余春潔，王 鵬，胡慧媛，賈艷琪，施 娟，徐洪呂

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，占新發(fā)腫瘤病例的14.5%，居各類腫瘤死亡病例的首位，嚴(yán)重威脅人們健康，影響其生活質(zhì)量，且肺癌病死率高，多數(shù)患者在明確診斷時(shí)即有轉(zhuǎn)移，5 年生存率約維持在15%［1］。治療肺癌的方法有很多，但是化學(xué)藥物的毒性、手術(shù)和放射療法對(duì)人體正常組織的損傷容易導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)，因此，尋找低毒性、特異性殺傷肺癌細(xì)胞的藥物和方法一直是醫(yī)學(xué)探索的熱點(diǎn)。20 世紀(jì)60 年代，我國科研人員從植物青蒿中提取出抗瘧有效成分青蒿素，隨后其在臨床中迅速取代奎寧等傳統(tǒng)抗瘧藥，被WHO 稱為治療瘧疾的最大希望。近年研究發(fā)現(xiàn)，青蒿素及其衍生物有明確的抗腫瘤和抑制腫瘤血管生成的作用［2］，其作用與bcl－2 基因、PCNA基因表達(dá)下調(diào)和bax 蛋白表達(dá)升高相關(guān)［3］。蒿甲醚 (Artemether)為青蒿素的脂溶性衍生物，是含過氧橋結(jié)構(gòu)的倍半萜內(nèi)酯化合物，在臨床上治療惡性瘧和腦型瘧有顯著療效［4］，并有治療瘧疾、血吸蟲、免疫調(diào)節(jié)等作用［5］，其可選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞而對(duì)正常組織細(xì)胞的毒性較小，與傳統(tǒng)化療藥物不存在交叉耐藥［6］。有研究顯示，蒿甲醚能抑制U251 細(xì)胞生長，呈劑量和時(shí)間依賴性［7］，同時(shí)其與順鉑聯(lián)用對(duì)小鼠Lewis肺癌有相加抑制作用，能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，機(jī)制可能與調(diào)控細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)有關(guān)［8］。本研究旨在探討蒿甲醚對(duì)裸鼠體內(nèi)移植人肺腺癌A549 細(xì)胞株生長的抑制作用，為肺癌的臨床用藥研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取雌性裸鼠32 只，鼠齡6 ～7 周;體質(zhì)量20 ～23 g，購于上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.2 主要藥品和試劑 蒿甲醚粉針劑(1 ml:80 mg/支，批號(hào):H10900011)由昆明制藥廠股份有限公司生產(chǎn)，0.9%氯化鈉溶液(100 ml:0.9 g/瓶，批號(hào):200511003)由昆明南疆制藥有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 細(xì)胞系 人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549 細(xì)胞由昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組與劑量 按裸鼠體質(zhì)量將其分為不同的層，再對(duì)每一層的裸鼠進(jìn)行編號(hào)，采用隨機(jī)數(shù)字表法將裸鼠分為低、中、高劑量組和對(duì)照組，各8 只。裸鼠接種人肺腺癌A549 細(xì)胞24 h 后，高劑量組給予蒿甲醚粉針劑120 mg/kg、中劑量組為80 mg/kg、低劑量組為54 mg/kg，對(duì)照組給予0.9%氯化鈉溶液10 mg/kg，連續(xù)給藥12 d 后處死裸鼠，剝離腫瘤，稱腫瘤質(zhì)量。抑瘤率= (1－實(shí)驗(yàn)組平均瘤質(zhì)量/對(duì)照組平均瘤質(zhì)量) ×100%［9］。

1.2.2 移植瘤模型的建立 取對(duì)數(shù)生長期的A549 細(xì)胞，PBS洗滌，調(diào)整細(xì)胞密度，制備成2 ×106個(gè)/0.2 ml 的細(xì)胞懸液，分別接種于裸鼠腋下。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0 軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以(x ±s)表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用q 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4 組死亡情況 實(shí)驗(yàn)期間，低、中劑量組各有1 只裸鼠死亡，高劑量組和對(duì)照組無裸鼠死亡。

2.2 4 組抑瘤率比較 4 組抑瘤率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。其中高劑量組抑瘤率高于低、中劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);低、中劑量組抑瘤率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05，見表1)。平均瘤質(zhì)量隨蒿甲醚的劑量增加而減少，見圖1。

表1 4 組體內(nèi)腫瘤質(zhì)量及抑癌率比較Table 1 Comparison of tumor mass and suppressor ratio in 4 groups

圖1 4 組平均瘤質(zhì)量隨蒿甲醚劑量變化圖Figure 1 The average tumor weight change with dose artemether in 4 groups

3 討論

蒿甲醚對(duì)多種腫瘤具有一定的抑制作用已經(jīng)被諸多研究證實(shí)。左曙光等［10］研究表明，與青蒿素相比，蒿甲醚水溶性更好，吸收更快，具有更強(qiáng)的抗腫瘤活性，蒿甲醚可以抑制人慢性髓性白血病細(xì)胞株K562 細(xì)胞增殖，影響細(xì)胞周期，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。早期國內(nèi)外學(xué)者就蒿甲醚對(duì)人肺腺癌A549 的作用也做了一些研究。郭燕等［11］研究結(jié)果顯示，蒿甲醚可顯著抑制人肺腺癌A549 細(xì)胞株生長，其細(xì)胞毒作用與其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡有關(guān)。錢海洪等［12］研究發(fā)現(xiàn)，蒿甲醚與順鉑聯(lián)用可以明顯抑制人肺腺癌A549 細(xì)胞生長，兩藥單用和聯(lián)用時(shí)隨著藥物濃度增加，其效應(yīng)也增加。但以上研究均是體外細(xì)胞培養(yǎng)研究。本研究在裸鼠體內(nèi)種植人肺腺癌A549，研究蒿甲醚在體內(nèi)對(duì)人肺腺癌A549 的抑制作用。

本研究結(jié)果顯示，對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組平均抑瘤率比較，有明顯差異，其中高劑量組抑瘤率高于低、中劑量組;同時(shí)，低、中、高劑量組抑瘤率逐漸升高。因此，蒿甲醚對(duì)裸鼠體內(nèi)移植人肺腺癌A549 有一定的抑制作用，且隨著蒿甲醚劑量的增加而增強(qiáng)。另外，低劑量組與中劑量組抑瘤率比較，無明顯差異，可能是實(shí)驗(yàn)中操作不當(dāng)導(dǎo)致的誤差引起，也可能是因?yàn)槿朔蜗侔〢549 對(duì)高劑量的蒿甲醚更為敏感，因此仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究。

1 Jemal A，Siegel R，Xu J，et al. Cancer statistics，2010 ［J］. CA Cancer J Clin，2010，60 (5):277－300.

2 朱啟順，伍治平，高誠偉，等. 蒿甲醚對(duì)SD 大鼠原位腦膠質(zhì)瘤抑制及抗血管生成的研究［C］. 第五屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)曁第七屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議、國際腫瘤細(xì)胞與基因治療學(xué)會(huì)會(huì)議、第二屆中日腫瘤介入治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集，2008.

3 Singh NP，Lai HC. Artemisinin induces apoptosis in human cancer cells［J］. Anticancer Res，2004，24 (4):2277－2280.

4 Eckstein－Ludwig U，Webb RJ，Van Goethem ID，et al. Artemisinins target the SERCA of plasmodium falciparum ［J］. Nature，2003，424 (6951):957－961.

5 Utzinger J，Xiao SH，Tanner M，et al. Artemisinins for schistosomiasis and beyond ［J］. Curr Opin Investig Drugs，2007，8 (2):105－116.

6 伍治平，高誠偉，吳永貴，等. 蒿甲醚對(duì)SD 大鼠原位腦膠質(zhì)瘤的抑瘤實(shí)驗(yàn)［J］. 腫瘤防治研究，2010，37 (6):614－617.

7 李楊，鄧興力，李玉，等. 蒿甲醚對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251 細(xì)胞凋亡的影響［J］. 中國臨床神經(jīng)外科雜志，2013，18 (5):289－291.

8 萬成亮，蔣永新，寸英麗，等. 蒿甲醚與順鉑聯(lián)用對(duì)Lewis 肺癌小鼠的抑瘤作用及其機(jī)制探討［J］. 昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，32(3):21－26，24.

9 萬成亮，蔣永新，寸英麗，等. 蒿甲醚與順鉑聯(lián)用對(duì)Lewis 肺癌小鼠的抑瘤作用［J］. 時(shí)珍國醫(yī)國藥，2011，22 (12):2924－2926.

10 左曙光，劉淳，劉馨，等. 蒿甲醚對(duì)K562 細(xì)胞作用的體外實(shí)驗(yàn)研究［J］. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26 (20):3680－3682.

11 郭燕，王俊，章必成，等. 蒿甲醚對(duì)人肺腺癌A549 細(xì)胞體外生長的影響［J］. 醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2007，20 (3):233－235，239.

12 錢海洪，胡義德. 順鉑與蒿甲醚聯(lián)用增強(qiáng)對(duì)人肺腺癌A549 細(xì)胞的抑制作用［J］. 四川醫(yī)學(xué)，2006，27 (2):111－113.