劉曉晗

(棗莊市立第四醫(yī)院，山東棗莊277500)

腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的原發(fā)性腫瘤，具有侵襲性生長(zhǎng)、無(wú)控性增殖、易復(fù)發(fā)的特點(diǎn)［1，2］。其本質(zhì)上是一種多基因異常疾病，通過(guò)原癌基因的過(guò)表達(dá)，同時(shí)伴隨抑癌基因的突變?nèi)笔?，從而使腫瘤細(xì)胞逃避正常生長(zhǎng)的調(diào)控機(jī)制。以腦膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)基因?yàn)榘悬c(diǎn)的基因治療已成為醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)［3］。SOX基因具有一個(gè)HMG-box基序保守區(qū)，SOX2屬于其中B亞族中的一員，SOX2可能通過(guò)下調(diào)細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及磷酸化Rb蛋白表達(dá)、上調(diào)p27蛋白表達(dá)，抑制胃癌上皮細(xì)胞增殖，導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡［4］。2013年10月，我們觀(guān)察了60例腦膠質(zhì)瘤患者瘤組織中SOX2基因及蛋白的表達(dá)情況，現(xiàn)分析結(jié)果，探討其與腦膠質(zhì)瘤臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2004年9月～2010年1月在我院手術(shù)治療的腦膠質(zhì)瘤患者60例，男32例，女28例，年齡17～73歲，平均42.3歲，腫瘤直徑≤5 cm 44例，＞5 cm 16例。術(shù)中留取腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本60例為腦膠質(zhì)瘤組，相應(yīng)瘤旁組織標(biāo)本60例為對(duì)照組，組織標(biāo)本經(jīng)液氮速凍后 -80℃保存。按照WHO標(biāo)準(zhǔn)(2008年修改版)Ⅰ期18例，Ⅱ期22例，Ⅲ期12例，Ⅳ期8例?；颊咝g(shù)前均未行放療及化療。本研究征得患者同意并簽署知情同意書(shū)，經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)

1.2.1 SOX2 mRNA表達(dá) 采用 RT-PCR法。Trizol法提取細(xì)胞總RNA，合成cDNA。采用Oligo6.0軟件設(shè)計(jì)引物及探針序列，引物、GAPDH及探針均由上海生工生物工程有限公司合成。20 μL反應(yīng)體系包括Platinum Quantitative PCR SuperMix-UDG 10 μL、上下游引物各10 μmol/L、TaqMan 探針0.4 μL。PCR反應(yīng)條件為50℃溫育2 min，95℃預(yù)變性3 min，95 ℃ 變性 30 s、60 ℃ 1 min，共 40 個(gè)循環(huán)?！鰿T值為各樣本中目的基因的CT值與管家基因GAPDH的CT值之差，計(jì)算SOX2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.2 SOX2蛋白表達(dá) 采用Western blot法。制備4%濃縮膠和10%分離膠的聚丙烯酰胺垂直平板凝膠，40 μg總蛋白經(jīng)80 V電壓電泳3 h后，電轉(zhuǎn)70 V 3 h轉(zhuǎn)印至PVDF膜。TBS-T(pH 8.3)室溫封閉1 h后加入兔抗人SOX2一抗，4℃平搖過(guò)夜，TBS-T洗膜6次后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗兔二抗，室溫孵育1 h，TBS-T洗膜6次，顯色1～2 min，曝光X膠片。BIO-RAD ChemiDocXRS凝膠成像系統(tǒng)(BIO-RAD公司)照相并分析。

1.2.3 SOX2表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系分析 分析SOX2 mRNA表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤臨床病理特征的關(guān)系。對(duì)患者進(jìn)行5年以上隨訪(fǎng)，每3個(gè)月隨訪(fǎng)1次，以患者達(dá)到5年隨訪(fǎng)期或發(fā)生轉(zhuǎn)移或死亡為終點(diǎn)，計(jì)算各組5年無(wú)病生存率(DFS)，設(shè)計(jì)受試者工作特征曲線(xiàn)(ROC曲線(xiàn))，分析SOX2 mRNA表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件。基于ROC曲線(xiàn)，選擇使敏感性和特異性同時(shí)達(dá)到最大的值作為SOX2 mRNA表達(dá)水平的閾值，分別將腦膠質(zhì)瘤組織中SOX2 mRNA分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。計(jì)量數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組比較采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。Kaplan-Merier生存曲線(xiàn)分析SOX2 mRNA表達(dá)水平與患者5年DFS的關(guān)系，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SOX2 mRNA及SOX2蛋白表達(dá) 腦膠質(zhì)瘤組及對(duì)照組SOX2 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為4.47±0.08、2.16 ±0.04(P ＜0.02)，SOX 蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為4.02 ±0.32、3.19 ±0.82(P ＜0.05)。

2.2 SOX2表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤臨床病理特征的關(guān)系腦膠質(zhì)瘤組病理分級(jí)為Ⅲ、Ⅳ級(jí)者SOX2 mRNA的表達(dá)高于Ⅱ期者，腫瘤直徑＞2 cm者SOX2 mRNA表達(dá)高于直徑≤2 cm者(P均＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 SOX2 mRNA表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤臨床病理特征的關(guān)系［例(%)］

2.3 SOX2 mRNA表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的關(guān)系Kaplan-Merier生存分析結(jié)果示SOX2 mRNA表達(dá)量與腦膠質(zhì)瘤患者5年DFS相關(guān)，SOX2 mRNA高表達(dá)者5年DFS低于低表達(dá)者(P＜0.05)。見(jiàn)圖1。

3 討論

圖1 SOX2 mRNA高表達(dá)與低表達(dá)者5年DFS比較

腦膠質(zhì)瘤是一類(lèi)具有高度異質(zhì)性的腫瘤，組織形態(tài)學(xué)相同、臨床分期相近的腫瘤，常具有不同的生物學(xué)行為及治療敏感性。SOX2是維持干細(xì)胞自我更新的關(guān)鍵基因，參與廣泛的發(fā)育調(diào)節(jié)［5］。SOX2與其他基因(如Oct-4、Nanog)共同調(diào)節(jié)胚胎干細(xì)胞的多潛能性，是多種胚胎干細(xì)胞管家基因的共同靶基因，與許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)［6，7］。研究發(fā)現(xiàn)，SOX2在中樞神經(jīng)系統(tǒng)未成熟畸胎瘤組織中呈高表達(dá)［8］;SOX2在基底樣表型的乳腺癌組織中高表達(dá)，是腫瘤干細(xì)胞的一種驅(qū)動(dòng)蛋白，可促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)和復(fù)發(fā)［9］。Tsukamoto 等［10］發(fā)現(xiàn)在胃癌等腫瘤中SOX2也呈高表達(dá)。Park等［11］報(bào)道SOX2在黏液腺癌及印戒細(xì)胞癌中呈高表達(dá)，而在非黏液腺癌和管狀腺癌中很少表達(dá)。Done等［12］研究發(fā)現(xiàn)，小細(xì)胞肺癌患者血清中SOX2表達(dá)水平增高。在前列腺瘤細(xì)胞中SOX2的表達(dá)水平也高于正常細(xì)胞［13］。推測(cè)SOXS2是維持干細(xì)胞自我更新的關(guān)鍵因子之一，SOX2可能通過(guò)調(diào)節(jié)Wnt這一信號(hào)通路從而增強(qiáng)腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的功能，在腫瘤發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要作用，但具體作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究證實(shí)。

本研究結(jié)果顯示，SOX2 mRNA及其蛋白在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)顯著高于瘤旁組織，且與患者的年齡、性別無(wú)關(guān)，而與腫瘤直徑和病理分級(jí)有關(guān)，這與相關(guān)研究［13］結(jié)果一致，提示SOX2可能參與了腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生，是潛在的促癌基因。本研究結(jié)果還顯示SOX2 mRNA表達(dá)量與腦膠質(zhì)瘤患者5年DFS有關(guān)，且SOX2 mRNA高表達(dá)者5年DFS低于SOX2 mRNA低表達(dá)者，故認(rèn)為腦膠質(zhì)瘤組織中的SOX2 mRNA表達(dá)水平與患者預(yù)后有關(guān)，SOX2 mRNA可作為預(yù)后判斷的候選腫瘤分子標(biāo)記。

綜上所述，SOX2在腦膠質(zhì)瘤組織中高表達(dá)，SOX2 mRNA表達(dá)與腫瘤直徑及病理分級(jí)有關(guān)，SOX2高表達(dá)者5年DFS較低。推測(cè)SOX2在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展中可能有潛在的促進(jìn)作用。

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