鐘曉敬 王秀珍 盛宏光 (湖州市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，浙江 湖州 33000)

高血脂、肥胖伴隨著一系列的健康問(wèn)題，包括增加了糖尿病、胰島素抵抗、脂肪肝、動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)，還包括一些退行性疾病，如老年癡呆，呼吸系統(tǒng)疾病和腫瘤類疾病〔1〕。魚油中的多不飽和脂肪酸是細(xì)胞膜磷脂的重要成分，多不飽和脂肪酸具有調(diào)節(jié)血脂作用，魚油中的多不飽和脂肪酸通過(guò)抑制肝臟脂肪酶基因和糖脂解酶基因表達(dá)，進(jìn)而抑制肝臟脂肪的生成〔2〕。魚油中的多不飽和脂肪酸還能調(diào)節(jié)ATP-檸檬酸裂解酶基因的表達(dá)，影響能量代謝〔3〕。本實(shí)驗(yàn)采用魚油抑制高脂誘導(dǎo)脂肪模型，效果較滿意。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及飼料 以8周齡大無(wú)特定病原體(SPF)級(jí)雄性小鼠野生型(WT)，雄性，體重19～21.4 g，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(滬)2004-0910;使用許可證號(hào):SYXK(滬)2004-0013，并飼養(yǎng)在中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)院營(yíng)養(yǎng)所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。普通飼料出上海生科院營(yíng)養(yǎng)所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，高脂飼料購(gòu)于Research Diets公司，貨號(hào)是D14292。高脂(高糖)飼料成分:其中含10%蔗糖，10%豬油，5%膽固醇由基礎(chǔ)鼠飼料加蔗糖、煉豬油和蛋黃按比搭配制作高脂高糖飼料:其比例為豬油18%，蔗糖20%，蛋黃3%，基礎(chǔ)飼料59%。

1.2 藥物和試劑 魚油購(gòu)于美國(guó)安利公司A8914，主要成分為不飽和脂肪酸、EPA和DHA，多甲醛，中性樹脂等。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 MD-100型自動(dòng)生化儀、恒溫水浴鍋、電子分析平、滴定架、萬(wàn)能架等，顯微鏡OLYMPUS BX51，切片機(jī)，Leica RM2016展片機(jī)Leica HI1210。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的準(zhǔn)備 選取健康雄性SPF級(jí)小鼠30只，體重19～21.4 g，按體重隨機(jī)分三組?；A(chǔ)對(duì)照組:喂基礎(chǔ)飼料同時(shí)灌胃給予生理鹽水5 ml·kg-1·d-1。高脂組:喂高脂飼料同時(shí)灌胃給予生理鹽水5 ml·kg-1·d-1。魚油組:喂高脂飼料同時(shí)灌胃給予魚油5 ml·kg-1·d-1。每籠2只，自由飲水。

1.4.2 觀察指標(biāo) ①體重的增長(zhǎng)率:從實(shí)驗(yàn)開始到實(shí)驗(yàn)結(jié)束對(duì)小鼠每3天測(cè)量一次體重并做記錄，體重增長(zhǎng)率(%)=增加的體重/實(shí)驗(yàn)前的體重(開始實(shí)驗(yàn)第1天測(cè)得的體重)。②攝食量:分別記錄每周每日平均進(jìn)食量。③肝臟切片，各組小鼠的胰腺切片蘇木精伊紅(HE)染色，在顯微鏡下取拍照，脂肪含量:取新鮮肝組織0.5 g，用無(wú)水硫酸鈉研磨成粉，再放入索氏提取器中，用無(wú)水乙醚萃取肝臟中的脂肪。④血膽固醇(TC)，甘油三酯(TG)，清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和血肌酐(Scr)的測(cè)定:實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，引頸法處死小鼠，心臟取血，離心后收集上清液檢測(cè)TC，TG，ALT，AST和SCr的水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行方差分析q檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠平均進(jìn)食量比較 三組進(jìn)食量均無(wú)顯著性差異(P＞0.01)。見圖1。

2.2 肝臟HE染色 中央靜脈(CV)，門靜脈(PV)，魚油組脂肪明顯少于高脂組。

2.3 各組的平均體重增長(zhǎng)率 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚油組和高脂組小鼠體重平均增長(zhǎng)率顯著高于對(duì)照組(q=8.245，14.742，P均＜0.01)，而魚油組低于高脂組(q=11.768，P＜0.01)。見表 1。

2.4 各組肝腎脂肪含量及肝腎功能指標(biāo)的比較 魚油組肝臟脂肪含量較高脂組明顯降低(P＜0.05);魚油組TC、TG含量顯著低于高脂組(P均＜0.01)。見表1，表2。

圖1 各組小鼠1～14 w平均進(jìn)食量

圖2 各組小鼠的肝臟切片HE染色

表1 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組檢測(cè)指標(biāo)(s，n=10，%)

表1 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組檢測(cè)指標(biāo)(s，n=10，%)

與對(duì)照組比較:1)P＜0.01;與由于組比較:2)P＜0.01

組別 體重增長(zhǎng)率 肝臟脂肪含量對(duì)照組 8.54±2.13 9.88±2.55高脂組 47.22±5.87 36.12±7.121)2)魚油組 32.68±3.78 22.4±5.371)

表2 各組肝腎實(shí)驗(yàn)指標(biāo)比較(s，n=10)

表2 各組肝腎實(shí)驗(yàn)指標(biāo)比較(s，n=10)

與對(duì)照組比較:1)P＜0.01;與魚油組比較:2)P＜0.01

對(duì)照組 23.38±2.99 101.67±12.45 63.58±5.97 2.52±0.34 0.89±0.27高脂組 24.04±2.89 106.88±12.95 65.49±5.12 7.33±0.551)2)3.89±0.141)2)魚油組 24.23±2.01 104.26±12.05 64.33±5.29 3.56±0.63 1.56±0.45

3 討論

肥胖不僅影響人們的工作和日常生活，而且同多種疾病的發(fā)病有關(guān)〔4〕。但迄今為止尚無(wú)理想的減肥方法，所以肥胖的發(fā)生機(jī)制成為研究的熱點(diǎn)〔5〕。從進(jìn)化的理論來(lái)看，動(dòng)物在脂肪組織儲(chǔ)存多余高能TG的能力可以使動(dòng)物度過(guò)經(jīng)常遇到的食物缺乏期，使生命得以延續(xù)?？梢?，肥胖是生物進(jìn)化的結(jié)果〔6〕。但是，在食物充足的當(dāng)今時(shí)代，過(guò)多的能量?jī)?chǔ)備易導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。機(jī)體有一個(gè)復(fù)雜的生理系統(tǒng)來(lái)調(diào)節(jié)能量代謝，使之處在一個(gè)適當(dāng)?shù)乃奖３帜芰科胶狻?〕。肥胖，高血脂和脂肪肝之間也有重要的聯(lián)系，高脂血癥是代謝紊亂的標(biāo)志〔8〕，也是脂肪肝的主要誘因。魚油是深海魚類體內(nèi)不飽和脂肪的簡(jiǎn)稱 ，富含不飽和脂酸EPA和DHA，EPA能顯著地降低總TG和極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-C)水平。DHA能引起HDL2-C/HDL3-C比值的顯著升高。魚油中的多不飽和脂肪酸通過(guò)抑制肝臟脂肪酶基因和糖脂解酶基因表達(dá)，進(jìn)而抑制肝臟脂肪的生成。魚油中的多不飽和脂肪酸能直接參加細(xì)胞核的活動(dòng)、調(diào)控某些基因如肝脂肪酸合成酶(FAS)基因的轉(zhuǎn)錄〔2〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，魚油能抑制高脂組小鼠體重的增長(zhǎng)，這可能與魚油組的減少脂肪含量有關(guān)。魚油能夠調(diào)節(jié)體內(nèi)紊亂的脂質(zhì)平衡，可能還具有防治對(duì)脈粥樣硬化，胰島素抵抗，脂肪肝等疾病的潛在作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明魚油對(duì)肝腎功能沒有明顯的影響，無(wú)明顯的不良反應(yīng)。

1 Semenkovich CF.Insulin resistance and atherosclerosis〔J〕.J Clin Invest，2006;116(7):1813-22.

2 Blanke WL，Clarke SD.Suppression of rat hepatic fatty acid synthase and S14 gene transcription by dietary polyunsaturated fat〔J〕.J Nutr，1990;120(12):1727-9.

3 Fukuda H，Iritani N，Katsurada A，et al.Insulin and polyunsaturated fatty acid-responsive region(s)of rat ATP citrates lyase gene promoter〔J〕.FEBS Lett，1996;12:380(1-2):204-7.

4 James PT，Leach R，Kalamara E，et al.The worldwide obesity epidemic〔J〕.Nature，2001;9(4):228-33.

5 Eguchi Yuichiro.Obesity and fatty liver〔J〕.J Japan Med Soc Spin Cord Lesion，1999;12(1):62-3.

6 Popkin BM.The nutrition transition in low-income countries〔J〕.Nutr Rev，1994;52(9):285-98.

7 Must A，Spadano J，Coakley EH，et al.The disease burden associated with overweight and obesity〔J〕.JAMA，1999;282(16):1523-9.

8 Whitaker RC，Dietz WH.Role of the prenatal environment in the development of obesity〔J〕.J Pediatr，1998;132(5):768-76.