蔣瓊鳳+袁志輝

摘要：以黃酮提取率為考察指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，進(jìn)行了微波輔助乙醇提取鳳尾蕨（Pteris multifide Poir）中總黃酮的研究，得到微波輔助提取鳳尾蕨中總黃酮的最佳工藝條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)60%，料液比1∶60（g∶mL），微波功率320 W，微波提取時(shí)間60 s。此工藝條件下，鳳尾蕨中總黃酮的提取率為3.318%。

關(guān)鍵詞：鳳尾蕨（Pteris multifide Poir）;總黃酮;微波輔助提取

中圖分類號(hào)：R282 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ?文章編號(hào)：0439-8114（2014）21-5238-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.21.049

Microwave Assisted Extraction of Flavonoids from Pteris multifide Poir

JIANG Qiong-feng， YUAN Zhi-hui

（Department of Life Science and Chemical Engineering， Hunan University of Science and Engineering， Yongzhou 425199，Hunan，China）

Abstract： To improve extraction rate of flavonoids， the single factor experiments and orthogonal experiments of microwave assisted extraction of total flavonoids from Pteris multifide Poir were conducted using ethanol as solvent. The optimal conditions were the concentration of ethanol of 60%， the material-liquid ratio of 1∶60（g∶mL）， the microwave power of 320 W， the extraction time of 60 s. Under the optimal conditions， the extraction rate of total flavonoids from Pteris multifide Poir was 3.318%.

Key words： Pteris multifide Poir;total flavonoids;microwave assisted extraction

黃酮類化合物是一類重要的生理活性物質(zhì)，具有抗氧化、抑菌、抗病毒、抗腫瘤、抗輻射、保肝、擴(kuò)冠、免疫調(diào)節(jié)等多種功效[1，2]。鳳尾蕨（Pteris multifide Poir）為鳳尾蕨科鳳尾蕨屬，是一種來源豐富、價(jià)格低廉的藥用植物[3]。鳳尾蕨中含有黃酮類、倍半萜、甾醇、酯類等多種活性成分，民間及臨床用全草清熱利濕、抗菌消炎、消腫止痛，其根莖治療糖尿病，抗腫瘤效果佳[4，5]。微波輔助提取技術(shù)是黃酮提取的一種有發(fā)展?jié)摿Φ男滦图夹g(shù)，它與傳統(tǒng)乙醇回流浸提相比較，具有高選擇性、提取時(shí)間短、黃酮收率高、雜質(zhì)浸出少等優(yōu)點(diǎn)[6-8]。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

將鳳尾蕨（湖南科技學(xué)院采集）洗凈后干燥至水分含量在0.5%以下，粉碎過40目篩備用。

1.2 ?試劑

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所），硝酸鋁、亞硝酸鈉、95%乙醇、氫氧化鈉等均為分析純。

1.3 ?主要儀器

752型紫外可見分光光度計(jì)（上海菁華科技儀器有限公司），AY220型電子分析天平（島津國(guó)際貿(mào)易公司），WD800GL型微波爐（格蘭仕微波爐電器有限公司），101-1A型電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）。

1.4 ?方法

1.4.1 ?標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 ?準(zhǔn)確稱取一定量干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品25 mg，用70%乙醇溶解，定容至50 mL容量瓶中，即為0.5 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL于50 mL容量瓶中，加70%乙醇至25 mL，再加入5%亞硝酸鈉溶液1.4 mL，搖勻，靜置6 min;加10%硝酸鋁溶液1.4 mL，搖勻，靜置6 min;加入1mol/L的氫氧化鈉溶液10 mL，搖勻;最后用70%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置15 min。以第一管為空白對(duì)照，用分光光度計(jì)在510 nm處[9]測(cè)定吸光度，以濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為A=10.15C-0.003 2，R=0.999 4，線性范圍為10.16～79.13 mg/mL。

1.4.2 ?總黃酮提取率的測(cè)定 ?取待測(cè)液一定體積于25 mL容量瓶中，加入0.7 mL 5%亞硝酸鈉和0.7 mL 10%的硝酸鋁，靜置6 min，再加入5 mL 1 mol/L的氫氧化鈉溶液并用70%乙醇定容，以70%乙醇溶液作為空白，在510 nm處測(cè)定吸光度值（A）。再由吸光度A和回歸方程計(jì)算出總黃酮質(zhì)量濃度C，然后根據(jù)以下公式計(jì)算出總黃酮提取率：

總黃酮提取率=[C×V×N×10-3/M0]×100%

式中，C為待測(cè)溶液中總黃酮的質(zhì)量濃度（mg/mL），V為待測(cè)樣品的總體積（mL），N為溶液稀釋的倍數(shù)，M0為鳳尾蕨樣品的質(zhì)量（g）。

1.4.3 ?單因素試驗(yàn)

1）微波功率對(duì)總黃酮提取率的影響。精確稱取0.50 g鳳尾蕨粉末5份裝入錐形瓶?jī)?nèi)，以70%乙醇為提取劑，料液比1∶40（g∶mL，下同），在微波功率分別為160、320、480、640、800 W下進(jìn)行提取，提取時(shí)間60 s。提取后過濾，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮得到1 mL濃縮液，用70%乙醇定容至10 mL。按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備法，在510 nm處測(cè)定吸光度，并計(jì)算總黃酮的提取率。

2）微波提取時(shí)間對(duì)總黃酮提取率的影響。以70%乙醇為提取劑，料液比1∶40，微波功率320 W下分別提取30、40、50、60、70 s。按照上述方法計(jì)算總黃酮的提取率。

3）乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮提取率的影響。以料液比1∶40，分別用50%、60%、70%、80%、90%的乙醇溶液，微波功率320 W下進(jìn)行提取，提取時(shí)間60 s，計(jì)算總黃酮的提取率。

4）料液比對(duì)總黃酮提取率的影響。以70%乙醇為提取劑，分別以1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70的料液比，在微波功率320 W下進(jìn)行提取，提取時(shí)間60 s，計(jì)算總黃酮的提取率。

1.4.4 ?正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) ?在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，從總黃酮提取率4個(gè)因素乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、微波功率和微波提取時(shí)間中選取影響較大的3個(gè)水平進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，研究最佳提取工藝條件。正交試驗(yàn)因素與水平見表1。

1.4.5 ?驗(yàn)證試驗(yàn) ?為進(jìn)一步考察上述最佳工藝的穩(wěn)定性和合理性，精確稱取0.50 g干燥恒重的鳳尾蕨3份，在優(yōu)化組合條件下進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備法，在510 nm處測(cè)定吸光度并計(jì)算總黃酮的提取率。

2 ? 結(jié)果與分析

2.1 ? 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 ?微波功率對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響 ?由圖1可知，微波功率為320 W時(shí)，鳳尾蕨總黃酮溶解較為充分而且分解較少，總黃酮提取率較高;當(dāng)微波功率小于320 W時(shí)，可能輻射能量低，不能使總黃酮充分溶解出來;當(dāng)微波功率大于320 W時(shí)，由于乙醇溶劑的揮發(fā)和部分黃酮的分解，使總黃酮的提取率逐漸降低。

2.1.2 ? 微波提取時(shí)間對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響 ?由圖2可知，當(dāng)微波提取時(shí)間小于60 s時(shí)，隨著微波提取時(shí)間的延長(zhǎng)，鳳尾蕨總黃酮的提取率逐漸增加，提取時(shí)間為60 s時(shí)，總黃酮提取率達(dá)到最高，當(dāng)時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)，總黃酮的提取率反而減小，這可能由于總黃酮在受熱過程中有部分結(jié)構(gòu)遭到破壞或某些成分喪失了，導(dǎo)致提取率下降。

2.1.3 ?乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響 ?由圖3可知，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)低于70%時(shí)，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大，鳳尾蕨總黃酮提取率不斷增加，乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%時(shí)，總黃酮的提取率達(dá)到最高，繼續(xù)增大乙醇體積分?jǐn)?shù)，總黃酮提取率開始下降，這可能是乙醇體積分?jǐn)?shù)大于70%時(shí)，鳳尾蕨中其他脂溶性物質(zhì)溶出量增加，競(jìng)爭(zhēng)同乙醇溶劑的結(jié)合，導(dǎo)致總黃酮的提取率降低。

2.1.4 ?料液比對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響 ?由圖4可知，隨著乙醇溶劑的增加，鳳尾蕨總黃酮的提取率明顯增加，當(dāng)料液比超過1∶60時(shí)，總黃酮提取率增加不明顯。從節(jié)約成本以及提取劑回收利用等角度出發(fā)，選用1∶40、1∶50、1∶60的料液比進(jìn)行正交試驗(yàn)。

2.2 ?正交試驗(yàn)結(jié)果

由正交試驗(yàn)的極差分析可知，乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、微波功率、提取時(shí)間對(duì)鳳尾蕨中總黃酮提取率均有不同程度的影響，其中提取時(shí)間對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響最大，各因素對(duì)鳳尾蕨中總黃酮提取率的影響大小順序依次是D、B、A、C，即提取時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、微波功率、料液比。鳳尾蕨中總黃酮的最佳提取工藝條件為A2B1C3D2，即微波功率320 W，乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%，料液比為1∶60，微波處理時(shí)間為60 s。

2.3 ?驗(yàn)證試驗(yàn)

采用總黃酮提取最佳工藝條件，進(jìn)行3組平行試驗(yàn)，得出鳳尾蕨中總黃酮的提取率平均值為3.318%，表明該工藝流程穩(wěn)定性較好。

3 ?小結(jié)與討論

本試驗(yàn)采用微波輔助乙醇提取鳳尾蕨中的總黃酮，結(jié)果表明，提取工藝條件中各因素對(duì)鳳尾蕨中總黃酮提取率的影響大小順序?yàn)槲⒉ㄌ崛r(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、微波功率、料液比。鳳尾蕨中總黃酮的最佳提取工藝條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%，料液比為1∶60，微波功率為320 W，提取時(shí)間為60 s，在此條件下鳳尾蕨中總黃酮提取率達(dá)到3.318%。

對(duì)于總黃酮的提取，國(guó)內(nèi)主要集中在銀杏、竹葉、黃刺玫花、山楂花、桑葉等植物，在鳳尾蕨中提取總黃酮還較少，尤其是采用微波輔助提取法。本試驗(yàn)采用微波輔助乙醇來提取鳳尾蕨中總黃酮，克服了熱水法易凝聚、糊化的不足，具有高效性、強(qiáng)選擇性、有效活性成分不易破壞等優(yōu)點(diǎn)。本研究結(jié)果比余俊等[9]、周國(guó)梁等[10]研究得到的總黃酮提取率高，同時(shí)降低了提取時(shí)間和溶劑體積分?jǐn)?shù)，可為工業(yè)化生產(chǎn)黃酮提供參考。

參考文獻(xiàn)：

[1] 肖海龍，高 ?爾，胡曉麗.銀杏葉總黃酮藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2005，16（12）：946-947.

[2] 王 ?芳.山楂葉總黃酮的藥理作用[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，34（2）：295-296.

[3] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大詞典上冊(cè)[M].上海：上?？茖W(xué)出版社，1993.487.

[4] 孫海燕，薛飛群，張可煜，等.中藥鳳尾草研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸醫(yī)寄生蟲病，2007，15（3）：42-46.

[5] 李鳳亞.風(fēng)尾草化學(xué)成分研究[D].昆明：云南大學(xué)，2012.

[6] 黃冬蘭，陳小康，徐永群，等.溪黃草中總黃酮的微波輔助提取工藝研究[J].韶關(guān)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，34（2）：33-36.

[7] 王麗昀.微波輔助提取天然產(chǎn)物有效成分工藝研究[D].北京：北京化工大學(xué)，2010.

[8] 張自萍.微波輔助提取技術(shù)在多糖研究中的應(yīng)用[J].中草藥，2006，37（4）：630-632.

[9] 余 ?俊，陳曉青，蔣新宇，等.鳳尾草中總黃酮的提取工藝研究[J].中成藥，2007，25（11）：1683-1685.

[10] 周國(guó)梁，周 ?賢，劉漢珍，等.鳳尾草總黃酮超聲波提取工藝研究[J].安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，26（3）：39-44.

（責(zé)任編輯 ?趙 ?娟）

1.4.3 ?單因素試驗(yàn)

1）微波功率對(duì)總黃酮提取率的影響。精確稱取0.50 g鳳尾蕨粉末5份裝入錐形瓶?jī)?nèi)，以70%乙醇為提取劑，料液比1∶40（g∶mL，下同），在微波功率分別為160、320、480、640、800 W下進(jìn)行提取，提取時(shí)間60 s。提取后過濾，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮得到1 mL濃縮液，用70%乙醇定容至10 mL。按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備法，在510 nm處測(cè)定吸光度，并計(jì)算總黃酮的提取率。

2）微波提取時(shí)間對(duì)總黃酮提取率的影響。以70%乙醇為提取劑，料液比1∶40，微波功率320 W下分別提取30、40、50、60、70 s。按照上述方法計(jì)算總黃酮的提取率。

3）乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮提取率的影響。以料液比1∶40，分別用50%、60%、70%、80%、90%的乙醇溶液，微波功率320 W下進(jìn)行提取，提取時(shí)間60 s，計(jì)算總黃酮的提取率。

4）料液比對(duì)總黃酮提取率的影響。以70%乙醇為提取劑，分別以1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70的料液比，在微波功率320 W下進(jìn)行提取，提取時(shí)間60 s，計(jì)算總黃酮的提取率。

1.4.4 ?正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) ?在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，從總黃酮提取率4個(gè)因素乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、微波功率和微波提取時(shí)間中選取影響較大的3個(gè)水平進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，研究最佳提取工藝條件。正交試驗(yàn)因素與水平見表1。

1.4.5 ?驗(yàn)證試驗(yàn) ?為進(jìn)一步考察上述最佳工藝的穩(wěn)定性和合理性，精確稱取0.50 g干燥恒重的鳳尾蕨3份，在優(yōu)化組合條件下進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備法，在510 nm處測(cè)定吸光度并計(jì)算總黃酮的提取率。

2 ? 結(jié)果與分析

2.1 ? 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 ?微波功率對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響 ?由圖1可知，微波功率為320 W時(shí)，鳳尾蕨總黃酮溶解較為充分而且分解較少，總黃酮提取率較高;當(dāng)微波功率小于320 W時(shí)，可能輻射能量低，不能使總黃酮充分溶解出來;當(dāng)微波功率大于320 W時(shí)，由于乙醇溶劑的揮發(fā)和部分黃酮的分解，使總黃酮的提取率逐漸降低。

2.1.2 ? 微波提取時(shí)間對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響 ?由圖2可知，當(dāng)微波提取時(shí)間小于60 s時(shí)，隨著微波提取時(shí)間的延長(zhǎng)，鳳尾蕨總黃酮的提取率逐漸增加，提取時(shí)間為60 s時(shí)，總黃酮提取率達(dá)到最高，當(dāng)時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)，總黃酮的提取率反而減小，這可能由于總黃酮在受熱過程中有部分結(jié)構(gòu)遭到破壞或某些成分喪失了，導(dǎo)致提取率下降。

2.1.3 ?乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響 ?由圖3可知，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)低于70%時(shí)，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大，鳳尾蕨總黃酮提取率不斷增加，乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%時(shí)，總黃酮的提取率達(dá)到最高，繼續(xù)增大乙醇體積分?jǐn)?shù)，總黃酮提取率開始下降，這可能是乙醇體積分?jǐn)?shù)大于70%時(shí)，鳳尾蕨中其他脂溶性物質(zhì)溶出量增加，競(jìng)爭(zhēng)同乙醇溶劑的結(jié)合，導(dǎo)致總黃酮的提取率降低。

2.1.4 ?料液比對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響 ?由圖4可知，隨著乙醇溶劑的增加，鳳尾蕨總黃酮的提取率明顯增加，當(dāng)料液比超過1∶60時(shí)，總黃酮提取率增加不明顯。從節(jié)約成本以及提取劑回收利用等角度出發(fā)，選用1∶40、1∶50、1∶60的料液比進(jìn)行正交試驗(yàn)。

2.2 ?正交試驗(yàn)結(jié)果

由正交試驗(yàn)的極差分析可知，乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、微波功率、提取時(shí)間對(duì)鳳尾蕨中總黃酮提取率均有不同程度的影響，其中提取時(shí)間對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響最大，各因素對(duì)鳳尾蕨中總黃酮提取率的影響大小順序依次是D、B、A、C，即提取時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、微波功率、料液比。鳳尾蕨中總黃酮的最佳提取工藝條件為A2B1C3D2，即微波功率320 W，乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%，料液比為1∶60，微波處理時(shí)間為60 s。

2.3 ?驗(yàn)證試驗(yàn)

采用總黃酮提取最佳工藝條件，進(jìn)行3組平行試驗(yàn)，得出鳳尾蕨中總黃酮的提取率平均值為3.318%，表明該工藝流程穩(wěn)定性較好。

3 ?小結(jié)與討論

本試驗(yàn)采用微波輔助乙醇提取鳳尾蕨中的總黃酮，結(jié)果表明，提取工藝條件中各因素對(duì)鳳尾蕨中總黃酮提取率的影響大小順序?yàn)槲⒉ㄌ崛r(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、微波功率、料液比。鳳尾蕨中總黃酮的最佳提取工藝條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%，料液比為1∶60，微波功率為320 W，提取時(shí)間為60 s，在此條件下鳳尾蕨中總黃酮提取率達(dá)到3.318%。

對(duì)于總黃酮的提取，國(guó)內(nèi)主要集中在銀杏、竹葉、黃刺玫花、山楂花、桑葉等植物，在鳳尾蕨中提取總黃酮還較少，尤其是采用微波輔助提取法。本試驗(yàn)采用微波輔助乙醇來提取鳳尾蕨中總黃酮，克服了熱水法易凝聚、糊化的不足，具有高效性、強(qiáng)選擇性、有效活性成分不易破壞等優(yōu)點(diǎn)。本研究結(jié)果比余俊等[9]、周國(guó)梁等[10]研究得到的總黃酮提取率高，同時(shí)降低了提取時(shí)間和溶劑體積分?jǐn)?shù)，可為工業(yè)化生產(chǎn)黃酮提供參考。

參考文獻(xiàn)：

[1] 肖海龍，高 ?爾，胡曉麗.銀杏葉總黃酮藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2005，16（12）：946-947.

[2] 王 ?芳.山楂葉總黃酮的藥理作用[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，34（2）：295-296.

[3] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大詞典上冊(cè)[M].上海：上?？茖W(xué)出版社，1993.487.

[4] 孫海燕，薛飛群，張可煜，等.中藥鳳尾草研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸醫(yī)寄生蟲病，2007，15（3）：42-46.

[5] 李鳳亞.風(fēng)尾草化學(xué)成分研究[D].昆明：云南大學(xué)，2012.

[6] 黃冬蘭，陳小康，徐永群，等.溪黃草中總黃酮的微波輔助提取工藝研究[J].韶關(guān)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，34（2）：33-36.

[7] 王麗昀.微波輔助提取天然產(chǎn)物有效成分工藝研究[D].北京：北京化工大學(xué)，2010.

[8] 張自萍.微波輔助提取技術(shù)在多糖研究中的應(yīng)用[J].中草藥，2006，37（4）：630-632.

[9] 余 ?俊，陳曉青，蔣新宇，等.鳳尾草中總黃酮的提取工藝研究[J].中成藥，2007，25（11）：1683-1685.

[10] 周國(guó)梁，周 ?賢，劉漢珍，等.鳳尾草總黃酮超聲波提取工藝研究[J].安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，26（3）：39-44.

（責(zé)任編輯 ?趙 ?娟）

1.4.3 ?單因素試驗(yàn)

1）微波功率對(duì)總黃酮提取率的影響。精確稱取0.50 g鳳尾蕨粉末5份裝入錐形瓶?jī)?nèi)，以70%乙醇為提取劑，料液比1∶40（g∶mL，下同），在微波功率分別為160、320、480、640、800 W下進(jìn)行提取，提取時(shí)間60 s。提取后過濾，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮得到1 mL濃縮液，用70%乙醇定容至10 mL。按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備法，在510 nm處測(cè)定吸光度，并計(jì)算總黃酮的提取率。

2）微波提取時(shí)間對(duì)總黃酮提取率的影響。以70%乙醇為提取劑，料液比1∶40，微波功率320 W下分別提取30、40、50、60、70 s。按照上述方法計(jì)算總黃酮的提取率。

3）乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮提取率的影響。以料液比1∶40，分別用50%、60%、70%、80%、90%的乙醇溶液，微波功率320 W下進(jìn)行提取，提取時(shí)間60 s，計(jì)算總黃酮的提取率。

4）料液比對(duì)總黃酮提取率的影響。以70%乙醇為提取劑，分別以1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70的料液比，在微波功率320 W下進(jìn)行提取，提取時(shí)間60 s，計(jì)算總黃酮的提取率。

1.4.4 ?正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) ?在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，從總黃酮提取率4個(gè)因素乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、微波功率和微波提取時(shí)間中選取影響較大的3個(gè)水平進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，研究最佳提取工藝條件。正交試驗(yàn)因素與水平見表1。

1.4.5 ?驗(yàn)證試驗(yàn) ?為進(jìn)一步考察上述最佳工藝的穩(wěn)定性和合理性，精確稱取0.50 g干燥恒重的鳳尾蕨3份，在優(yōu)化組合條件下進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備法，在510 nm處測(cè)定吸光度并計(jì)算總黃酮的提取率。

2 ? 結(jié)果與分析

2.1 ? 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 ?微波功率對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響 ?由圖1可知，微波功率為320 W時(shí)，鳳尾蕨總黃酮溶解較為充分而且分解較少，總黃酮提取率較高;當(dāng)微波功率小于320 W時(shí)，可能輻射能量低，不能使總黃酮充分溶解出來;當(dāng)微波功率大于320 W時(shí)，由于乙醇溶劑的揮發(fā)和部分黃酮的分解，使總黃酮的提取率逐漸降低。

2.1.2 ? 微波提取時(shí)間對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響 ?由圖2可知，當(dāng)微波提取時(shí)間小于60 s時(shí)，隨著微波提取時(shí)間的延長(zhǎng)，鳳尾蕨總黃酮的提取率逐漸增加，提取時(shí)間為60 s時(shí)，總黃酮提取率達(dá)到最高，當(dāng)時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)，總黃酮的提取率反而減小，這可能由于總黃酮在受熱過程中有部分結(jié)構(gòu)遭到破壞或某些成分喪失了，導(dǎo)致提取率下降。

2.1.3 ?乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響 ?由圖3可知，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)低于70%時(shí)，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大，鳳尾蕨總黃酮提取率不斷增加，乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%時(shí)，總黃酮的提取率達(dá)到最高，繼續(xù)增大乙醇體積分?jǐn)?shù)，總黃酮提取率開始下降，這可能是乙醇體積分?jǐn)?shù)大于70%時(shí)，鳳尾蕨中其他脂溶性物質(zhì)溶出量增加，競(jìng)爭(zhēng)同乙醇溶劑的結(jié)合，導(dǎo)致總黃酮的提取率降低。

2.1.4 ?料液比對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響 ?由圖4可知，隨著乙醇溶劑的增加，鳳尾蕨總黃酮的提取率明顯增加，當(dāng)料液比超過1∶60時(shí)，總黃酮提取率增加不明顯。從節(jié)約成本以及提取劑回收利用等角度出發(fā)，選用1∶40、1∶50、1∶60的料液比進(jìn)行正交試驗(yàn)。

2.2 ?正交試驗(yàn)結(jié)果

由正交試驗(yàn)的極差分析可知，乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、微波功率、提取時(shí)間對(duì)鳳尾蕨中總黃酮提取率均有不同程度的影響，其中提取時(shí)間對(duì)鳳尾蕨總黃酮提取率的影響最大，各因素對(duì)鳳尾蕨中總黃酮提取率的影響大小順序依次是D、B、A、C，即提取時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、微波功率、料液比。鳳尾蕨中總黃酮的最佳提取工藝條件為A2B1C3D2，即微波功率320 W，乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%，料液比為1∶60，微波處理時(shí)間為60 s。

2.3 ?驗(yàn)證試驗(yàn)

采用總黃酮提取最佳工藝條件，進(jìn)行3組平行試驗(yàn)，得出鳳尾蕨中總黃酮的提取率平均值為3.318%，表明該工藝流程穩(wěn)定性較好。

3 ?小結(jié)與討論

本試驗(yàn)采用微波輔助乙醇提取鳳尾蕨中的總黃酮，結(jié)果表明，提取工藝條件中各因素對(duì)鳳尾蕨中總黃酮提取率的影響大小順序?yàn)槲⒉ㄌ崛r(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、微波功率、料液比。鳳尾蕨中總黃酮的最佳提取工藝條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%，料液比為1∶60，微波功率為320 W，提取時(shí)間為60 s，在此條件下鳳尾蕨中總黃酮提取率達(dá)到3.318%。

對(duì)于總黃酮的提取，國(guó)內(nèi)主要集中在銀杏、竹葉、黃刺玫花、山楂花、桑葉等植物，在鳳尾蕨中提取總黃酮還較少，尤其是采用微波輔助提取法。本試驗(yàn)采用微波輔助乙醇來提取鳳尾蕨中總黃酮，克服了熱水法易凝聚、糊化的不足，具有高效性、強(qiáng)選擇性、有效活性成分不易破壞等優(yōu)點(diǎn)。本研究結(jié)果比余俊等[9]、周國(guó)梁等[10]研究得到的總黃酮提取率高，同時(shí)降低了提取時(shí)間和溶劑體積分?jǐn)?shù)，可為工業(yè)化生產(chǎn)黃酮提供參考。

參考文獻(xiàn)：

[1] 肖海龍，高 ?爾，胡曉麗.銀杏葉總黃酮藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2005，16（12）：946-947.

[2] 王 ?芳.山楂葉總黃酮的藥理作用[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，34（2）：295-296.

[3] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大詞典上冊(cè)[M].上海：上?？茖W(xué)出版社，1993.487.

[4] 孫海燕，薛飛群，張可煜，等.中藥鳳尾草研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸醫(yī)寄生蟲病，2007，15（3）：42-46.

[5] 李鳳亞.風(fēng)尾草化學(xué)成分研究[D].昆明：云南大學(xué)，2012.

[6] 黃冬蘭，陳小康，徐永群，等.溪黃草中總黃酮的微波輔助提取工藝研究[J].韶關(guān)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，34（2）：33-36.

[7] 王麗昀.微波輔助提取天然產(chǎn)物有效成分工藝研究[D].北京：北京化工大學(xué)，2010.

[8] 張自萍.微波輔助提取技術(shù)在多糖研究中的應(yīng)用[J].中草藥，2006，37（4）：630-632.

[9] 余 ?俊，陳曉青，蔣新宇，等.鳳尾草中總黃酮的提取工藝研究[J].中成藥，2007，25（11）：1683-1685.

[10] 周國(guó)梁，周 ?賢，劉漢珍，等.鳳尾草總黃酮超聲波提取工藝研究[J].安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，26（3）：39-44.

（責(zé)任編輯 ?趙 ?娟）