張 銓 陳明華（通訊作者） 吳俊山 朱慶斌

福建福州總醫(yī)院九五臨床部 莆田 351100

近年來，如何有效避免和治療脊髓損傷是臨床上研究的重點(diǎn)，有學(xué)者主張缺血后處理和缺氧后處理的改變，可有效減輕脊髓缺血-再灌注損傷，從而達(dá)到保護(hù)脊髓的作用［1］。但對于該方法的治療機(jī)制尚未明確。本研究主要以48只雄性大鼠為研究對象，分析了缺血后處理對鼠脊髓缺血-再灌注損傷中MDA和SOD的影響。具體介紹如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇48只雄性大鼠，將其隨機(jī)分成對照組、PA、PB、PC 4組，每組12只，對照組給予單純?nèi)毖?再灌注處理，PA、PB、PC分別于缺血后15s、30s、60s后阻閉腹主動脈15min，繼續(xù)灌注15s、30s、60s，如此反復(fù)操作3次。PA、PB、PC 3組大鼠均在最后一次缺血處理后再灌注1h。

1.2 方法 實(shí)驗(yàn)前所有動物嚴(yán)格禁食，實(shí)驗(yàn)當(dāng)天給予濃度為20g／L的戊巴比妥鈉對大鼠進(jìn)行靜脈注射，手術(shù)過程中持續(xù)輸注4mL／（kg·h）復(fù)方乳酸鈉，并進(jìn)行股動脈穿刺，通過壓力傳感器對大鼠的股動脈壓進(jìn)行監(jiān)測，讀取脈率（PR），從大鼠肛門放入溫度探頭對肛門溫度持續(xù)監(jiān)測。對缺血前、缺血15min，再灌注15minPaCO2、PaO2、pH及血糖進(jìn)行測定。另外，對所有大鼠缺血前、缺血15min以及再灌注1h時的MDA含量、SOD活性進(jìn)行測定，試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，分光光度計(jì)由美國Deckman公司生產(chǎn)的DU800型核酸蛋白分析儀。所有操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以（±s）表示，采用兩樣本獨(dú)立t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

血漿中MDA含量及SOD活性測定，見表1。由表中數(shù)據(jù)可知，缺血前和缺血10min，4組大鼠血漿中MDA含量及SOD活性差異不顯著，而再灌注1h，PA、PBMDA含量較對照組明顯更低，SOD活性較對照組明顯更高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 血漿中MDA含量及SOD活性測定

3 討論

缺血后處理和缺血預(yù)處理不同，預(yù)處理具有早期和延遲兩種保護(hù)作用，而后處理通常是在早期進(jìn)行脊髓缺血-再灌注的保護(hù)［2-3］。臨床研究發(fā)現(xiàn)［4-5］，鼠脊髓缺血后再灌注期間，隨著氧自由基含量的升高，SOD活性會下降，提示氧自由基在脊髓缺血再灌注中具有重要參與作用。另外，機(jī)體主要通過非酶系統(tǒng)和酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，非酶系統(tǒng)對生物膜中的多不飽和脂肪酸具有攻擊作用，產(chǎn)生醛基、羥基、酮基、羧基等脂質(zhì)過氧化物，因此，MDA含量的測定可以有效反映脂質(zhì)過氧化的程度，一定程度上反映細(xì)胞損傷的程度［6-7］。以適當(dāng)?shù)拈g隔短期內(nèi)進(jìn)行HBO-PC可誘導(dǎo)脊髓持續(xù)性缺血耐受，其機(jī)制可能是HBO-PC生成反應(yīng)性氧自由基，介導(dǎo)NF-KB DNA結(jié)合活性于預(yù)處理早期、晚期兩時相增高，以及反復(fù)預(yù)處理刺激后的時相延長作用導(dǎo)致Bcl-2在預(yù)處理后早、中、晚三個時相表達(dá)增高。高壓氧預(yù)處理所誘導(dǎo)的脊髓持續(xù)性缺血耐受的機(jī)制與NF-KB的產(chǎn)生有關(guān)［8］。SOD作為細(xì)胞內(nèi)主要的自由基清除劑和抗氧化酶，其表達(dá)水平的降低，可表明SOD對組織細(xì)胞免受毒性氧自由基損傷的保護(hù)效果減弱。缺血后處理可減少再灌注后氧自由基的過度生成，使其清除作用加強(qiáng)，從而緩解生物膜結(jié)構(gòu)和功能受到氧自由基的破壞，阻斷氧自由基的凋亡途徑，較好地拮抗細(xì)胞凋亡的發(fā)生，達(dá)到較好的保護(hù)作用。因此，我們認(rèn)為，早期短時間缺血后處理在預(yù)防大鼠脊髓缺血-再灌注損傷中具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，進(jìn)行早期短時間缺血后處理可有效抑制再灌注后生成過量氧自由基，可以一定程度上保護(hù)大鼠脊髓缺血-再灌注損傷。

［1］Lombardi V，Valko L，Stolc S，et al.Free radicals in rabbit spinal cord ischemia：electron spin resonance spectroscopy and correlation with SOD activity［J］.Cell Molecular Neurobiol，2012，4（11）：399-412.

［2］Finkel E.The mitochondrion：is it central to apoptosis［J］.Science，2011，5517（36）：720-730.

［3］劉合年，楊淑霞，白樹榮.大鼠脊髓缺血再灌注后HO-1表達(dá)的變化和意義［J］.西南國防醫(yī)藥，2009，76（9）：68-69.

［4］熊利澤，楊 靜，徐 寧，等.缺血后處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的影響［J］.中華麻醉學(xué)雜志，2012，25（7）：508-510.

［5］孫凱，劉志蘇，孫 權(quán).缺血后處理對大鼠肝臟缺血再灌注損傷細(xì)胞調(diào)亡的影響［J］.外科理論與實(shí)踐，2011，6（8）：471-474.

［6］張慶林，賈德澤，宮崧峰.X線照射促進(jìn)大鼠脊髓損傷區(qū)結(jié)構(gòu)及損傷后功能的恢復(fù)［J］.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，56（5）：6-8.

［7］馮大雄，楊天府，劉洋.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)蛛網(wǎng)膜下腔移植治療大鼠脊髓損傷及其對T細(xì)胞亞群影響的研究［J］.中國修復(fù)重建外科雜志，2011，43（5）；987-989.

［8］楊亞冬，房國堅(jiān)，陳勇.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對脊髓損傷大鼠功能和結(jié)構(gòu)修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究［J］.科技創(chuàng)新導(dǎo)報(bào)，2010，6（9）：879-880.