（中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽 110004）

外周血促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素濃度與先兆早產(chǎn)的相關(guān)性及其影響因素

徐漫飛，周洋，趙巖

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽 110004）

目的檢測先兆早產(chǎn)患者外周血促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）濃度，探討其濃度與先兆早產(chǎn)癥狀的相關(guān)性及影響其濃度的因素，以探討CRH濃度作為預(yù)測早產(chǎn)指標的可行性。方法選取先兆早產(chǎn)住院孕婦及不足月非先兆早產(chǎn)原因住院孕婦共45例，其中先兆早產(chǎn)組（孕28～36周）22例，對照組（孕28～36周、無先兆早產(chǎn)癥狀的孕婦）23例。采每位受試對象抗凝外周血5 mL，分離血漿，采用ELISA法測定CRH濃度。結(jié)果先兆早產(chǎn)組孕婦外周血CRH濃度與對照組孕婦相比顯著升高（P＜0.01）。先兆早產(chǎn)組與對照組的新生兒出生Apgar評分（1和5 min）均＞7分，且2組比較新生兒出生Apgar評分無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。先兆早產(chǎn)組與對照組比較，宮頸Bishop評分無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），先兆早產(chǎn)組中CRH濃度與宮頸Bishop評分無明顯關(guān)系（P＞0.05）。先兆早產(chǎn)組與對照組中，雙胎者與單胎者相比，胎膜早破者與非胎膜早破者相比，CRH濃度的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。結(jié)論血漿CRH濃度明顯升高是先兆早產(chǎn)的顯著指標。血漿CRH濃度不影響新生兒出生狀態(tài)和宮頸成熟度，但受妊娠胎兒數(shù)影響，且與胎膜早破密切相關(guān)。血漿CRH濃度有望成為預(yù)測先兆早產(chǎn)的指標，但其影響因素較多，應(yīng)在分析其影響因素后進一步研究其預(yù)測定量值。

先兆早產(chǎn)；促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素；血漿濃度；ELISA法；早產(chǎn)預(yù)測指標

早產(chǎn)是指妊娠不滿37周分娩，大多數(shù)發(fā)展中國家包括我國沿用WHO上個世紀60年代的定義，即妊娠滿28～37周前胎兒娩出稱為早產(chǎn)。全世界每年大約有1 300萬例早產(chǎn)發(fā)生，發(fā)病率從北美洲的11%到大洋洲的5.6%不等［1］。早產(chǎn)發(fā)動的原因非常復(fù)雜，公認是多因素綜合作用的結(jié)果［2］。在早產(chǎn)研究中，促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（corticotropin releasing hormone，CRH）有著重要的作用。CRH是下丘腦—垂體—腎上腺軸基本的神經(jīng)調(diào)節(jié)物，能刺激腺垂體釋放促腎上腺皮質(zhì)激素（adrenocorticotropic hormore，ACTH）。ACTH促使糖皮質(zhì)激素分泌，糖皮質(zhì)激素還可通過促進胎盤、子宮前列腺素的合成促進子宮的收縮，從而誘導(dǎo)分娩的發(fā)動。CRH不但在腦組織中廣泛分布，也可來源于外周組織及人的胎兒胎盤單位［3］。CRH在非孕婦女體內(nèi)測不到，隨著妊娠的進展，胎盤CRH mRNA的表達與外周血中CRH多肽水平同步升高。妊娠30周始母體血漿CRH水平明顯升高［4］，分娩時達最高峰，胎盤娩出后迅速下降。經(jīng)有效抗早產(chǎn)藥物治療，母體血漿CRH水平明顯回落，早產(chǎn)母體妊娠期血漿CRH水平顯著高于先兆早產(chǎn)組，分娩時兩者無明顯差異［3］。國內(nèi)外多項研究已表明早產(chǎn)臨產(chǎn)與足月臨產(chǎn)孕婦的胎盤、胎膜中均檢測CRH mRNA，臍靜脈及母體外周血中可檢測到CRH。以上研究表明，CRH是發(fā)動臨產(chǎn)的眾多因素之一［5］，甚至可能是人類分娩啟動的觸發(fā)因子［6］。本研究旨在探討CRH濃度與先兆早產(chǎn)癥狀的相關(guān)性、CRH濃度是否影響早產(chǎn)新生兒出生狀態(tài)和宮頸成熟度，以及影響其濃度的因素，以探索CRH濃度作為預(yù)測早產(chǎn)指標的可行性。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2014年5月至7月在中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院產(chǎn)科住院的先兆早產(chǎn)住院孕婦（先兆早產(chǎn)組）及不足月非先兆早產(chǎn)原因住院孕婦（對照組），共45例，其中先兆早產(chǎn)組22例，對照組23例。先兆早產(chǎn)組為孕周滿28周～36周+6、有先兆早產(chǎn)癥狀（下腹痛、宮縮、陰道流血）的孕婦，平均年齡為（30.2± 5.33）歲，孕周為（32.3±2.18）周。對照組為孕周滿28周～36周+6、無先兆早產(chǎn)癥狀的不足月孕婦，平均年齡為（29.9±4.51）歲，孕周為（32.7±2.27）周。2組比較，孕婦的孕周及年齡無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。采每位受試對象抗凝外周血5 mL。

排除標準：有心臟病、高血壓、肝炎、腎炎、自身免疫性疾病、內(nèi)分泌疾病等合并癥；有復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)、畸胎、死胎等不良孕產(chǎn)史；近期有急、慢性感染；3個月內(nèi)曾使用過激素類藥物；本次妊娠有妊娠期高血壓疾病、妊娠期糖尿病等產(chǎn)科并發(fā)癥；有臨床感染癥狀，包括孕婦體溫高于38℃、腹部壓痛、母體外周血白細胞計數(shù)≥15×109/L、胎心率＞l60次/min等。

1.2 儀器和試劑

1.2.1 主要儀器：高速離心機（德國Eppendorf公司），37℃恒溫箱（北京醫(yī)學(xué)儀器廠），標準規(guī)格酶標儀（美國Reagen公司）。

1.2.2 主要試劑：人CRH ELISA試劑盒（國內(nèi)分裝），內(nèi)包含標準品（80 ng/mL）、標準品稀釋液、酶標包被板、鏈霉親和素—HRP、30倍濃縮洗滌液、生物素標記的抗CRH抗體、顯色劑A液、顯色劑B液、終止液。

1.3 實驗方法

1.3.1 標準品的稀釋：設(shè)定原倍標準品為6號標準品，將120 μL的原倍標準品加入120 μL的標準品稀釋液，配置成40 ng/mL的5號標準品，再將120 μL的5號標準品加入120 μL的標準品稀釋液，配置成20 ng/mL的4號標準品。以此類推，配置好10 ng/mL的3號標準品、5 ng/mL的2號標準品及2.5 ng/mL的1號標準品。標準品、空白對照孔、樣品孔均做復(fù)孔（2個）。

1.3.2 加樣：空白孔不加樣品、生物素標記的抗CRH抗體、鏈霉親和素－HRP，只加顯色劑A和B及終止液，其余各步驟同標準品及樣品孔。標準品孔加入標準品50 μL、鏈霉親和素－HRP 50 μL（標準品中已事先整合好生物素抗體，故不加）。待測樣品孔加入樣品40 μL，然后各加入生物素標記的抗CRH抗體10 μL、鏈霉親和素－HRP 50 μL。各孔加樣完畢后，蓋上封板膜，振蕩混勻，37℃溫育60 min。

1.3.3 配置洗滌液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

1.3.4 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

1.3.5 顯色：每孔先加入顯色劑A 50 μL，再加入顯色劑B 50 μL，輕輕振蕩混勻，37℃避光顯色10 min。

1.3.6 終止：每孔加終止液50 μL，終止反應(yīng)。

1.3.7 測定：以空白孔調(diào)零，450 nm波長依序測量各孔的吸光度值。測定在加入終止液后10 min內(nèi)進行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

所有實驗數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析。采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比較先兆早產(chǎn)組與對照組的CRH濃度

先兆早產(chǎn)組孕婦與對照組孕婦外周血CRH平均濃度分別為（64.274±17.322）ng/mL和（21.846± 27.824）ng/mL。先兆早產(chǎn)組孕婦與同孕周對照組孕婦比較，外周血CRH濃度顯著升高（P＜0.01）。ELISA法測定CRH濃度的標準曲線見圖1。

2.2 先兆早產(chǎn)組與對照組新生兒Apgar評分的比較

圖1 ELISA法測定CRH濃度的標準曲線Fig.1 Standard curve for determination of the concentration of CRH by ELISA

參考《婦產(chǎn)科學(xué)》第8版，分別在出生后1、5 min進行新生兒Apgar評分，Apgar評分≤7分為新生兒窒息的判斷標準，其中4～7分為輕度窒息，1～3分為重度窒息。本研究中，先兆早產(chǎn)組與對照組的新生兒出生Apgar評分（1和5 min）均＞7分，且2組比較新生兒出生Apgar評分無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。見表1。

表1 先兆早產(chǎn)組與對照組間Apgar評分、Bishop評分的比較Tab.1 Comparison of Apgar score and Bishop score between the threatened premature labor group and the control group

2.3 先兆早產(chǎn)組與對照組Bishop評分的比較

Bishop提出用宮頸成熟度評分法估計加強宮縮措施的效果。對于人工破膜，若產(chǎn)婦得分≤3分，人工破膜均失敗，應(yīng)改用其他方法。4～6分的成功率約為50%，7～9分的成功率約為80%，9分以上均成功。≥7分：宮頸成熟；＜7分：宮頸不成熟。本研究中，先兆早產(chǎn)組與對照組的宮頸Bishop評分無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），見表1。其中先兆早產(chǎn)組中Bishop評分≥7分者（4例）與＜7者（18例）CRH濃度分別為（60.696±17.464）ng/mL和（65.069±17.189）ng/mL，二者比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

2.4 影響CRH濃度的因素

2.4.1 雙胎因素對CRH濃度的影響：先兆早產(chǎn)組及對照組中，雙胎者CRH濃度較單胎者明顯升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。

2.4.2胎膜早破因素對CRH濃度的影響：先兆早產(chǎn)組及對照組中，胎膜早破者的CRH濃度明顯低于非胎膜早破者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）。見表2。

3 討論

3.1 CRH在早產(chǎn)發(fā)生中的作用

本研究表明，先兆早產(chǎn)組患者外周血CRH濃度與對照組相比顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），提示CRH濃度升高與先兆早產(chǎn)癥狀的發(fā)生有一定關(guān)系。考慮可能是母體不良環(huán)境（如炎癥、缺氧等）促使胎兒對母體產(chǎn)生一系列應(yīng)激反應(yīng)［7］，使胎兒腎上腺分泌了大量的皮質(zhì)醇［8］，皮質(zhì)醇可通過上調(diào)前列腺素合成酶和下調(diào)前列腺素降解酶促進胎盤、子宮前列腺素的合成，刺激子宮收縮使分娩提前發(fā)動。

3.2 CRH濃度與新生兒Apgar評分的關(guān)系

本研究中，先兆早產(chǎn)組及對照組比較，新生兒Apgar評分無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），這一結(jié)果的產(chǎn)生可能是因為入選實驗組的觀察例數(shù)較少，存在偏差。擴大實驗組的范圍或例數(shù)，也許能得出不一樣的結(jié)論。

3.3 CRH濃度與宮頸Bishop評分的關(guān)系

表2 雙胎因素和胎膜早破因素對CRH濃度的影響Tab.2 The effects of the twin factor and the factor of premature rupture of membranes on the concentration of CRH

本研究中，先兆早產(chǎn)組及對照組比較Bishop評分無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。將先兆早產(chǎn)組分為Bishop評分≥7者和＜7者，比較二者間CRH濃度的差別，結(jié)果表明二者間CRH濃度無統(tǒng)計學(xué)差異。這一結(jié)果說明，CRH升高可能引起子宮收縮，但并不直接引起宮頸成熟。

3.4 CRH濃度的影響因素

本研究中，先兆早產(chǎn)組及對照組均存在兩對較明顯的患者群體，即雙胎者與單胎者、胎膜早破者與非胎膜早破者。將先兆早產(chǎn)組與對照組分別進行組內(nèi)比較，對比兩因素與CRH濃度之間的關(guān)系，結(jié)果表明雙胎者CRH濃度較單胎者明顯升高（先兆早產(chǎn)組P＜0.01，對照組P＜0.05），胎膜早破者CRH濃度顯著低于非胎膜早破者（2組均P＜0.01）。眾所周知，雙胎妊娠由于宮內(nèi)壓力較單胎增大，更易發(fā)生先兆早產(chǎn)，我們的研究結(jié)果證明雙胎者CRH濃度更高，與這一結(jié)論相符。但雙胎妊娠引起宮內(nèi)壓力升高與CRH升高之間的因果關(guān)系尚不明確，有待進一步研究。

發(fā)生胎膜早破時，胎先露部下降壓迫子宮下端及宮頸，反射性引起子宮收縮［10］，按此推斷，胎膜早破者CRH濃度應(yīng)高于非胎膜早破者。本研究結(jié)果表明胎膜早破者CRH濃度顯著低于非胎膜早破者（2組均為P＜0.01），與推論不符。由此推斷，胎膜早破引起的宮縮與CRH升高引起的宮縮機制不同，且與CRH濃度負相關(guān)?？梢哉J為胎膜早破為CRH濃度影響因素之一，但胎膜早破與CRH濃度之間的具體關(guān)系，有待深入研究。

綜上所述，本研究進一步了解先兆早產(chǎn)患者外周血CRH濃度的變化規(guī)律及其與新生兒Apgar評分、宮頸Bishop評分、雙胎妊娠及胎膜早破的關(guān)系，提示CRH濃度在先兆早產(chǎn)的發(fā)生中起重要作用，并受多種因素影響。但本研究僅對外周血CRH濃度進行了研究，對于胎盤、羊水、臍帶血及胎兒體內(nèi)的CRH濃度及各因素影響其變化的相關(guān)機制還需要進一步探討［11］。我們希望能通過控制CRH濃度，減少先兆早產(chǎn)癥狀的發(fā)生，節(jié)約醫(yī)療資源，為早產(chǎn)的預(yù)測和治療提供可能的臨床思路［12］。

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（編輯陳姜）

Correlation between Concentration of Corticotropin Releasing Hormone and Threatened Premature Labor in PeripheralBlood and Influencing Factors

XUMan-fei，ZHOU Yang，ZHAO Yan
（DepartmentofGynecology and Obstetrics，Shengjing Hospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo detect the concentration of corticotropin releasing hormone（CRH）in peripheral blood in patients with threatened preterm labor and investigate the correlation between CRH concentration and threatened preterm labor symptoms，so as to explore the feasibility of CRH concentration as a premature prediction index.MethodsA total of 45 hospitalized patients were enrolled including 22 patients with threatened preterm labor（pregnancy 28-36 weeks）and 23 controls（pregnancy 28-36 weeks，no premonitory symptoms of preterm labor）.The 5 mL fresh peripheral venous blood samples were obtained from all the 45 subjects，and the plasma was separated.The ELISA method was used to determinate the concentration ofCRH.ResultsThe concentration ofCRH in peripheralblood in patients with threatened preterm laborwas significantly higherthan in the control group，there was a statistically significant difference（P＜0.01）.The Apgar scores（1 min and 5 min）of the threatened premature labor group and the control group were both more than 7 points，and there was no statistical difference in the newborn Apgar score between the two groups（P＞0.05）.There was no statistical difference in the cervical Bishop score between the threatened preterm labor group and the control group（P＞0.05），and there was no obvious relationship between the CRH concentration and the cervical Bishop score in the threatened preterm labor group（P＞0.05）.In both groups，there were statistically significant differences in CRH concentration between the twins and the singleton，and between the patients with premature rupture of membranes（PROM）and those without PROM（all P＜0.05）.ConclusionIncreased plasma CRH concentration is a significant index of threatened premature labor.Plasma CRH concentration does not affect the neonatal birth condition and the cervical maturity.The plasma concentration of CRH is affected by pregnancy number of fetuses，and is closely related to premature rupture of membranes.The plasma concentration of CRH is expected to be the predictive index of threatened premature delivery，but it is influenced by many factors，therefore，the CRHquantitative value needs to be furtherstudied by analysisofits influencing factors.

threatened preterm labor；corticotropin releasing hormone；plasma concentration；ELISA；premature prediction index

R714.21

A

0258-4646（2015）04-0342-04

徐漫飛（1985-），女，碩士研究生.

趙巖，E-mail：zhaoy@sj-hospital.org

2015-01-04

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