袁紅英，關(guān)景麗，楊雪萍，孫 昕，劉 衛(wèi)，呂泰省

固相萃取（solid phase extraction，SPF）是一種試樣預(yù)處理技術(shù)，由液固萃取和柱液相色譜技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來，具有高效性、高選擇性、高自動化程度和低耗性等優(yōu)點(diǎn)。目前SPE技術(shù)有SPE柱、SPE盤和固相微量萃取等形式，其中使用最普遍是SPE柱。SPE柱是一種填充好固定相的短色譜柱，利用組分與吸附劑間選擇性吸附與選擇性洗脫的過程，達(dá)到提取分離、凈化和富集的目的［1］。

復(fù)方甘草口服液由甘草流浸膏、復(fù)方樟腦酊、甘油、愈創(chuàng)甘油醚、濃氨溶液和水按一定比例配制而成，屬祛痰鎮(zhèn)咳藥。由于療效確切，在臨床廣泛應(yīng)用，深受患者的歡迎?！吨腥A人民共和國藥典》2010年版二部［2］規(guī)定對其中的嗎啡、愈創(chuàng)甘油醚、甘草酸進(jìn)行含量測定。由于成分復(fù)雜、干擾多，在嗎啡含量測定中利用十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑的SPE柱進(jìn)行除雜。在除雜的吸附與解吸過程中SPE柱的填料粒度、孔隙率等對樣品的洗脫率有很大影響。不同廠家、不同規(guī)格的SPE柱對嗎啡的洗脫率有較大不同。本實(shí)驗(yàn)對2個(gè)不同廠家的SPE柱在相同條件下對復(fù)方甘草口服液中嗎啡的洗脫率進(jìn)行比較分析，并對常壓、抽負(fù)壓兩種方法處理固相萃取柱的結(jié)果比較。

1 儀器、試劑與樣品

安捷倫1200高效液相色譜儀 （四元泵，自動進(jìn)樣），VWD檢測器，C18固相萃取柱 （Agilent Technologies 500mg/6ml SPE09400204、大連思譜精工有限公司 500 mg/6 ml SPE100119），超聲清洗器（TCQ－250），嗎啡對照品（中國藥品生物制品檢定所分裝產(chǎn)品，供含量測定用），乙腈為色譜純，甲醇、庚烷磺酸鈉、磷酸二氫鉀、氨水、醋酸均為分析純，復(fù)方甘草口服液（筆者所在醫(yī)院制劑室自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及檢測方法 辛烷基鍵和硅膠色譜柱（GL Sciences 4.6×150 mm，5 μm）； 流動 相：0.0025 mol/L 乙腈，0.05 mol/L 庚烷磺酸鈉溶液，5∶18∶18 磷酸二氫鉀溶液； 流速為 1.0 ml/min；檢測波長 220 nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 稱取嗎啡對照品適量，精密稱定，加 5%醋酸溶液，制成 0.1 mg/ml的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 固相色譜柱的處理 取固相萃取柱，依次用甲醇－水（3∶1）15 ml與水5 ml沖洗，再用pH值約為9的氨水溶液（取水適量，滴加氨試液至pH值為9）沖洗至流出液pH為9，待用。

2.2.3 供試品溶液的制備

2.2.3.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)樣品溶液制備 精密量取上述對照品溶液0.5 ml，置處理后的固相萃取柱上，滴加氨試液適量使柱內(nèi)溶液的pH值為9（上樣前另取同體積的續(xù)濾液預(yù)先調(diào)試，以確定滴加氨試液的量），待溶劑滴盡后用水20 ml沖洗，再用5%醋酸溶液洗脫。用5 ml量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。

2.2.3.2 樣品溶液制備 取復(fù)方甘草口服液適量，超聲處理10 min，取出，搖勻，精密量取 0.5 ml，置固相萃取柱上，同法洗脫，用5 ml量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，作為樣品溶液。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別取Agilent Technologies固相萃取柱、大連思譜精工固相萃取柱各2支，按上述方法制備系統(tǒng)適用性試驗(yàn)樣品溶液。精密量取上述溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積積分值，并根據(jù)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果公式 f（s）＝（AX/CX）/（AR/CR）（AX為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)嗎啡峰面積；CX為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液濃度；AR為對照品溶液嗎啡峰面積；CR為對照品溶液濃度；），計(jì)算f（s）值并進(jìn)行比較。結(jié)果見表1。

表1 固相萃取柱系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果

2.4 固相萃取柱處理方法考察 固相萃取柱使用前需活化、堿化。常壓下固相萃取柱滴速較慢，耗時(shí)較長，給使用帶來較大不便。在試驗(yàn)過程中采用抽負(fù)壓和常壓兩種方式處理固相萃取柱，對嗎啡對照品進(jìn)行吸附洗脫，并注入高效液相色譜儀記錄色譜圖及峰面積積分值。比較兩種處理方式嗎啡含量的影響，并計(jì)算洗脫率。見表2。

2.5 三批樣品溶液含量測定 分別吸取對照品溶液、供試品溶液各20 μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見表 3、圖 1。

3 討 論

3.1 固相萃取柱對嗎啡含量測定的影響 不同廠家的C18固相萃取柱對嗎啡吸附洗脫能力有較大不同，Agilent Technologies固相萃取柱對嗎啡含量影響較大，f（s）僅為69%左右，不宜在復(fù)方甘草口服液嗎啡含量測定中使用。大連思譜精工固相對嗎啡含量影響較小，f（s）近100%，可以在復(fù)方甘草口服液嗎啡含量測定中使用。鑒于以上結(jié)果，在測定前進(jìn)行系統(tǒng)使用性試驗(yàn)時(shí)非常必要的。

表2 兩種方法處理固相萃取柱結(jié)果

表3 三批樣品含量測定結(jié)果

圖1 高效液相色譜圖

3.2 常壓、抽負(fù)壓處理C18固相萃取柱對嗎啡含量測定的影響 常壓、抽負(fù)壓處理C18固相萃取柱對嗎啡含量測定結(jié)果影響不大，嗎啡的吸附洗脫率均接近100%。常壓處理固相色譜柱約需20 h，抽負(fù)壓處理僅需要1 h，極大地縮短了處理時(shí)間，提高了工作效率。不同廠家的固相萃取柱對嗎啡含量影響較大。常壓、抽負(fù)壓兩種方式處理固相萃取柱對嗎啡含量測定無影響。

［1］王 蕾，郭麗冰.固相萃取形式應(yīng)用概況［J］.河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，22（4）：86－88.

［2］中華人民共和國藥典委員會.中國藥典（二部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.574－575.