西安醫(yī)學(xué)院機能實驗中心（西安710021） 周 芳 譚逸然

前列腺癌（Prostate cancer，PCa）的發(fā)病率在不同種族和地區(qū)有著極大的差異，在西方國家，PCa是男性最常見的惡性腫瘤，約占男性惡性腫瘤的1／3，死亡人數(shù)居第2位，僅次于肺癌。我國是PCa的低發(fā)區(qū)，但隨著人群壽命的延長，飲食結(jié)構(gòu)及生活習(xí)慣的改變，疾病檢測手段的提高，前列腺癌的發(fā)病率逐年上升，并成為威脅我國老年男性生命的重要疾?。?，2］。

CD147分子是最近腫瘤研究的一個新興熱點。研究發(fā)現(xiàn)CD147在正常細(xì)胞中不表達(dá)或僅有極低的表達(dá)，但在乳腺癌、肝癌、喉鱗癌等多種惡性腫瘤中高度表達(dá)，且腫瘤惡性程度越高，CD147蛋白表達(dá)越高［3，4］。證明其表達(dá)與腫瘤的發(fā)生相關(guān)性很強。但CD147在前列腺癌中表達(dá)如何改變以及與前列腺癌惡性程度的關(guān)系未見報道。

材料與方法

1 組織來源 本實驗選取2004～2007年間，西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院97例前列腺癌患者組織和45例正常前列腺組織進(jìn)行對比，組織標(biāo)本由西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科提供。97例前列腺癌患者平均年齡68．6歲，均有臨床及病理診斷。按TNM分期I期15例，II期26例，III期29例，IV期27例。全部標(biāo)本均經(jīng)10%多聚甲醛處理，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片。

2 實驗試劑 CD147單克隆抗體、S-P（Streptavidin／Peroxidase）免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒均來自美國Sigma公司。

3 石蠟切片免疫組化染色 采用S-P免疫組化染色法檢測CD147，用已知CD147陽性肝癌標(biāo)本做陽性對照，PBS取代一抗作陰性對照。免疫組織化學(xué)操作按說明書進(jìn)行，步驟如下：①切片脫蠟水化，二甲苯20min×2，無水酒精5min×2，95%酒精2min×2，90%酒精2min，80%酒精2min，70%酒精2min，PBS3min×3；②滅活內(nèi)源性過氧化物，3%雙氧水10min，PBS5min×3；③封閉非特異結(jié)合，去背景，5%正常羊血清20min；④抗原抗體結(jié)合，一抗室溫80min或4℃過夜，PBS5min×3，二抗室溫20min，PBS 5min×3，三抗室溫20min，PBS 5min×3；⑤DAB顯色；⑥復(fù)染，蘇木精復(fù)染7min，1%鹽酸酒精分化30s；⑦透明和封片。

4 評價方法 CD147染色陽性表現(xiàn)棕黃色或棕褐色，主要定位于胞膜和胞漿。每張切片均由三位病理科醫(yī)生分別隨機觀察具有代表性的10個高倍視野，根據(jù)胞膜和胞漿的染色程度及染色細(xì)胞百分率進(jìn)行評分：基本不著色者為0分，著色淡者為1分，著色適中者為2分，著色深者為3分；著色細(xì)胞占計數(shù)細(xì)胞百分率＜5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，＞51%為3分。將每張切片著色程度得分與著色細(xì)胞百分率得分相乘為其最后得分，0～1分為陰性，2～3分為弱陽性（＋），＞4分為強陽性（?）。

5 統(tǒng)計學(xué)處理 本組對所有資料采用SPSS10．0軟件進(jìn)行處理，正常組標(biāo)本與PCa組標(biāo)本中CD147表達(dá)區(qū)別采用卡方（χ2）檢驗，PCa組標(biāo)本中各期CD147表達(dá)區(qū)別用秩和檢驗，以P＜0．05為有顯著性差異，P＜0．01為有極顯著性差異。

結(jié) 果

1 CD147在前列腺正常組織和癌組織中的表達(dá)見表1及附圖。45例正常前列腺組織中40例表達(dá)為陰性，5例表達(dá)為弱陽性；97例前列腺癌組織中38例表達(dá)為弱陽性，59例表達(dá)為強陽性。CD147在陽性表達(dá)在前列腺癌組織中明顯升高（P＜0．01）。

2 CD147在前列腺癌各期中的表達(dá) 見表2。將前列腺癌按TNM分期分為I，II，III和IV期，各期CD147陽性表達(dá)率分別為0．1%、34．3%、56．1%和84．8%。各期分別和其前一期比較（即I和II期比較，II和III期比較，III和IV期比較），CD147陽性表達(dá)率均升高（P＜0．01），各期陽性表達(dá)率具有極顯著性差異（P＜0．01）。

附圖 前列腺組織免疫組化染色圖 A示正常組織；B示弱陽性；C示強陽性 （×200）

表1 正常組和PCa組標(biāo)本中CD147陽性表達(dá)

表2 PCa組標(biāo)本TNM分期之間CD147表達(dá)陽性率比較

討 論

本實驗結(jié)果提示：CD147在前列腺癌組織中也有高表達(dá)，而且隨著TNM分期的升高，CD147在前列腺癌組織表達(dá)陽性率及強陽性也升高。說明前列腺癌的發(fā)生與CD147的表達(dá)有關(guān)，并且與TNM分期呈正相關(guān)。

正常組織的上皮細(xì)胞由一層基底膜與軀體其它部位隔離開來，正常細(xì)胞是不能突破這一基底膜屏障的。但是腫瘤細(xì)胞通過刺激基質(zhì)細(xì)胞釋放基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinase，MMPs），破壞基底膜屏障。隨著前列腺癌的分級增加（即惡性程度增加），其基底膜的缺失也增大。另外，腫瘤若增大到一定的體積時，就需要新生毛細(xì)血管來提供其生長所需的養(yǎng)份，獲得生成血管能力是前列腺上皮肉瘤發(fā)展為浸潤性腫瘤的重要步驟。

CDl47分子是一個新的細(xì)胞表面粘附分子，又叫細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子（Extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN），研究發(fā)現(xiàn)：CD147在正常細(xì)胞中不表達(dá)或僅有極低的表達(dá)，但是在腫瘤組織中，尤其是惡性腫瘤組織中表達(dá)常較高，其在腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移、腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化及血管形成中發(fā)揮重要作用［5，6］。目前已證實了CDl47分子在乳腺癌、肝癌、喉鱗癌、骨肉瘤等多種惡性腫瘤中高度表達(dá)［7］。CDl47分子可刺激腫瘤周圍間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生MMPs，從而降解細(xì)胞外基底膜和間質(zhì)成分，與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［8，9］。而且，腫瘤細(xì)胞表達(dá)的CDl47分子也可作用于鄰近的癌細(xì)胞，相互誘導(dǎo)促進(jìn)MMPs釋放降解基質(zhì)，并水解腫瘤細(xì)胞表面的粘附成分而有助于癌細(xì)胞的遷移［7，8］。另外，它還可以通過在RNA和蛋白水平影響血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管的生成［10，11］。另外，CD147分子的表達(dá)還和自噬有很強的相關(guān)性，也可以通過自噬來調(diào)控腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，而在前列腺癌中的其他機制還需要進(jìn)一步研究。

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