1

圖2

圖3

圖4

注：圖1:E組小鼠腎小球結(jié)構(gòu)幾乎消失。上皮細(xì)胞足突增寬，部分融合，微絨毛化。大量淋巴細(xì)胞侵潤(rùn)（HE×400）；圖2：F組小鼠系膜區(qū)增寬,系膜基質(zhì)增多。腎小球基底膜增厚，腎小管水腫，血管擴(kuò)張明顯，大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)（HE×400）；圖3：E組小鼠部分肝細(xì)胞水腫，有大量中性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞侵潤(rùn)（HE×400）；圖4：F組小鼠肝細(xì)胞水腫明顯，炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯。伴有大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)（HE×400）

圖5 濃度H2O2喂養(yǎng)小鼠前后2周血糖濃度變化

4 討論

市場(chǎng)上銷售的泡椒鳳爪添加的雙氧水超標(biāo),長(zhǎng)期攝入后對(duì)胃腸道，肝腎造成損傷。通過(guò)研究市面上大家喜愛的小吃雙氧水的殘留對(duì)糖尿病患者健康的影響，對(duì)指導(dǎo)糖尿病患者的飲食極為重要。實(shí)驗(yàn)可得，1.0%的雙氧水溶液就可對(duì)小鼠肝臟和腎臟造成炎癥損傷且使糖尿病組小鼠血糖升高明顯。而濃度越高的雙氧水對(duì)器官損傷越大。其中用15%的雙氧水處理的糖尿病小鼠2周后的血糖濃度升高了33%。高倍顯微鏡下可見各組處理過(guò)的小鼠肝腎切片有大小不一的炎性病灶，肝細(xì)胞水腫明顯，有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，而高血糖出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變；腎小球數(shù)量明顯下降，腎髓質(zhì)炎細(xì)胞浸潤(rùn)并且腎小管擴(kuò)張水腫。而糖尿病小鼠對(duì)雙氧水更敏感，但具體機(jī)制尚不清楚，其分子生物學(xué)機(jī)制方面有待進(jìn)一步研究。而最近越來(lái)越多的研究表明1型糖尿病是一種T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫疾病，胰島β細(xì)胞受到自身免疫破壞而不能合成和分泌胰島素,臨床癥狀較嚴(yán)重。大量研究表明,1型糖尿病的發(fā)病機(jī)制與β細(xì)胞自身抗原、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞等有關(guān)[11]，故可以類比雙氧水的作用機(jī)制是產(chǎn)生特定的氧自由基或刺激過(guò)度活化的T,B細(xì)胞，同時(shí)使肝，腎等器官中的SOD含量降低，從而進(jìn)一步使胰島B細(xì)胞受損，有可能與臭氧和NO2對(duì)細(xì)胞膜毒害有關(guān)，臭氧攻擊RNA、DNA，在NO2和紫外線作用下生成亞氨基氧基、硝氧基自由基來(lái)攻擊細(xì)胞膜。建議有慢性肝腎疾病或糖尿病患者盡量避免食用泡椒鳳爪。

[1]胡民主.工業(yè)級(jí)雙氧水在食品加工中的檢測(cè)[J].恩施職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012（4）.

[2]覃大元，劉興舉，李波.食品中雙氧水殘留含量的快速測(cè)定[J].食品安全導(dǎo)刊，2013（5）.

[3]彭乙華，曾恒禮，蔣紅．苦碟子對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株HUVEC生長(zhǎng)的影響[J].川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，26（6）：480-482．

R587.1

A

1672-4062（2015）02（b）-0235-02

2014-11-26）

國(guó)家自然科學(xué)基金（81101733），四川省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目（10ZA168），川北醫(yī)學(xué)院科研發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（MP-ZK-01）。

母波，男，博士，主要從事細(xì)胞遺傳學(xué)研究，單位：川北醫(yī)學(xué)院生物醫(yī)學(xué)院教研室。

宋雅文，女，本科，川北醫(yī)學(xué)院。