尹芳蕊 龐春艷 白 力 王 馨 王永福

(包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古包頭014010)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是全身結(jié)締組織的自身免疫性疾病，遺傳、體內(nèi)激素水平的變化、環(huán)境等因素導(dǎo)致異常的免疫應(yīng)答［1］，產(chǎn)生多種致病性自身抗體而引起組織和臟器損傷。兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病率低，兒童占所有SLE患者的15% ～20%［2］，臨床表現(xiàn)多種多樣，有些患兒發(fā)病過(guò)程兇險(xiǎn)，累及臟器的發(fā)生率更高，易誤診、漏診，延誤治療。

隨著免疫學(xué)的迅猛發(fā)展和先進(jìn)實(shí)驗(yàn)手段的應(yīng)用，風(fēng)濕病學(xué)的實(shí)驗(yàn)室檢查更加精準(zhǔn)。標(biāo)志性抗體的檢測(cè)，為臨床醫(yī)生早期診斷疾病提供了有力證據(jù)。SLE患者血清中具有多種自身抗體，抗dsDNA抗體是SLE的標(biāo)志性自身抗體之一。Clq是補(bǔ)體經(jīng)典途徑第一補(bǔ)體成分C1的一個(gè)亞基，是補(bǔ)體經(jīng)典途徑激活的始動(dòng)因素，抗C1q抗體是針對(duì)C1q分子膠原樣區(qū)的IgG型自身抗體，其與抗原結(jié)合，刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生更多抗體，SLE活動(dòng)時(shí)抗C1q抗體產(chǎn)生增多，最終由于形成免疫復(fù)合物，進(jìn)而對(duì)人體重要臟器造成免疫性損傷。本研究探討抗C1q抗體與兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的相關(guān)性及臨床意義，為兒童SLE的早期診斷提供經(jīng)驗(yàn)，觀察其對(duì)兒童SLE的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1)SLE組(40例):均為包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科2009年6月至2013年12月住院患兒，男6例，女34例，男女比例為1∶5.6;發(fā)病年齡3～18歲，平均年齡(14.77±2.80)歲。所有患者均符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(American College of Rheumatology，ACR)修訂的SLE診斷分類標(biāo)準(zhǔn)。2)健康對(duì)照組(20例):均來(lái)自同期醫(yī)院體檢的健康兒童，男10名，女10名，平均年齡(13.47±3.43)歲，兩組性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 試劑與檢測(cè)方法

抗dsDNA采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)定量測(cè)定(上?？菩律锛夹g(shù)股份有限公司)。測(cè)定步驟如下:用樣本稀釋緩沖液按1∶101的比例稀釋。向已包被dsDNA的微孔板中加入稀釋血清、質(zhì)控血清、標(biāo)準(zhǔn)品，每孔加入100 μL，室溫孵育30 min;沖洗3次后加入100 μL酶標(biāo)記抗人IgG抗體，室溫孵育30 min，再?zèng)_洗4次后加入100 μL底物顯色劑，室溫、避光孵育15 min;每孔加入50 μL終止液，在20 min內(nèi)完成吸光度測(cè)定;測(cè)定主波長(zhǎng)為450 nm，參考波長(zhǎng)630 nm，并做標(biāo)準(zhǔn)曲線，求待測(cè)血清中抗dsDNA抗體濃度，參考試劑說(shuō)明書(shū):≥100 IU/mL為陽(yáng)性。

抗C1q抗體檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法來(lái)進(jìn)行檢測(cè)(Orgentec diagnostika GMBH公司，德國(guó))，將樣品稀釋液進(jìn)行1∶100的配比，稀釋血清，在C1q酶標(biāo)板上加進(jìn)稀釋血清、質(zhì)控血清、標(biāo)準(zhǔn)品，每孔加入100 μL，在溫室中孵育30 min，洗滌3次;加入酶標(biāo)二抗，溫室孵育15 min，洗滌3次，加入底物在溫室黑暗處孵育15 min，加入終止液，測(cè)定波長(zhǎng)為450 nm，參考試劑說(shuō)明書(shū):≥10 U/mL為抗C1q抗體陽(yáng)性。

補(bǔ)體采用比濁法，抗核抗體(antinuclear antibody，ANA)、可提取性核抗原(extractable nuclear antigen，ENA)，包括 nRNP、Sm、Jo-1、抗 SSA 抗體、抗 SSB 抗體、scl-70檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自德國(guó)歐蒙公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。定性資料用例數(shù)和百分?jǐn)?shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，定量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。采用敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值等診斷指標(biāo)評(píng)價(jià)使用自身抗體診斷SLE的價(jià)值。采用Pearson線性相關(guān)系數(shù)描述自身抗體、SLE疾病活動(dòng)指數(shù)、免疫學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SLE兒童血清抗C1q抗體檢測(cè)的結(jié)果及其與抗dsDNA抗體和抗SM抗體敏感度、特異度的對(duì)比

40例SLE兒童抗C1q抗體陽(yáng)性率為37.5%，而正常兒童組抗C1q抗體均為陰性，兩組陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.1，P＜0.01)，抗C1q抗體對(duì)SLE兒童的診斷敏感度為37.5%，特異度為100%;抗dsDNA抗體對(duì)SLE兒童診斷的敏感度是62.5%，特異

度是95%;抗SM抗體對(duì)SLE兒童診斷的敏感度為22.5%，特異度是90%，詳見(jiàn)表1～4。

2.2 抗C1q抗體與實(shí)驗(yàn)室免疫學(xué)指標(biāo)的關(guān)系

抗C1q抗體陽(yáng)性組的抗SM抗體、抗RNP抗體、抗SSA抗體、抗SSB抗體、補(bǔ)體C3、C4與抗C1q抗體陰性組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);而抗ds-DNA抗體兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.98，P=0.02)，詳見(jiàn)表5。

表1 抗C1q抗體在兒童SLE中的評(píng)價(jià)指標(biāo)Tab.1 Diagnostic value of of C1q autoantibodies in children with SLE

表2 抗dsDNA抗體在兒童SLE中的敏感度和特異度Tab.2 Sensitivity and specificity of of dsDNA autoantibodies in children with SLE

表3 抗SM抗體在兒童SL中的的敏感度和特異度Tab.3 Sensitivity and specificity of of SM autoantibodies in children with SLE

表4 抗C1q抗體與抗dsDNA抗體和抗SM抗體在兒童SLE診斷中的評(píng)價(jià)指標(biāo)比較Tab.4 Diagnostic value of anti-C1q antibodies in children with SLE compared with other autoantibodies

表5 抗C1q抗體與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系Tab.5 Associations of anti-C1q antibody with laboratory data in patients with SLE n(%)

2.3 抗C1q抗體與抗dsDNA抗體的相關(guān)性

40例SLE兒童的抗dsDNA抗體與抗C1q抗體采用Pearson進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果表明抗dsDNA抗體與抗C1q抗體呈正相關(guān)(r=0.51，P＜0.01)，詳見(jiàn)圖1。

圖1 抗C1q抗體與抗dsDNA抗體的相關(guān)性Fig.1 Correlations of anti-C1q antibody with Anti-dsDNA antibody

3 討論

兒童SLE中女性患兒發(fā)病率占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，但男性患兒比例明顯高于成年人，提示青春發(fā)育期體內(nèi)雌激素濃度較高，可能與內(nèi)分泌因素的作用相關(guān)。本研究選取病例中男性6例，女性34例，男女比例為1∶5.6，與國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道［3-4］相符。目前抗核抗體(antinuclear antibody，ANA)、抗雙鏈 DNA 抗體(antidouble strand DNA antibody)和抗SM抗體(antiSM antibody)是兒童SLE診斷的血清學(xué)指標(biāo)，但臨床上?？梢砸?jiàn)到抗dsDNA抗體和抗SM抗體陰性的SLE患兒。

C1q屬于補(bǔ)體C1第一組分的第一個(gè)反應(yīng)亞基，C1q在補(bǔ)體激活途徑中發(fā)揮作用。1984年，Uwatoko等［5］在SLE患者的血清中發(fā)現(xiàn)抗C1q抗體，抗 C1q抗體發(fā)生抗原抗體反應(yīng)的表位在 C1q分子的膠原區(qū)(college-like region，CLR)，CLR與抗 C1q抗體相結(jié)合，清除了免疫復(fù)合物障礙，使凋亡細(xì)胞的清除延緩，對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)進(jìn)行刺激使其產(chǎn)生更多的抗體，是導(dǎo)致疾病活動(dòng)的一項(xiàng)重要因素。目前國(guó)內(nèi)外研究［5-11］表明，抗C1q抗體與成人的狼瘡腎炎和其疾病活動(dòng)度相關(guān)。兒童SLE的發(fā)病率較成年人低，有關(guān)的臨床研究也相對(duì)較少。

本研究探討抗C1q抗體檢測(cè)在兒童SLE中的診斷價(jià)值。本研究發(fā)現(xiàn)SLE患兒的抗C1q抗體表達(dá)明顯高于健康對(duì)照組患兒，兩組陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.1，P＜0.01)，抗C1q抗體對(duì)SLE患兒的診斷敏感度和特異度分別為37.5%、100%;抗C1q抗體特異度的結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道［12-14］相似。與抗dsDNA抗體和抗SM抗體相比，抗C1q抗體陽(yáng)性率不理想，但特異度接近100%，因此聯(lián)合檢測(cè)抗C1q抗體有助于提高抗dsDNA抗體和抗SM抗體陰性的兒童SLE的診斷。

在實(shí)驗(yàn)室檢查方面，發(fā)現(xiàn)抗C1q抗體陽(yáng)性組與抗C1q抗體陰性組在補(bǔ)體 C3、C4、Anti-SSB、Anti-SSA、Anti-SM、Anti-nRNP等方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是與抗dsDNA抗體和疾病活動(dòng)程度相關(guān)，提示抗C1q抗體可作為評(píng)價(jià)病情活動(dòng)性指標(biāo)之一，也提示SLE活動(dòng)時(shí)抗C1q抗體產(chǎn)生增多，最終由于形成免疫復(fù)合物，進(jìn)而人體重要臟器造成免疫性損傷，長(zhǎng)期以來(lái)抗dsDNA抗體被認(rèn)為是SLE最重要的抗體，但dsDNA并非是引起SLE的唯一免疫原。故診斷SLE時(shí)，抗C1q抗體的濃度水平是否也應(yīng)作為參考指標(biāo)，且其與病情活動(dòng)的相關(guān)性值得關(guān)注［15-16］。C1q抗體水平與dsDNA抗體水平呈現(xiàn)正相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)抗C1q抗體和抗dsDNA抗體有助于醫(yī)生掌握SLE病情發(fā)展。兩組數(shù)據(jù)相互驗(yàn)證，可以有效降低漏診率，對(duì)于SLE早期診斷、病情觀察和臨床治療具有重要的指導(dǎo)作用。

［1］ Feng J B，Ni J D，Yao X，et al.Gender and age influence on clinical and laboratory features in Chinese patients with systemic lupus erythematosus:1790 cases［J］.Rheumatol Int，2010，30(8):1017-1023.

［2］ Kamphuis S，Silverman E D.Prevalence and burden of pediatric-onset systemic lupus erythematosus［J］.Nat Rev Rheumatol，2010，6(9):538-546.

［3］ 于清，薛海燕，曹蘭芳.104例兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床分析［J］.臨床兒科雜志，2011，29(10):942-947.

［4］ 郭雨凡，孫凌云，鄒耀紅，等.1958例系統(tǒng)性紅斑狼瘡住院患者首發(fā)表現(xiàn)和起病特點(diǎn)的回顧分析［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2011，15(2):105-107.

［5］ Uwatoko S，Mannik M.Low molecular weight C1q-binding immunoglobulin G in patients with systemic lupus erythematosus consists of autoantibodies to the collagen-like region of Clq［J］.J Clin Invest，1988，82(3):816-824.

［6］ Trendelenburg M，Lopez-Trascasa M，Potlukova E，et al.High prevalence of anti-C1q antibodies in biopsy-proven active lupus nephritis［J］.Nephrol Dial Transplant，2006，21(11):3115-3121.

［7］ Sinico R A，Radice A，Ikehata M，et al.Anti-C1q auto antibodies in lupus nephritis:prevalence and clinical significance［J］.Ann N Y Acad Sci，2005，1050:193-200.

［8］ Katsumata Y，Miyake K，Kawaguchi Y，et al.Anti-C1q antibodies are associated with systemic lupus erythematosus global activity but not specifically with nephritis:a controlled study of 126 consecutive patients［J］.Arthritis Rheum，2011，63(8):2436-2444.

［9］ Akhter E，Burlingame R W，Seaman A L，et al.Anti-C1q antibodies have higher correlation with fl ares of lupus nephritis than other serum markers［J］.Lupus，2011，20(12):1267-1274.

［10］ Oelzner P，Deliyska B，F(xiàn)ünfstück R，et al.Anti-C1q antibodies and antiendothelial cell antibodies in systemic lupus erythematosus relationship with disease activity and renal involvement［J］.Clin Rheumatol，2003，22(4-5):271-278.

［11］ Marto N，Bertolaccini M L，Calabuig E，et al.Anti-C1q antibodies in nephritis:correlation between titres and renal disease activity and positive predictive value in systemic lupus erythematosus［J］.Ann Rheum Dis，2005，64(3):444-448.

［12］Jesus A A，Silva C A，Carneiro-Sampaio M，et al.Anti-C1q antibodies in juvenile-onset systemic lupus erythematosus［J］.Ann N Y Acad Sci，2009，1173:235-238.

［13］Wu F Q，Zhao Q，Cui X D，et al.C1q and anti-C1q antibody levels are correlated with disease severity in Chinese pediatric systemic lupus erythematosus［J］.Rheumatol Int，2011，31(4):501-505.

［14］ Jesus A A，Campos L M，Liphaus B L，et al.Anti-C1q，anti-chromatin/nucleosome，and anti-dsDNA antibodies in juvenile systemic lupus erythematosus patients［J］.Rev Bras Rheumatic，2012，52(6):971-981.

［15］程玉萍，李麗.檢測(cè)抗核抗體譜在系統(tǒng)性紅斑狼瘡診治中的意義［J］.解放軍醫(yī)藥雜志，2013，(1):63-66.

［16］文振華，左曉霞，周亞歐.兒童與成人系統(tǒng)性紅斑狼瘡的臨床和免疫學(xué)特征比較［J］.臨床誤診誤治，2012，25(10):64-66.