張弘

（天津市食品研究所有限公司，天津301609）

銀杏（Gingko biloba Linn）又名白果、公孫樹(shù)，屬于我國(guó)的特產(chǎn)植物資源，是現(xiàn)存種子植物中最古老的植物，其產(chǎn)量占世界總量的70%以上。黃酮類化合物是銀杏葉中主要的藥效成分[1]。銀杏葉黃酮主要是以黃酮糖苷的形式存在，主要是由山奈酚、槲皮素以及異鼠李素等黃酮苷元與葡萄糖等單糖以O(shè)-糖苷鍵聯(lián)接而成，以該種形式存在的黃酮占到提取物黃酮總含量的95%以上[2]。

銀杏黃酮類化合物的生理活性作用非常廣泛[3-4]，具有軟化血管、生物抗氧化性、抗衰老、清除自由基作用、降低毛細(xì)血管通透性、降血脂降血壓作用[5]、抗菌作用、降低血糖作用、免疫作用、抗癌作用、鎮(zhèn)痛作用、抗炎作用、對(duì)消化性潰瘍的保護(hù)作用等藥用保健功能，其對(duì)冠狀動(dòng)脈硬化、高血壓及心絞痛等疾病療效明顯，具有較強(qiáng)的藥用價(jià)值。目前，銀杏黃酮化合物的提取方法有超臨界流體提取、有機(jī)溶劑提取、水提取等方法[6]。本研究通過(guò)采用水提法技術(shù)分離和提取銀杏葉黃酮，以期獲得較高的黃酮類化合物得率和黃酮含量的提取工藝，為研究和利用銀杏葉黃酮類活性物質(zhì)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

干銀杏葉：天津陽(yáng)成生物科技有限公司提供；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品：上海豪曼生物科技有限公司；亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、鹽酸、蒸餾水。

1.2 儀器

DHG-9240A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；FW135型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)：北京市永光明醫(yī)療儀器廠；FA2004型電子天平：上海精科天平；TDA-8002恒溫水浴鍋：天津市中環(huán)實(shí)驗(yàn)電爐有限公司；Spectrum-723可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海光譜儀器有限公司；LD5-10型低速離心機(jī)：北京醫(yī)用離心機(jī)廠；FD-1A-50型真空冷凍干燥機(jī)：北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 銀杏葉預(yù)處理

取一定量的銀杏葉置于高速萬(wàn)能粉碎機(jī)中，粉碎2 min后取出，過(guò)40目篩，放在燒杯里備用。

1.3.2 水浸法提取銀杏葉黃酮類物質(zhì)

準(zhǔn)確稱取銀杏葉粉末5 g，置于圓底燒瓶中，加入200 mL蒸餾水，在不同的時(shí)間、溫度、pH、料液比條件下，水浴振蕩，離心10 min，取上層清液，搖勻，準(zhǔn)確吸取1 mL置于10 mL比色管中，比色。

1.3.3 銀杏葉黃酮類物質(zhì)含量及黃酮得率的測(cè)定

銀杏葉黃酮含量測(cè)定采用NaNO2-AL（NO3）3-NaOH絡(luò)合吸光法[8]，總黃酮含量測(cè)定采用以蘆丁為對(duì)照的分光光度法。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制按如下步驟進(jìn)行：

準(zhǔn)確稱取6.5 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣品，用水溶解后定容于50 mL容量瓶，得濃度為0.13 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液。準(zhǔn)確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液 0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 于10 mL比色管中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的AL（NO3）3溶液0.3mLl，搖勻，放置6 min后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%的NaOH溶液4.0 mL，再用蒸餾水定容，搖勻，以蒸餾水為空白參比，10 min后用1 cm比色皿于500 nm處測(cè)定吸光度A，以吸光值為縱坐標(biāo)，蘆丁取樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Rutin standard curve

得到蘆丁含量Y（mg/mL）與吸光度A間的回歸方程：

Y=0. 0809A+0. 0002 R2=0. 9999

取1 mL黃酮浸提液，用1.3.3方法測(cè)定浸提液中黃酮含量。

浸提液中總黃酮得率計(jì)算公式：

2 結(jié)果與分析

水浸提法提取銀杏葉黃酮正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

表1 銀杏葉黃酮水浸提法提取工藝因素水平表L9（34）Table 1 Factor and levels about ginkgo biloba flavonoids water extraction process

如表1和表2所示，通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果可知，水浸提法提取銀杏葉黃銅的最佳工藝條件為A2B2C1D1，即 pH 為 9.5、固液比為 1∶40（g/mL）、浸提時(shí)間為 3.5 h、浸提溫度為85℃。其中溫度對(duì)浸取率的影響最大，其次是浸提時(shí)間。采用最佳工藝條件，銀杏葉黃酮的提取率達(dá)到1.49%，影響因子大小的排序，方差與極差分析結(jié)果是一致的。

表2 水浸提法提取銀杏葉黃酮正交試驗(yàn)表Table 2 Orthogonal experiment result of water extraction to extract flavonoids from ginkgo

3 結(jié)論

銀杏葉中黃酮類化合物的浸取可以用水作為浸取劑。以水作浸取劑時(shí)，溫度對(duì)浸取率的影響最大。若溫度低，浸取率低；而升高溫度有利于浸取率增加，但溫度過(guò)高，黃酮類化合物的活性易被破壞。試驗(yàn)中選擇85℃為佳。固液比（銀杏葉∶浸取劑）為1∶40（g/mL），浸取3.5 h時(shí)浸取率最高。浸取率隨pH的增加而增加，但堿性過(guò)強(qiáng)會(huì)降低黃酮類化合物的生物活性，因此選擇pH=10為宜。采用最佳工藝條件，銀杏葉黃酮的提取率達(dá)到1.49%。

[1] 苗建英.銀杏葉中黃酮類化合物提取工藝研究[J].中成藥,2006,28(7)：17-18.

[2] 蔡健,華景清,周翠英.黃酮提取工藝研究進(jìn)展[J].淮陰工學(xué)院學(xué)報(bào),2003,12(5)：83

[3] 張小清.酶解溶劑提取銀杏葉活性成分工藝條件[J].應(yīng)用化學(xué),2005,34(10)：641-643

[4] 祝玲,葉曼紅.微波輔助萃取銀杏葉中的黃酮類物質(zhì)的研究[J].材料科學(xué),2006(8)：11-12

[5] 康西鵬,張?jiān)?銀杏葉的研究進(jìn)展及應(yīng)用[J].山西食品工業(yè),2001(1)：17-18

[6] 縱偉.酶法提取銀杏葉中總黃酮的研究[J].食品與機(jī)械,2000(1)：13-15