朱永潔，陳 鑫，邴春梅，張 琳，董 蒨

(青島大學(xué)附屬醫(yī)院，山東青島266003)

同源盒基因(HOX)是一類在進(jìn)化上高度保守的基因，對(duì)下游靶基因具有調(diào)節(jié)作用。HOX基因在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、中軸骨、胃腸道、尿殖管、外生殖器和肢體發(fā)育中發(fā)揮重要作用。有研究揭示HOX基因?qū)σ幌盗心[瘤蛋白的調(diào)控機(jī)制具有重要意義［1，2］。神經(jīng)母細(xì)胞瘤是最常見的小兒惡性實(shí)體腫瘤，臨床表現(xiàn)多樣化，早期易轉(zhuǎn)移，確診時(shí)多為晚期，預(yù)后不佳［3，4］。本研究旨在探討小兒神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織中HOXC9蛋白的表達(dá)與腫瘤發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系，為神經(jīng)母細(xì)胞瘤的臨床治療和預(yù)后評(píng)估提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2005年1月～2012年1月青島大學(xué)附屬醫(yī)院收治的神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒112例，男61例，女51例;年齡48 d～13歲。采用國(guó)際神經(jīng)母細(xì)胞瘤分期系統(tǒng)(INSS)分期:Ⅰ期10例，Ⅱ期17例，Ⅲ期40例，Ⅳ期35例，Ⅳ-S期10例。按國(guó)際神經(jīng)母細(xì)胞瘤協(xié)作組(INPC)制定的分類標(biāo)準(zhǔn)分類［5］:未分化型神經(jīng)母細(xì)胞瘤38例，分化差型神經(jīng)母細(xì)胞瘤59例，分化型神經(jīng)母細(xì)胞瘤15例。其中66例出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移:有局部和遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者20例，有遠(yuǎn)處器官或骨髓轉(zhuǎn)移者46例。本研究得到青島大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。所有患兒接受手術(shù)治療，術(shù)中留取腫瘤組織。術(shù)后電話隨訪患兒生存情況，隨訪時(shí)間為10～97個(gè)月，隨訪到78例患兒，失訪34例。

1.2 腫瘤組織中HOXC9蛋白的檢測(cè) 腫瘤組織石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，采用免疫組化染色法(SP法)進(jìn)行染色檢測(cè)。HOXC9兔多克隆抗體購(gòu)自德國(guó)antibodies-online公司。按照常規(guī)SP法進(jìn)行檢測(cè)，設(shè)空白對(duì)照。結(jié)果判定:采用雙盲法，由兩名有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師共同進(jìn)行。以胞核出現(xiàn)棕色顆粒為HOXC9蛋白陽性。在高倍鏡下(×200)對(duì)每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)視野中陽性細(xì)胞數(shù)和腫瘤細(xì)胞的總數(shù)，陽性細(xì)胞＜10%為-、10%～50%為+、51%～75%為++、＞75%為 +++，+、++、+++視為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 MedCalc11.4統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn);Kaplan-Merier法建立生存曲線，Log-rank檢驗(yàn)比較生存率的差異。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HOXC9蛋白表達(dá)與神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒臨床病理參數(shù)的關(guān)系 112例患兒瘤組織中HOXC9蛋白呈-、+、++、+++者分別為34、38、34、6例，陽性表達(dá)率為69.6%;HOXC9蛋白呈-、+、++、+++表達(dá)的鏡下表現(xiàn)見圖1。HOXC9蛋白表達(dá)與神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒臨床病理特征的關(guān)系見表1。表1顯示，HOXC9蛋白的表達(dá)有一定的差異:年齡小的患兒HOXC9蛋白陽性表達(dá)率高于年齡大的患兒(P ＜0.05);Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ-S 期患兒HOXC9蛋白陽性表達(dá)率高于Ⅲ、Ⅳ期患兒(P均＜0.05);細(xì)胞分化程度越高，HOXC9蛋白陽性表達(dá)率越高(P＜0.01);腫瘤未轉(zhuǎn)移患兒HOXC9蛋白陽性表達(dá)率高于腫瘤轉(zhuǎn)移患兒(P＜0.01)。

圖1 神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織中HOXC9蛋白的表達(dá)(×200)

表1 HOXC9蛋白表達(dá)與神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.2 HOXC9蛋白表達(dá)與神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒預(yù)后的關(guān)系 112例患兒中隨訪到78例，將隨訪到的患兒分為HOXC9陰性組和HOXC9陽性組，分別有19例和59例。Kaplan-Merier法建立生存曲線，見圖2。HOXC9陽性表達(dá)神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒的生存率為63.7%，陰性表達(dá)患兒的生存率為15.8%，兩者相比，P＜0.01。

3 討論

圖2 患兒生存曲線

神經(jīng)母細(xì)胞瘤腫瘤起病部位隱匿，病程發(fā)展迅速，65%的患兒初診時(shí)已有骨髓、骨骼、遠(yuǎn)處淋巴結(jié)的結(jié)移，臨床治療效果較差。目前認(rèn)為神經(jīng)母細(xì)胞瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是一個(gè)多種癌基因參與的復(fù)雜過程［6］。研究這些相關(guān)癌基因或其分子生物學(xué)標(biāo)記物與神經(jīng)母細(xì)胞瘤的生物學(xué)特性、發(fā)病機(jī)制之間的關(guān)系，有助于更好地判斷神經(jīng)母細(xì)胞瘤的預(yù)后、尋找新的治療方法、提高患兒的生存率。

HOX基因?qū)NA合成的轉(zhuǎn)錄過程起調(diào)控作用［7］，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在胚胎及正常成熟組織中應(yīng)沉默的HOX基因表達(dá)于成熟組織，通常引起腫瘤的發(fā)生，而一部分在正常成熟組織表達(dá)的HOX基因在相應(yīng)腫瘤中往往低表達(dá)或表達(dá)缺失［8］。已有研究［9～12］發(fā)現(xiàn)，HOX 基因與宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌及乳腺癌、胃腸道腫瘤、肺癌、肝癌、白血病的發(fā)生密切相關(guān)。HOXC9是HOX基因家族重要的一員，有研究［13］發(fā)現(xiàn)其在結(jié)直腸癌的不同時(shí)期都有過度表達(dá)，腹部腫瘤組織中HOXC9蛋白的表達(dá)水平明顯高于位于頸/胸部或腎上腺的神經(jīng)母細(xì)胞瘤［14］。本研究發(fā)現(xiàn)，HOXC9蛋白在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中陽性表達(dá)率為69.6%，HOXC9蛋白表達(dá)與患兒年齡及神經(jīng)母細(xì)胞瘤臨床病理分期、細(xì)胞分化程度、轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，而與患兒的性別無顯著相關(guān)性。神經(jīng)母細(xì)胞瘤的分化狀態(tài)影響臨床治療效果，誘導(dǎo)分化是本病的一個(gè)治療策略，而HOXC9蛋白是神經(jīng)母細(xì)胞瘤分化的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子［15，16］。通過對(duì)78例神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒的隨訪分析發(fā)現(xiàn)，HOXC9陽性表達(dá)患兒的生存率高于陰性表達(dá)患兒，表明瘤組織HOXC9蛋白表達(dá)與神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒的生存密切相關(guān)，這與文獻(xiàn)［16］報(bào)道一致。

綜上所述，瘤組織HOXC9蛋白的表達(dá)與神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒的年齡及神經(jīng)母細(xì)胞瘤臨床病理分期、細(xì)胞分化程度、轉(zhuǎn)移情況有密切關(guān)系，與患兒的生存時(shí)間密切相關(guān)，HOXC9可能對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤臨床的治療及其預(yù)后評(píng)價(jià)有一定的指導(dǎo)作用。

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