錢宏波 周曉冬

(西安市第八醫(yī)院檢驗(yàn)科，710061)

我國(guó)是乙肝大國(guó)，屬于乙肝病毒(HBV)高流行區(qū)，HBV傳染性強(qiáng)，在我國(guó)發(fā)病率高[1]。因此HBV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)具有很重要的篩查和診斷意義，其實(shí)驗(yàn)方法也逐漸增多[2]。HBV外膜蛋白由S蛋白、前S1(pre-S1)和前S2(pre-S2)組成，pre-S1是乙肝病毒外膜蛋白的重要組成部分，其所含的肝細(xì)胞膜受體對(duì)乙肝病毒感染肝細(xì)胞和機(jī)體的免疫應(yīng)答具有十分重要的作用，研究表明HBV pre-S1抗原陽(yáng)性率與HBV-DNA陽(yáng)性率一致，其能夠反映HBV在患者體內(nèi)的復(fù)制情況[3]。目前，臨床實(shí)驗(yàn)室大多采用ELISA方法檢測(cè)pre-S1，隨著化學(xué)發(fā)光技術(shù)的日益成熟，利用化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)pre-S1在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用[4]。本研究利用化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)乙肝表面抗原(HBsAg)陽(yáng)性患者不同乙肝模式乙肝pre-S1蛋白，旨在探討其臨床價(jià)值，為臨床提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013-02—2014-02在本院檢測(cè)HBsAg結(jié)果為陽(yáng)性患者400例，患者來(lái)自門診和住院部。其中男230例，女170例；年齡17～81歲，平均(49.2±18.5)歲。本研究所有患者均獲得知情同意，并上報(bào)本院學(xué)術(shù)委員會(huì)批準(zhǔn)備案。

1.2 儀器與試劑 pre-S1和乙肝兩對(duì)半的定量檢測(cè)采用雅培ARCHITECT i2000化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析儀及其配套試劑，由美國(guó)雅培公司生產(chǎn)；pre-S1所使用的試劑為上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司提供的乙型肝炎病毒pre-S1抗原檢測(cè)試劑盒[國(guó)食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2010第3400465號(hào)]，儀器為鄭州安圖生物工程有限公司生產(chǎn)的Autobio LUMO型化學(xué)發(fā)光儀。

1.3 試驗(yàn)方法 不同乙肝模式的定量采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析，嚴(yán)格按照試劑盒上的說(shuō)明操作，結(jié)果的判斷為：≥0.05 IU/mL時(shí)，HBsAg陽(yáng)性；≥10 mIU/mL時(shí)，HBsAb陽(yáng)性；S/CO≥1時(shí)，HBeAg和HBcAb陽(yáng)性；S/CO≤1時(shí)，HBeAb陽(yáng)性。pre-S1的測(cè)定采用化學(xué)發(fā)光技術(shù)，利用化學(xué)免疫分析儀測(cè)定每孔R(shí)LU值后計(jì)算S/CO值，S/CO≥1時(shí)判斷為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乙肝模式分布 本研究中共有7種不同的乙肝模式。Ⅰ：HBsAg＋HBeAg＋HBcAb陽(yáng)性；Ⅱ：HBsAg＋HBeAg＋HBeAb＋HBcAb陽(yáng)性；Ⅲ：HBsAg＋HBsAb＋HBeAg＋HBcAb陽(yáng)性；Ⅳ：HBsAg＋HBsAb＋HBeAg＋HBeAb＋HBcAb陽(yáng)性；Ⅴ：HBsAg＋HBeAb＋HBcAb陽(yáng)性；Ⅵ：HBsAg＋HBsAb＋HBeAb＋HBcAb陽(yáng)性；Ⅶ：HBsAg＋HBcAb陽(yáng)性。其分布及pre-S1陽(yáng)性率(表1)，可見(jiàn)HBV大三陽(yáng)模式中pre-S1陽(yáng)性率較高。

2.2 HBsAg濃值與pre-S1的關(guān)系 將HBsAg按照濃度值分為5組，對(duì)濃度值在＞250的標(biāo)本使用雅培HBsAg Auto試劑自動(dòng)稀釋500倍后重新檢測(cè)乙肝表面抗原，部分“大三陽(yáng)”模式患者HBsAg濃度值升高到10 000以上，顯示當(dāng)HBsAg濃度增加，HBV病毒載量的增加，前S1蛋白陽(yáng)性率也增加。Ⅰ：HBsAg濃度值0.05～50；Ⅱ：HBsAg濃度值51～250；Ⅲ：HBsAg濃度值251～1 000；Ⅳ：HBsAg濃度值1 001～5 000；Ⅴ：HBsAg濃度值＞5 000。比較5組pre-S1陽(yáng)性率，結(jié)果(表2)，HBsAg濃度值與pre-S1陽(yáng)性率具有相關(guān)性，HBsAg濃度值越高，pre-S1陽(yáng)性率越高。

2.3 HBeAg陽(yáng)性及陰性患者中pre-S1陽(yáng)性率 HBeAg陽(yáng)性及陰性患者中pre-S1陽(yáng)性率比較χ2＝54.55，P＜0.01(表3)。

表1 400例患者乙肝模式分布及pre-S1陽(yáng)性率

表2 不同HBsAg濃度值的pre-S1陽(yáng)性率

表3 HBeAg陽(yáng)性及陰性患者中pre-S1陽(yáng)性率比較

3 討論

化學(xué)發(fā)光技術(shù)是一種新興的非放射免疫分析方法，其原理為化學(xué)發(fā)光技術(shù)和抗原-抗體的特異性反應(yīng)，具有靈敏度高、精密度高、廉價(jià)、快速等優(yōu)點(diǎn)，目前已經(jīng)在臨床上廣泛使用[5]。利用化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢出HBV pre-S1較ELISA法更加準(zhǔn)確和敏感。

HBV pre-S1是急性HBV早期感染的重要標(biāo)志，在患者谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高達(dá)到峰值之前，pre-S1已經(jīng)達(dá)到了較高的水平，甚至在HBV核酸檢出前就可檢測(cè)到[6]。臨床上常常將pre-S1作為急性HBV預(yù)后判斷的重要指標(biāo)，pre-S1轉(zhuǎn)陰越早，提示患者預(yù)后越好。有研究表明[7]，亞病毒科里在HBV感染的過(guò)程中能夠增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)病毒的復(fù)制和其基因表達(dá)，而這被證明是pre-S蛋白反式激活觸發(fā)。除此之外，還有研究表明HBV包膜形成的過(guò)程需要HBsAg、pre-S1和pre-S2蛋白的參與[8]。

HBV HBsAg的濃度值能反映出HBV病毒的滴度，本研究中HBsAg濃度值與pre-S1陽(yáng)性率呈正相關(guān)，在HBsAg濃度值＜250時(shí)，pre-S1蛋白陽(yáng)性率相對(duì)較低，而當(dāng)HBsAg濃度值＞250時(shí)，pre-S1陽(yáng)性率顯著升高。本研究中，HBsAg濃度值＜250時(shí)pre-S1呈陽(yáng)性患者多為HBeAg陽(yáng)性，這表明HBV HBsAg濃度值與病毒載量具有一定的相關(guān)性，反映出pre-S1與HBV在患者體內(nèi)的復(fù)制有關(guān)。

本研究中，HBeAg陰性時(shí)，仍有較高的pre-S1陽(yáng)性率(76.10%)，這可能是由于HBV病毒仍然處于感染狀態(tài)，但其基因發(fā)生了變異，不能檢出HBeAg，因此HBV發(fā)生變異時(shí)，只測(cè)定HBeAg來(lái)判斷HBV復(fù)制水平不能反映出真實(shí)情況，這可能與HBV逃避機(jī)體免疫攻擊有關(guān)。因此pre-S1與HBeAg相比能夠更加準(zhǔn)確地反映出患者體內(nèi)HBV的復(fù)制情況。

綜上所述，利用化學(xué)發(fā)光技術(shù)測(cè)定HBsAg陽(yáng)性HBV患者血清pre-S1蛋白對(duì)HBV早期感染的診斷、預(yù)后判斷和檢測(cè)病毒復(fù)制情況具有重要的臨床意義，且廉價(jià)易在臨床推廣。

[1]陳銀萍，吳愛(ài)萍，余亮科，等.組合模型對(duì)乙肝發(fā)病趨勢(shì)的預(yù)測(cè)研究[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2014，39(1)：52-56.

[2]楊笑瓊，何海洪，楊秀珠，等.ELISA法和MEIA法測(cè)定乙肝病毒血清標(biāo)志物的比較研究[J].北方藥學(xué)，2014，11(2)：16-17.

[3]董運(yùn)啟.乙型肝炎病毒前S1蛋白檢測(cè)的臨床價(jià)值[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33(S1)：20-21.

[4]顧春瑜，許瓊，趙喬妹，等.化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)乙肝前S1蛋白的臨床價(jià)值[J].感染、炎癥、修復(fù)，2013，14(2)：107-109.

[5]李璐，邢文革.化學(xué)發(fā)光技術(shù)在HCV和HIV檢測(cè)中的應(yīng)用[J].中國(guó)艾滋病性病，2011，17(3)：382-284.

[6]黃啟強(qiáng)，黃麗慶，周曉蘭，等.乙型肝炎病毒前S1抗原與傳統(tǒng)標(biāo)志物相關(guān)性分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8(11)：1341-1343.

[7]張和平，林國(guó)躍，王萍，等.HBV前S-2蛋白檢測(cè)與HBV-DNA和乙肝二對(duì)半模式相關(guān)性研究[J].醫(yī)學(xué)綜述，2011，17(1)：139-140.

[8]楊晉榮，楊棟梁.HBeAg陰性HBV感染者不同病毒載量與前S1抗原和大蛋白關(guān)系研究[J].臨床合理用藥雜志，2011，4(33)：12-13.