尤正芳 張 紅 (復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院青浦分院產(chǎn)科，上海 201700)

子宮內(nèi)膜樣腺癌病變發(fā)展過程中基因和蛋白表達(dá)失調(diào)是重要的促進(jìn)因素〔1〕。EZH2是PCG家族中的一種在進(jìn)化上高度保守的基因，是唯一的H3K27甲基化催化酶〔2〕，與組蛋白甲基化修飾有關(guān)，在細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育中起重要作用〔3〕，NSD2是一種含有SET結(jié)構(gòu)域的組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶，屬于NS(D nuclear receptor binding SET domain containing)蛋白家族成員〔4〕，研究表明其蛋白的SET結(jié)構(gòu)域與經(jīng)典的H3K36甲基化酶SET2同源，NSD2可能是通過催化H3K36甲基化起作用的〔5〕。它們?cè)谀[瘤發(fā)生中的作用受到學(xué)者的重視〔6，7〕。轉(zhuǎn)移抑制基因(nm)23是腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，其表達(dá)下調(diào)或丟失時(shí)可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展〔8〕。本文關(guān)注老年子宮內(nèi)膜樣腺癌術(shù)后組織中EZH2、NSD2和nm23的表達(dá)及臨床意義。

1 材料和方法

1.1 臨床資料 收集近3年在我院行子宮內(nèi)膜樣腺癌根治手術(shù)的老年患者114例作為觀察組，常規(guī)留取腫瘤組織的蠟塊，年齡60～85歲，平均69.2歲。納入均經(jīng)病理醫(yī)師再次確診，并符合世界衛(wèi)生組織(WHO)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)收集因子宮脫垂或子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)后的老年子宮內(nèi)膜組織70例作為對(duì)照組，年齡60～83歲，平均69.0歲。兩組一般臨床資料無明顯差別(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 免疫組化檢測(cè)EZH2、NSD2和nm23蛋白的表達(dá) EZH2、NSD2和nm23蛋白均購(gòu)自武漢博士德生物工程公司，檢測(cè)均應(yīng)用免疫組化SABC法。操作均由同一主管技師進(jìn)行，嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟，嚴(yán)格質(zhì)量控制。

1.3 EZH2、NSD2和nm23蛋白檢測(cè)結(jié)果的判定方法 EZH2和NSD2以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應(yīng)細(xì)胞，nm23以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。每張切片觀察10個(gè)細(xì)胞密集的區(qū)域(400倍)，取其平均值，以陽性細(xì)胞≥25%定為陽性，以陽性細(xì)胞＜25%定為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS6.12軟件進(jìn)行分析，組間比較采用χ2檢驗(yàn)、相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組EZH2、NSD2和nm23陽性表達(dá)的比較 觀察組EZH2和NSD2表達(dá)陽性率明顯高于對(duì)照組，nm23表達(dá)陽性率明顯低于對(duì)照組(P均＜0.000 1)。見表1。

2.2 EZH2、NSD2和nm23在觀察組不同臨床特征中的表達(dá)比較 觀察組EZH2、NSD2和nm23陽性表達(dá)與腫瘤的肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Ki67表達(dá)的增殖指數(shù)密切相關(guān)。見表2。

2.3 觀察組EZH2、NSD2和nm23表達(dá)的相關(guān)性分析 觀察組中EZH2和NSD2(r=0.46，P=0.041 2)的表達(dá)具有正相關(guān)性，而 EZH2 和 nm23(r=-0.45，P=0.035 2)、NSD2 和 nm23(r=-0.43，P=0.013 2)的表達(dá)具有負(fù)相關(guān)性。

表1 兩組EZH2、NSD2和nm23陽性表達(dá)率的比較〔n(%)〕

表2 EZH2、NSD2和nm23在觀察組不同臨床特征中的表達(dá)比較〔n(%)〕

3 討論

老年人子宮內(nèi)膜常伴有萎縮，而萎縮后的異常增生過程提示腫瘤性改變，此時(shí)伴有基因和蛋白的異常表達(dá)。研究認(rèn)為組蛋白修飾的機(jī)制較為復(fù)雜，其氨基末端通過組蛋白乙?；⒓谆蛄姿峄M(jìn)行翻譯后修飾〔9〕。EZH2作為一種組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶，長(zhǎng)約40 kb，包含 20 個(gè)外顯子〔10，11〕，目前認(rèn)為 EZH2 的作用有:①通過調(diào)控組蛋白乙酰化酶的活性介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄抑制〔12，13〕;②通過調(diào)節(jié)組蛋白去乙酶化酶的活性，介導(dǎo)組蛋白去乙?；敢蕾囆曰虺聊?③促進(jìn)細(xì)胞增殖〔14〕。NSD2是一種含有SET結(jié)構(gòu)域的組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶，屬于NSD蛋白家族成員〔15〕。NSD2存在的 SET結(jié)構(gòu)域，與 H3K36甲基化酶SET2同源，因此NSD2可能對(duì)H3K36的甲基化有催化功能〔16〕。NSD2的功能有:①激活轉(zhuǎn)錄〔17〕;②調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的增殖過程〔18〕;③調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的黏附作用;④對(duì)轉(zhuǎn)移過程的調(diào)節(jié)〔19〕。nm23是一種轉(zhuǎn)移抑制基因，其編碼蛋白存在于幾乎所有正常細(xì)胞中，在高分化腫瘤中也常表達(dá)，而在低分化或具有高度轉(zhuǎn)移潛能的惡性腫瘤中不表達(dá)或低表達(dá)〔20〕，因此也有學(xué)者認(rèn)為nm23是判斷腫瘤有無轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)〔21，22〕。

本研究結(jié)果提示EZH2和NSD2高表達(dá)、nm23低表達(dá)可以有效促進(jìn)腫瘤的發(fā)生過程。3種蛋白異常表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)性生長(zhǎng)過程和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程。3種蛋白參與腫瘤的異常增殖過程。EZH2、NSD2可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖過程，縮短細(xì)胞G1期，增加細(xì)胞S期。也有觀點(diǎn)認(rèn)為EZH2、NSD2可以共同引導(dǎo)組蛋白去乙酰化，從而使RUNX3蛋白表達(dá)丟失，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖〔23〕。EZH2、NSD2還可以使E-cadherin的表達(dá)下降，使細(xì)胞間的連接松散，腫瘤細(xì)胞易于脫離原發(fā)灶，進(jìn)而發(fā)生轉(zhuǎn)移〔24〕。還有研究認(rèn)為EZH2、NSD2可以誘導(dǎo)HDAC活性，介導(dǎo) HDAC 依賴性基因的沉默〔14，25〕。EZH2、NSD2 和 nm23 可能具有協(xié)同作用，EZH2、NSD2之間的協(xié)同性與其自身的結(jié)構(gòu)有關(guān)系，但是EZH2、NSD2與轉(zhuǎn)移抑制基因nm23的協(xié)同作用機(jī)制尚不清楚。EZH2、NSD2與細(xì)胞的增殖過程相關(guān)，而nm23也對(duì)細(xì)胞增殖有影響，因此三者作用機(jī)制是否通過腫瘤細(xì)胞的增殖過程聯(lián)系在一起呢?但是其具體調(diào)節(jié)過程及通路研究有待更多基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)來證實(shí)。由于浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Ki67表達(dá)的增殖指數(shù)均為臨床判斷生物學(xué)行為和預(yù)后的重要指標(biāo)，因此三種蛋白的異常表達(dá)可能對(duì)判斷腫瘤的生物學(xué)行為有一定價(jià)值。

1 杜善平，齊宗利，王亞琴，等.EZH2在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)〔J〕.山東醫(yī)藥，2012;52(25):19-21.

2 Zhao H，Xu Y，Mao Y，et al.Effects of EZH2 gene on the growth and migration of hepatocellular carcinoma HepG2 cells〔J〕.Hepatobiliary Surg Nutr，2013;2(2):78-83.

3 Wang Y，Xiang W，Wang M，et al.Methyl jasmonate sensitizes human bladder cancer cells to gambogic acid-induced apoptosis through downregulation of EZH2 expression by miR-101〔J〕.Br J Pharmacol，2014;171(3):618-35.

4 He C，Li F，Zhang J，et al.The methyltransferase NSD3 has chromatinbinding motifs，PHD5-C5HCH，that are distinct from other NSD(nuclear receptor SET domain)family members in their histone H3 recognition〔J〕.J Biol Chem，2013;288(7):4692-703.

5 Min DJ，Ezponda T，Kim MK，et al.MMSET stimulates myeloma cell growth through microRNA-mediated modulation of c-MYC〔J〕.Leukemia，2013;27(3):686-94.

6 Sasaki M，Matsubara T，Kakuda Y，et al.Immunostaining for polycomb group protein EZH2 and senescent marker p16INK4a may be useful to differentiate cholangiolocellular carcinoma from ductular reaction and bile duct adenoma〔J〕.Am J Surg Pathol，2014;38(3):364-9.

7 Yang P，Guo L，Duan ZJ，et al.Histone methyltransferase NSD2/MMSET mediates constitutive NF-κB signaling for cancer cell proliferation，survival，and tumor growth via a feed-forward loop〔J〕.Mol Cell Biol，2012;32(15):3121-31.

8 Lionello M，Blandamura S，Agostini M，et al.A prognostic role for Nm23-H1 in laryngeal carcinoma treated with postoperative radiotherapy:an introductory investigation〔J〕.Eur Arch Otorhinolaryngol，2013;270(1):197-203.

9 李海波，王 禾，武國(guó)軍.EZH2和PTEN蛋白聯(lián)合檢測(cè)與腎透明細(xì)胞癌的相關(guān)性研究〔J〕.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009;40(3):199-201.

10 Zhao L，Yu Y，Wu J，et al.Role of EZH2 in oral squamous cell carcinoma carcinogenesis〔J〕.Gene，2014;537(2):197-202.

11 Xu B，Abourbih S，Sircar K，et al.Enhancer of zeste homolog 2 expression is associated with metastasis and adverse clinical outcome in clear cell renal cell carcinoma:a comparative study and review of the literature〔J〕.Arch Pathol Lab Med，2013;137(10):1326-36.

12 曹相玫，郭東更，谷 雨，等.EZH2在原發(fā)性肝癌發(fā)展中的作用及臨床病理意義〔J〕.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2012;28(23):3521-2.

13 Cai K，Wan Y，Sun G，et al.Let-7a inhibits proliferation and induces apoptosis by targeting EZH2 in nasopharyngeal carcinoma cells〔J〕.Oncol Rep，2012;28(6):2101-6.

14 唐移忠，田金華，曾定元.組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶EZH2在卵巢癌組織中的表達(dá)及意義〔J〕.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2009;36(10):1980-2.

15 Jaffe JD，Wang Y，Chan HM，et al.Global chromatin profiling reveals NSD2 mutations in pediatric acute lymphoblastic leukemia〔J〕.Nat Genet，2013;45(11):1386-91.

16 Huang Z，Wu H，Chuai S，et al.NSD2 is recruited through its PHD domain to oncogenic gene loci to drive multiple myeloma〔J〕.Cancer Res，2013;73(20):6277-88.

17 Oyer JA，Huang X，Zheng Y，et al.Point mutation E1099K in MMSET/NSD2 enhances its methyltranferase activity and leads to altered global chromatin methylation in lymphoid malignancies〔J〕.Leukemia，2014;28(1):198-201.

18 Kuo AJ，Cheung P，Chen K，et al.NSD2 links dimethylation of histone H3 at lysine 36 to oncogenic programming〔J〕.Mol Cell，2011;44(4):609-20.

19 Morishita M，di Luccio E.Cancers and the NSD family of histone lysine methyltransferases〔J〕.Biochim Biophys Acta，2011;1816(2):158-63.

20 Shahebrahimi K，Madani SH，F(xiàn)azaeli AR，et al.Diagnostic value of CD56 and nm23 markers in papillary thyroid carcinoma〔J〕.Indian J Pathol Microbiol，2013;56(1):2-5.

21 Cubukcu E，Kanat O，F(xiàn)atih Olmez O，et al.Prognostic significance of estrogen receptor，progesterone receptor，HER2/neu，Ki-67，and nm23 expression in patients with invasive breast cancer〔J〕.J Buon，2013;18(2):359-65.

22 Lionello M，Blandamura S，Lovato A，et al.A high nuclear nm23-H1 expression is associated with a better prognosis in elderly patients with laryngeal carcinoma〔J〕.Acta Otolaryngol，2013;133(8):874-80.

23 Pei H，Zhang L，Luo K，et al.MMSET regulates histone H4K20 methylation and 53BP1 accumulation at DNA damage sites〔J〕.Nature，2011;470(7332):124-8.

24 Yamada-Okabe T，Imamura K，Kawaguchi N，et al.Functional characterization of the zebrafish WHSC1-related gene，a homolog of human NSD2〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2010;402(2):335-9.

25 Li Y，Trojer P，Xu CF，et al.The target of the NSD family of histone lysine methyltransferases depends on the nature of the substrate〔J〕.J Biol Chem，2009;284(49):34283-95.