西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院干三病區(qū)（西安710004） 于俊霞 李秀麗 楊渭臨

目前，隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展和生活方式的改變，2型糖尿病發(fā)病率呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)。糖尿病發(fā)病機(jī)制主要是胰島素抵抗和胰島素分泌缺乏，二者都可以引起脂類代謝紊亂導(dǎo)致血脂異常。β細(xì)胞素是表皮生長(zhǎng)因子家族的一個(gè)成員。在機(jī)體許多組織和培養(yǎng)的細(xì)胞包括血管平滑肌細(xì)胞和表皮細(xì)胞均有β細(xì)胞素的表達(dá)，尤其在胰腺、肝臟、腎臟和小腸，β細(xì)胞素的mRNA表達(dá)豐富［1～4］。近幾年的一些研究表明［5～11］：β細(xì)胞素可以促進(jìn)胰島β細(xì)胞的分化和其他細(xì)胞向β細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。本研究旨在對(duì)β細(xì)胞素基因多態(tài)性與2型糖尿病患者血脂異常相關(guān)性進(jìn)行研究。

資料與方法

1 臨床資料 病例組：130例，為2006年8月至2007年5月我院門診和住院的2型糖尿病患者，其中男85例，女45例。平均年齡為53．35±12．21歲，平均病程為3．16±4．67年，其診斷符合1999年 WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組：96例，均來自我院健康體檢中心，其中男47例，女49例，平均年齡為49．08±13．32歲。

2 檢測(cè)方法

2．1 標(biāo)本收集：所有檢測(cè)對(duì)象均隔夜禁食12～14h，次日清晨取靜脈血。EDTA-K2抗凝血2ml凍存于-20℃用于提取基因組DNA，其余的送生化室進(jìn)行生化指標(biāo)的測(cè)定。

2．2 基因多態(tài)性鑒定：全血基因組DNA的測(cè)定；用RFLP-PCR對(duì)外顯子1TGC19GGC進(jìn)行基因多態(tài)性的篩查；利用SASP-PCR對(duì)5′非翻譯區(qū)A-226G進(jìn)行基因多態(tài)性的篩查；對(duì)篩查出的基因型進(jìn)行測(cè)序鑒定。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本組所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用卡方（χ2）檢驗(yàn)，以P＜0．05為有顯著性差異，P＜0．01為有極顯著性差異。

結(jié) 果

1 外顯子1 TGC19GGC（rs28549760）的基因型鑒定 見圖1。Primer Premier 5．0設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為268bp，野生型不能被SmaⅠ酶切，突變后可被SmaⅠ酶切。該位點(diǎn)不存在純合突變，經(jīng)酶切后產(chǎn)生3條片段分別為268bp、196bp和72bp，選擇50bp的DNA Marker進(jìn)行檢測(cè)。

2 5′非翻譯區(qū) A-226G（rs11733938）基因型鑒定見圖2。Primer Premier 5．0設(shè)計(jì)引物，應(yīng)用等位基因特異性PCR，PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為169bp，在2．0%瓊脂糖凝膠上電泳，選擇50bp的DNA Marker進(jìn)行檢測(cè)。

圖1 外顯子1TGC19GGC PCR產(chǎn)物酶切電泳結(jié)果

圖2 5′非翻譯區(qū)A-226G電泳結(jié)果

3 臨床資料分析

3．1 外顯子1TGC19GGC不同基因型與一般資料比較 見表1～2。根據(jù)外顯子1TGC19GGC是否有T／G突變，分為TT和TG基因型。2型糖尿病組中總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯在兩種基因型之間無顯著性差異（P＞0．05）；健康對(duì)照組中總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白在兩種基因型之間無顯著性差異（P＞0．05）。高密度脂蛋白在TT基因型和TG基因型之間雖無顯著性差異（P＞0．05），但是在TG基因型有降低的趨勢(shì)。提示在BTC基因外顯子1TGC19GGC研究中，2型糖尿病患者該位點(diǎn)基因突變與血脂水平無明顯相關(guān)性，在健康對(duì)照組中TG基因型與高密度脂蛋白水平降低有一定的相關(guān)性。

3．2 5′非翻譯區(qū)A-226G不同基因型與一般資料比較 見表3～4。根據(jù)5′非翻譯區(qū)A-226G是否有A／G突變，分為AA＋AG基因型和GG基因型。2型糖尿病組中總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白在兩種基因型之間無顯著性差異（P＞0．05），對(duì)照組中總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白在兩種基因型間無顯著性差異（P＞0．05），甘油三酯在GG基因型中明顯升高（P＜0．05）。提示在BTC基因5′非翻譯區(qū)A-226G-研究中，2型糖尿病患者該位點(diǎn)基因突變與血脂水平無明顯相關(guān)性，在健康對(duì)照組中GG基因型與甘油三酯水平升高有一定的相關(guān)性。

表1 2型糖尿病組外顯子1TGC19GGC不同基因型間一般資料比較（±s）

表1 2型糖尿病組外顯子1TGC19GGC不同基因型間一般資料比較（±s）

注：兩種基因間比較，P＜0．05

指標(biāo) TT基因型 TG基因型TC 4．29±1．08 4．59±1．25 TG 1．96±1．59 1．92±1．09 HDL 0．92±0．25 0．89±0．29 LDL 2．56±0．96 2．82±0．97

表2 對(duì)照組外顯子1TGC19GGC不同基因型間一般資料的比較（±s）

表2 對(duì)照組外顯子1TGC19GGC不同基因型間一般資料的比較（±s）

注：△兩種基因型之間比較，P＞0．05

指標(biāo) TT基因型 TG基因型TC 4．33±0．80 4．13±0．61 TG 1．48±0．96 1．68±0．54 HDL-C 1．09±0．27 0．85±0．14△LDL-C 2．41±0．69 2．32±0．34

表3 2型糖尿病組A-226G不同基因型間一般資料比較（±s）

表3 2型糖尿病組A-226G不同基因型間一般資料比較（±s）

注：＊ 兩種基因型之間比較，P＜0．05

指 標(biāo)AG＋AA GG CHOL 4．34±1．06 4．40±1．70 TG 1．95±1．53 1．98±1．54＊HDL-C 0．91±0．25 0．98±0．34 LDL-C 2．62±0．97 2．34±0．86

表4 對(duì)照組A-226G不同基因型間一般資料比較（±s）

表4 對(duì)照組A-226G不同基因型間一般資料比較（±s）

注：＊ 兩種基因型之間比較，P＜0．05

指標(biāo)AG＋AA GG CHOL 4．3052±0．7785 4．560±1．0900 TG 1．4359±0．8326 2．552±2．0124＊HDL-C 1．0791±0．2717 1．018±0．1817 LDL-C 2．4186±0．6906 2．162±0．4672

討 論

在2型糖尿病組，發(fā)現(xiàn)BTC外顯子1TGC19GGC位點(diǎn)基因突變率較高，說明野生TT基因型在2型糖尿病的發(fā)病過程中可能有保護(hù)性作用?？赡艿臋C(jī)制：該位點(diǎn)位于外顯子1上，外顯子1主要編碼BTC的信號(hào)肽，由于該基因位點(diǎn)的突變引起了編碼氨基酸的改變，從了使所編碼的信號(hào)肽結(jié)構(gòu)發(fā)生變異引起信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)發(fā)生異常，導(dǎo)致BTC功能發(fā)揮的異常，引起了胰島β細(xì)胞功能缺陷，引起胰島素分泌缺陷，可能參與了脂代謝的過程。本研究發(fā)現(xiàn)：在健康對(duì)照組中，TG基因型患者的高密度脂蛋白水平較TT基因型低，具體機(jī)制不清楚。目前關(guān)于這一方面的研究尚不多，但是通過本實(shí)驗(yàn)至少可以說明該位點(diǎn)基因突變對(duì)脂代謝方面的具有一定的影響，可能象糖代謝方面一樣使脂代謝發(fā)生紊亂，從而表現(xiàn)為突變后高密度脂蛋白水平降低，發(fā)揮了不利于脂代謝方面的作用。從目前結(jié)果來看：外顯子1TGC19GGC基因突變可能與2型糖尿病的發(fā)病以及血糖、血脂控制有關(guān)。

Steven等［12］在364例2型糖尿病患者和188例對(duì)照組中篩查了外顯子1Cys7Gly，外顯子2 Leu44Phe，外顯子4Leu124Met 3個(gè)位點(diǎn)的基因多態(tài)性，并分析它們與107例志愿者高糖刺激后的胰島素分泌與胰島素敏感性方面的關(guān)系。發(fā)現(xiàn)這三個(gè)位點(diǎn)與2型糖尿病、胰島素分泌以及胰島素敏感性均無明顯相關(guān)性。但是在外顯子1Cys7Gly研究中發(fā)現(xiàn)：TG基因型患者的甘油三酯水平較高，此結(jié)果與Sliver等［13］的研究結(jié)果相同。并且在外顯子2Leu44基因型中甘油三酯有升高的趨勢(shì)，然而在外顯子4Leu124基因型中CHOL有降低的趨勢(shì)。因?yàn)锽TC在內(nèi)臟有表達(dá)，可能與脂代謝有一定的關(guān)系，但是有關(guān)BTC在脂肪代謝方面的影響仍無太多報(bào)道。

國(guó)外［14］關(guān)于BTC基因5′非翻譯區(qū)A-226G與2型糖尿病的研究與我們的研究結(jié)果不一致，他們發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)基因多態(tài)性與2型糖尿病的發(fā)病有相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)基因突變后，在健康對(duì)照組中甘油三酯水平明顯升高，這說明該位點(diǎn)的基因突變與脂代謝有一定的相關(guān)關(guān)系，可以引起脂代謝紊亂。目前關(guān)于該位點(diǎn)與2型糖尿病及脂代謝方面相關(guān)關(guān)系的研究較少，它們之間的相互關(guān)系究竟如何有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，我們的研究發(fā)現(xiàn)BTC外顯子1 TGC19GGC，該位點(diǎn)T等位基因突變?yōu)镚等位基因后，可以引起高密度脂蛋白水平降低；5′非翻譯區(qū)A-226G位點(diǎn)基因突變后可以引起甘油三酯水平升高。目前有關(guān)于BTC基因變異與脂代謝的相關(guān)關(guān)系，有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。

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