劉淳

摘 要：目的：建立了超高效液相色譜測定豬肉中氯丙嗪的方法。方法：采用乙腈前處理，超聲波法提取，超高效液相色譜-紫外檢測器測定。色譜柱BEH C18 1.7 μm×50 mm×2.1 mm，流速：0.4 mL/min，流動相：乙腈∶乙酸銨=60∶40，柱溫40 ℃，檢測波長254 nm，進(jìn)樣量：5 μL。結(jié)果：氯丙嗪方法檢出限7.5 μg/kg，在0 mg/L～1.00 mg/L范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)=0.9998。方法平均回收率為87.7%～101.0%，RSD為1.2%～2.6%。結(jié)論：本方法適用于豬肉中氯丙嗪的測定。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜 ?氯丙嗪 ?殘留量 ?豬肉

中圖分類號：R155.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）10（c）-0187-03

Determination of chlorpromazine residues in meat products by ultra high performance liquid chromatography

LIU Chun

（Dongcheng district Center for Diseases Prevention and Control，Beijing，100009，China）

Abstract：Objective： Ultra High Performance Liquid Chromatography（UPLC） method was determination of chlorpromazine residue in pork. Method： The target analyte was extracted form sample with acetonitrile and determined by UPLA. Chromatographic column： BEH C18 1.7 μm× 50 mm×2.1 mm， flow rate： 0.4 ?mL/min， mobile phase： acetonitrile∶ammonium acetate=60∶40， column temperature： 40℃， detection wavelength： 254 nm， injection volume：10μL.Result：The detection limit was 15.0μg/kg.The linearity ranged form 0 to 1.00 mg/L with the correlation coefficient of 0.9998. The recovery was 87.7% to 101.0%， RSD was 1.2% to 2.6%. Conclusion： The method was suitable for determination of chlorpromazine residue in pork.

Key word：UPLC;chlorpromazine;residues;pork

氯丙嗪（Chlorpromazine，CHL）又稱冬眠靈，屬于吩噻嗪類藥物，是抗精神病類藥的一種，涉及中樞神經(jīng)、植物神經(jīng)、心血管和內(nèi)分泌系統(tǒng)等方面，其中主要被用作鎮(zhèn)靜藥。一些養(yǎng)殖戶因經(jīng)濟利益的驅(qū)使，在飼料中違規(guī)添加氯丙嗪抑制動物的運動，從而間接起到催肥作用。氯丙嗪在家畜飼養(yǎng)中的濫用，不僅會引起動物的中毒，還會通過在動物性食品的殘留直接危害到人類。歐盟早已將氯丙嗪列入禁用清單中，我國也規(guī)定氯丙嗪禁止用于食品性動物。建立豬肉中氯丙嗪的檢測方法，對于研究其在豬、禽體內(nèi)的代謝及組織殘留，實施豬、獸藥殘留監(jiān)控具有重要的實際意義。

目前主要采用高效液相色譜法，液質(zhì)聯(lián)用法，氣質(zhì)聯(lián)用法，化學(xué)發(fā)光法和免疫分析法檢測氯丙嗪，采用超高效液相色譜測定豬肉中氯丙嗪含量鮮有報道。本文采用乙腈進(jìn)行樣品前處理，超聲波提取，建立了超高效液相色譜測定豬肉在氯丙嗪的方法。

1 試驗部分

1.1 主要儀器與試劑

Waters Acquity UPLC H-Class超高效液相色譜儀（美國，Waters公司）;3-30K冷凍高速離心機（美國，Sigma公司）。

氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99.0%，CAS：50-53-3，Dr.Ehrenstrfer公司）;乙腈（色譜純，F(xiàn)isher公司）;試驗用水為電導(dǎo)率在18 MΩ·cm以上的超純水。

1.2 分析方法

1.2.1 色譜條件

ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）;流動相乙腈∶乙酸銨=60∶40;檢測波長254 nm;流速0.4 mL·min-1;柱溫40 ℃;進(jìn)樣量5 μL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精確稱取氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品0.0100 g，用少量乙腈溶解，并轉(zhuǎn)移到10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，此氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)儲備液濃度1.00 mg/mL。取氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)儲備液1.00 mL，轉(zhuǎn)移到100 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，此氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度10.00 μg/mL。4 ℃避光保存，保存期1個月。

精確吸取氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)使用液0.01 mL、0.50 mL、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL于10 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，過0.22 μm尼龍微孔濾膜，即為0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液。此溶液注意避光，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.3 樣品制備endprint

取適量粉碎混勻的樣品于50 mL離心管中，加25.00 mL乙腈，漩渦混勻30 s，超聲避光提取15 min，12000 r/min離心10 min，避光靜置20 min，取上清液過0.22 μm尼龍微孔濾膜，上機測定。

1.2.4 樣品測定

在色譜條件下，測定標(biāo)準(zhǔn)系列及樣品。以目標(biāo)化合物保留時間及特征光譜圖定性;以峰面積為響應(yīng)值，外標(biāo)法定量。

1.2.5 定量計算

式中：X-試樣中氯丙嗪的含量，單位為微克每千克（mg/kg）。

C-試液中氯丙嗪的含量，單位為微克每毫升（μg/mL）。

V-試樣稀釋總體積，單位為毫升（mL）。

m-試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

采用不同體積比的乙腈∶水、乙腈∶乙酸銨作為流動相，將1.00 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣檢測，比較出峰情況。綜合考慮峰形、峰寬、出峰時間，選擇乙腈∶乙酸銨=40∶60作為流動相。圖1為氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖。圖2為氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)掃描光譜圖。

按色譜條件進(jìn)行分析，圖3為空白豬肉樣品的色譜圖。圖4為添加1.00 μg/kg氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品樣品色譜圖。

2.2 方法的線性范圍和檢出限

精確吸取氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)使用液，用乙腈溶液依次稀釋，配制成0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液，以氯丙嗪的濃度和峰面積進(jìn)行回歸，得回歸方程y=69121.94x-396.59，相關(guān)系數(shù)=0.9999。

按照取樣10.0 g，定容25.00 mL，以基線噪聲3倍相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為檢出限，計算最低檢出限為7.5μg/kg，最低檢出質(zhì)量濃度為0.01 μg/mL。

2.3 方法的準(zhǔn)確度和精密度

以空白豬肉為測試對象，分別添加低（0.25 mg/kg）、中（2.50 mg/kg）、高（5.00 mg/kg）3個水平的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品做加標(biāo)回收實驗，以考察方法的準(zhǔn)確度（結(jié)果見表1）。

實驗結(jié)果表明，本方法均回收率為87.7%～101.0%，RSD為1.2%～2.6%，符合方法學(xué)要求。

要獲得氯丙嗪理想的回收率和較低的檢出限，需要注意以下方面：氯丙嗪見光易分解，樣品前處理全程需進(jìn)行避光操作，標(biāo)準(zhǔn)使用液要貯存在棕色容量瓶中;樣品離心后，須避光靜置20 min，使樣品進(jìn)一步沉降分層;微孔過濾膜須采用尼龍材質(zhì)（Nylon），避免目標(biāo)物吸附在微孔過濾膜;配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時，需采用100%乙腈，避免產(chǎn)生溶劑效應(yīng)。

3 結(jié)語

本方法采用乙腈溶液超聲提取，建立了超高效液相色譜測定豬肉中氯丙嗪的方法。方法重現(xiàn)性好，靈敏度高，操作簡便，精密度及準(zhǔn)確度滿意，適用于豬肉中氯丙嗪的日常監(jiān)測工作。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉建靜，楊曙明.氯丙嗪殘留技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國獸牧獸醫(yī)，2008，35（10）：141-144

[2] 袁圣柳，李曉鋒，姜曉滿，等.自動固相萃取-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定生活污水中13種抗精神病藥物[J].分析化學(xué);2013（1）.

[3] 渠巖，路勇，馮楠，等.基質(zhì)固相分散-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定畜禽肉中殘留的13種鎮(zhèn)靜藥物[J].食品科學(xué);2012（8）.

[4] 嚴(yán)麗娟，張峰，吳敏，等.UPLC-ESIMS/MS法測定動物飼料中苯二氮卓類藥物[J].分析測試學(xué)報，2011（11）.

[5] 于慧娟，沈康俊，李向軍，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定養(yǎng)殖魚中痕量安眠酮的殘留量[J].質(zhì)譜學(xué)報，2012（1）.endprint

取適量粉碎混勻的樣品于50 mL離心管中，加25.00 mL乙腈，漩渦混勻30 s，超聲避光提取15 min，12000 r/min離心10 min，避光靜置20 min，取上清液過0.22 μm尼龍微孔濾膜，上機測定。

1.2.4 樣品測定

在色譜條件下，測定標(biāo)準(zhǔn)系列及樣品。以目標(biāo)化合物保留時間及特征光譜圖定性;以峰面積為響應(yīng)值，外標(biāo)法定量。

1.2.5 定量計算

式中：X-試樣中氯丙嗪的含量，單位為微克每千克（mg/kg）。

C-試液中氯丙嗪的含量，單位為微克每毫升（μg/mL）。

V-試樣稀釋總體積，單位為毫升（mL）。

m-試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

采用不同體積比的乙腈∶水、乙腈∶乙酸銨作為流動相，將1.00 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣檢測，比較出峰情況。綜合考慮峰形、峰寬、出峰時間，選擇乙腈∶乙酸銨=40∶60作為流動相。圖1為氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖。圖2為氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)掃描光譜圖。

按色譜條件進(jìn)行分析，圖3為空白豬肉樣品的色譜圖。圖4為添加1.00 μg/kg氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品樣品色譜圖。

2.2 方法的線性范圍和檢出限

精確吸取氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)使用液，用乙腈溶液依次稀釋，配制成0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液，以氯丙嗪的濃度和峰面積進(jìn)行回歸，得回歸方程y=69121.94x-396.59，相關(guān)系數(shù)=0.9999。

按照取樣10.0 g，定容25.00 mL，以基線噪聲3倍相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為檢出限，計算最低檢出限為7.5μg/kg，最低檢出質(zhì)量濃度為0.01 μg/mL。

2.3 方法的準(zhǔn)確度和精密度

以空白豬肉為測試對象，分別添加低（0.25 mg/kg）、中（2.50 mg/kg）、高（5.00 mg/kg）3個水平的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品做加標(biāo)回收實驗，以考察方法的準(zhǔn)確度（結(jié)果見表1）。

實驗結(jié)果表明，本方法均回收率為87.7%～101.0%，RSD為1.2%～2.6%，符合方法學(xué)要求。

要獲得氯丙嗪理想的回收率和較低的檢出限，需要注意以下方面：氯丙嗪見光易分解，樣品前處理全程需進(jìn)行避光操作，標(biāo)準(zhǔn)使用液要貯存在棕色容量瓶中;樣品離心后，須避光靜置20 min，使樣品進(jìn)一步沉降分層;微孔過濾膜須采用尼龍材質(zhì)（Nylon），避免目標(biāo)物吸附在微孔過濾膜;配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時，需采用100%乙腈，避免產(chǎn)生溶劑效應(yīng)。

3 結(jié)語

本方法采用乙腈溶液超聲提取，建立了超高效液相色譜測定豬肉中氯丙嗪的方法。方法重現(xiàn)性好，靈敏度高，操作簡便，精密度及準(zhǔn)確度滿意，適用于豬肉中氯丙嗪的日常監(jiān)測工作。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉建靜，楊曙明.氯丙嗪殘留技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國獸牧獸醫(yī)，2008，35（10）：141-144

[2] 袁圣柳，李曉鋒，姜曉滿，等.自動固相萃取-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定生活污水中13種抗精神病藥物[J].分析化學(xué);2013（1）.

[3] 渠巖，路勇，馮楠，等.基質(zhì)固相分散-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定畜禽肉中殘留的13種鎮(zhèn)靜藥物[J].食品科學(xué);2012（8）.

[4] 嚴(yán)麗娟，張峰，吳敏，等.UPLC-ESIMS/MS法測定動物飼料中苯二氮卓類藥物[J].分析測試學(xué)報，2011（11）.

[5] 于慧娟，沈康俊，李向軍，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定養(yǎng)殖魚中痕量安眠酮的殘留量[J].質(zhì)譜學(xué)報，2012（1）.endprint

取適量粉碎混勻的樣品于50 mL離心管中，加25.00 mL乙腈，漩渦混勻30 s，超聲避光提取15 min，12000 r/min離心10 min，避光靜置20 min，取上清液過0.22 μm尼龍微孔濾膜，上機測定。

1.2.4 樣品測定

在色譜條件下，測定標(biāo)準(zhǔn)系列及樣品。以目標(biāo)化合物保留時間及特征光譜圖定性;以峰面積為響應(yīng)值，外標(biāo)法定量。

1.2.5 定量計算

式中：X-試樣中氯丙嗪的含量，單位為微克每千克（mg/kg）。

C-試液中氯丙嗪的含量，單位為微克每毫升（μg/mL）。

V-試樣稀釋總體積，單位為毫升（mL）。

m-試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

采用不同體積比的乙腈∶水、乙腈∶乙酸銨作為流動相，將1.00 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣檢測，比較出峰情況。綜合考慮峰形、峰寬、出峰時間，選擇乙腈∶乙酸銨=40∶60作為流動相。圖1為氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖。圖2為氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)掃描光譜圖。

按色譜條件進(jìn)行分析，圖3為空白豬肉樣品的色譜圖。圖4為添加1.00 μg/kg氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品樣品色譜圖。

2.2 方法的線性范圍和檢出限

精確吸取氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)使用液，用乙腈溶液依次稀釋，配制成0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液，以氯丙嗪的濃度和峰面積進(jìn)行回歸，得回歸方程y=69121.94x-396.59，相關(guān)系數(shù)=0.9999。

按照取樣10.0 g，定容25.00 mL，以基線噪聲3倍相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為檢出限，計算最低檢出限為7.5μg/kg，最低檢出質(zhì)量濃度為0.01 μg/mL。

2.3 方法的準(zhǔn)確度和精密度

以空白豬肉為測試對象，分別添加低（0.25 mg/kg）、中（2.50 mg/kg）、高（5.00 mg/kg）3個水平的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品做加標(biāo)回收實驗，以考察方法的準(zhǔn)確度（結(jié)果見表1）。

實驗結(jié)果表明，本方法均回收率為87.7%～101.0%，RSD為1.2%～2.6%，符合方法學(xué)要求。

要獲得氯丙嗪理想的回收率和較低的檢出限，需要注意以下方面：氯丙嗪見光易分解，樣品前處理全程需進(jìn)行避光操作，標(biāo)準(zhǔn)使用液要貯存在棕色容量瓶中;樣品離心后，須避光靜置20 min，使樣品進(jìn)一步沉降分層;微孔過濾膜須采用尼龍材質(zhì)（Nylon），避免目標(biāo)物吸附在微孔過濾膜;配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時，需采用100%乙腈，避免產(chǎn)生溶劑效應(yīng)。

3 結(jié)語

本方法采用乙腈溶液超聲提取，建立了超高效液相色譜測定豬肉中氯丙嗪的方法。方法重現(xiàn)性好，靈敏度高，操作簡便，精密度及準(zhǔn)確度滿意，適用于豬肉中氯丙嗪的日常監(jiān)測工作。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉建靜，楊曙明.氯丙嗪殘留技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國獸牧獸醫(yī)，2008，35（10）：141-144

[2] 袁圣柳，李曉鋒，姜曉滿，等.自動固相萃取-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定生活污水中13種抗精神病藥物[J].分析化學(xué);2013（1）.

[3] 渠巖，路勇，馮楠，等.基質(zhì)固相分散-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定畜禽肉中殘留的13種鎮(zhèn)靜藥物[J].食品科學(xué);2012（8）.

[4] 嚴(yán)麗娟，張峰，吳敏，等.UPLC-ESIMS/MS法測定動物飼料中苯二氮卓類藥物[J].分析測試學(xué)報，2011（11）.

[5] 于慧娟，沈康俊，李向軍，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定養(yǎng)殖魚中痕量安眠酮的殘留量[J].質(zhì)譜學(xué)報，2012（1）.endprint