郭呈林，方朝暉，江 婷，楊 慧

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué) 中醫(yī)內(nèi)科學(xué)教研室，安徽 合肥 230038;2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 內(nèi)分泌科，安徽 合肥230031)

糖尿病腎病是糖尿病常見并發(fā)癥之一，其作為糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥，已成為終末期腎病最常見的病因。糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，大量的臨床及實(shí)驗(yàn)研究表明代謝紊亂慢性高血糖是導(dǎo)致糖尿病腎病的主要原因，蛋白尿也是導(dǎo)致腎臟病變進(jìn)行性發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素，開始可以是間歇性蛋白尿，后逐漸加重變?yōu)槌掷m(xù)性蛋白尿，由于長(zhǎng)期的蛋白尿及糖尿病本身蛋白質(zhì)代謝失調(diào)，最終可死于尿毒癥。因此嚴(yán)格的控制血糖、降低蛋白尿量可使DN發(fā)生率明顯降低。

中醫(yī)認(rèn)為糖尿病腎病是在消渴病氣虛陰津虧損，燥熱偏盛的基本病機(jī)基礎(chǔ)上，病久血行不暢、血脈瘀滯。氣虛陰虧為本，瘀血為病理產(chǎn)物，又復(fù)為致病因素，中醫(yī)通過(guò)中藥復(fù)方，辯證論治，采用益氣養(yǎng)陰活血方治療糖尿病腎病。本文旨在探討益氣養(yǎng)陰活血方丹蛭降糖膠囊對(duì)糖尿病腎病大鼠的治療作用，探討其藥物作用機(jī)制，為其應(yīng)用于臨床治療糖尿病腎病提供可靠的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與試劑 選擇健康雄性成年SD大鼠80只，體質(zhì)量(350±40)g，安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，皖實(shí)動(dòng)準(zhǔn)字第03號(hào);飼養(yǎng)環(huán)境:安徽中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，按分籠飼養(yǎng)，室內(nèi)通風(fēng)及光線良好，溫度濕度適宜;益氣養(yǎng)陰活血制劑方選丹蛭降糖膠囊(太子參、丹皮、生地黃、澤瀉、菟絲子、水蛭組成)由安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥物制劑中心提供，皖藥制字 Z20080016，批號(hào):20110104。

1.2 分組與造模 將80只大鼠隨機(jī)分為A、B、C、D、E 5組，每組16只，高脂飼料喂養(yǎng)，不限攝水。A組假手術(shù)對(duì)照組，B～E組行單側(cè)腎臟結(jié)扎手術(shù)后STZ腹腔注射，手術(shù)實(shí)驗(yàn)大鼠禁食12 h，注射戊巴比妥鈉溶液進(jìn)行麻醉［1］。確認(rèn)麻醉后A組大鼠切開皮膚及肌層后再行縫合，B～E組沿腎蒂同時(shí)結(jié)扎腎臟動(dòng)靜脈及輸尿管。術(shù)后2周，各組大鼠禁食18h后A組大鼠一次性注射同等劑量的檸檬酸緩沖液，B～E組一次性腹腔注射1%鏈脲佐菌素溶液55 mg/kg，具體給藥量為每100 g體質(zhì)量0.55 ml，注射后大鼠自由攝食攝水。造模完成72h后，經(jīng)尾靜脈采血測(cè)血糖。造模成功標(biāo)準(zhǔn):①空腹血糖≥16.65 mmol/L;②尿糖強(qiáng)陽(yáng)性;③尿量大于對(duì)照組的50%，即DN模型成立［2］。造模結(jié)束后，A組大鼠剩余14只，B組大鼠剩余13只，C組大鼠剩余13只，D組大鼠剩余12只，E組大鼠剩余13只，脫落原因主要為造模技術(shù)不熟練、造模不成功等。喂養(yǎng)1周后檢測(cè)各組大鼠空腹血糖、糖化血紅蛋白，留取各組大鼠尿量，測(cè)量24 h尿蛋白量。

1.3 治療方法 假手術(shù)組A組、模型對(duì)照組B組分別予以2ml蒸餾水灌胃，C、D、E組分別為中藥低劑量1.5 g生藥/kg、中劑量組3 g生藥/kg、高劑量組6 g生藥/kg，于給藥6周末采用葡萄糖氧化酶法檢測(cè)大鼠空腹血糖、免疫凝膠擴(kuò)散法測(cè)糖化血紅蛋白，代謝籠收集大鼠24 h尿液，計(jì)算24 h尿量及24 h尿蛋白定量。治療結(jié)束后，A組大鼠剩余13只，B組大鼠剩余10只，C組大鼠剩余11只，D組大鼠剩余11只，E組大鼠剩余12只，脫落及死亡原因主要為高血糖引起的代謝紊亂導(dǎo)致臟器衰竭等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理統(tǒng)計(jì)方法所得數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件多組間方差分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多組間采用F檢驗(yàn)，兩兩比較采用q檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 益氣養(yǎng)陰活血中藥制劑對(duì)糖尿病腎病大鼠一般情況的影響 給藥6周后與模型對(duì)照組比較，中藥低、中、高劑量組大鼠精神狀態(tài)好于模型對(duì)照組，較少豎毛，活動(dòng)較好，有白內(nèi)障出現(xiàn)(中藥低劑量組3只、中藥中劑量組1只、中藥高劑量組2只)，低于模型組4只;同時(shí)與模型組比較，中藥中、高劑量組均能明顯增加體質(zhì)量，有差異性(P＜0.05)。

表1 各組糖尿病腎病大鼠體質(zhì)量變化的比較(g)

2.2 益氣養(yǎng)陰活血中藥制劑對(duì)糖尿病腎病大鼠血糖的影響 模型對(duì)照組大鼠血糖和假手術(shù)組大鼠血糖比較明顯升高，有差異性(P＜0.05);中藥低、中、高劑量組大鼠血糖與模型對(duì)照組大鼠血糖比較明顯降低，有差異性(P＜0.05);中藥中、高劑量組降低血糖作用更明顯，有顯著性差異(P＜0.01)。

表2 各組糖尿病腎病大鼠血糖變化的比較

2.3 益氣養(yǎng)陰活血中藥制劑對(duì)糖尿病腎病大鼠糖化血紅蛋白的影響 給藥6周后模型對(duì)照組大鼠HbA1c和假手術(shù)組大鼠HbA1c比較明顯升高，有差異性(P＜0.01);中藥中劑量組大鼠HbA1c與模型對(duì)照組大鼠HbA1c比較明顯降低，有差異性(P＜0.05);中藥高劑量組降低大鼠HbA1c作用更明顯，有顯著性差異(P ＜0.01)。

表3 各組糖尿病腎病大鼠糖化血紅蛋白的比較

2.4 益氣養(yǎng)陰活血中藥制劑對(duì)糖尿病腎病大鼠尿量變化的影響 給藥6周后模型對(duì)照組大鼠尿量和假手術(shù)組大鼠尿量比較明顯升高，有差異性(P＜0.01);中藥低、中、高劑量組大鼠尿量與模型對(duì)照組大鼠尿量比較明顯降低，差異有顯著性(P＜0.01)。

表4 各組糖尿病腎病大鼠糖尿量變化的比較

2.5 益氣養(yǎng)陰活血中藥制劑對(duì)糖尿病腎病大鼠24 h尿蛋白量的影響 給藥6周后模型對(duì)照組大鼠24 h尿蛋白量和假手術(shù)組大鼠24 h尿蛋白量比較明顯升高，有差異性(P＜0.05);中藥中劑量組大鼠24 h尿蛋白量與模型對(duì)照組大鼠24 h尿蛋白量比較明顯降低，有差異性(P＜0.05);中藥高劑量組降低大鼠24 h尿蛋白量降低有顯著差異(P＜0.01)。

表5 各組糖尿病腎病大鼠尿蛋白變化的比較(mg/24 h)

3 討論

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，益氣養(yǎng)陰活血方丹蛭降糖膠囊能改善糖尿病腎病大鼠一般狀況、降低其血糖、糖化血紅蛋白、控制尿量、減少尿蛋白的排泄，改善大鼠的腎功能。益氣養(yǎng)陰活血方丹蛭降糖膠囊在治療糖尿病腎病方面有明顯的作用，其機(jī)理可能是以下幾方面:①高血糖可引起腎臟病理生理改變，包括糖化產(chǎn)物增加，腎小球?yàn)V過(guò)率增高，氧化應(yīng)激增強(qiáng)等都是導(dǎo)致腎小球損害的主要因素，益氣養(yǎng)陰活血方丹蛭降糖膠囊通過(guò)降低血糖和HbA1c，達(dá)到治療和延緩糖尿病腎病的關(guān)鍵因素。②蛋白尿的產(chǎn)生與腎小球?yàn)V過(guò)屏障正常的結(jié)構(gòu)遭到破壞有著十分密切的關(guān)系，蛋白尿不僅是早期診斷糖尿病腎病的一個(gè)重要指標(biāo)，而且也是導(dǎo)致腎臟病變進(jìn)行性發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素［3］。益氣養(yǎng)陰活血方丹蛭降糖膠囊通過(guò)改善糖尿病腎病大鼠多尿、蛋白尿的癥狀，對(duì)腎小球和腎小管的功能起到修復(fù)和改善作用。

從中醫(yī)中藥治療糖尿病腎病分析，糖尿病腎病是在消渴病基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)，屬于中醫(yī)消渴病腎病范疇，其主要病因有先天稟賦不足、飲食失宜、情志不遂、勞欲過(guò)度等。早期病機(jī)普遍存在腎氣不足，病程遷延氣陰兩虧，氣虛則不能推動(dòng)血液運(yùn)行，陰虛則耗傷津液，煉液為痰，漸至血脈瘀阻，形成“微型癓瘕”，引起腎元受損，濁毒內(nèi)停［4］，發(fā)展為消渴血管病變糖尿病腎臟疾病。方中太子參補(bǔ)益脾腎之氣;生地黃滋養(yǎng)脾腎之陰;菟絲子補(bǔ)腎固精;丹皮、水蛭活血化瘀、行氣通絡(luò);澤瀉清熱祛痰濁。全方陰陽(yáng)互補(bǔ)，通補(bǔ)兼施，共奏益氣養(yǎng)陰、活血化瘀之功。

以往大量研究發(fā)現(xiàn)牡丹皮中含有的丹皮多糖既能降低糖尿病模型大鼠的血糖，又可通過(guò)影響血流動(dòng)力學(xué)的改變而參與微血管病變的發(fā)生，對(duì)糖尿病大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用［5］;水蛭中含有水蛭素等多種活性多肽，具有抗血栓，降血脂，降低尿蛋白，減輕腎臟病變的作用［6］;澤瀉能利尿，降壓，擴(kuò)張血管，對(duì)消除蛋白尿有一定的效果［7］;生地黃中所含的生地黃低聚糖可明顯降低四氧嘧啶糖尿病大鼠高血糖水平，減輕大鼠的蛋白尿、提高大鼠血清白蛋白水平、改善腎功能［8］;菟絲子的有效部位菟絲子多糖對(duì)糖尿病大鼠具有明顯的降糖和降低糖化血清蛋白含量的作用，改善體質(zhì)量減低等癥狀［9］;太子參多糖在一定程度上保護(hù)模型大鼠胰島β細(xì)胞從而降低血糖［10］。各種藥物組方起到降低血糖，治療糖尿病腎病的作用。

［1］李世芬，王心如，王玉翠，等.SD大鼠糖尿病性腎臟疾病模型構(gòu)建的比較［J］.南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，30(8):1123－1125.

［2］李敬林，喬文軍，鄭曙琴，等.兩種糖尿病性腎臟疾病大鼠模型的比較［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2003，11(11):877 －878.

［3］王蕾，苗淑杰，李旭，等.腎炎康復(fù)片對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病性腎臟疾病大鼠藥效作用研究［J］.中成藥，2012，11(34):2073 －2075.

［4］戴京璋，呂仁和，趙進(jìn)喜，等.糖尿病腎病中醫(yī)證治［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，25(25):65 －66.

［5］閔存云，劉和強(qiáng)，詹鋒，等.牡丹皮對(duì)糖尿病大鼠PGI2、TXA2、ET、NO 的影響［J］.中藥材，2007，30(6):687 －689.

［6］李琳，鄧曉明，王淑玲，等.水蛭對(duì)糖尿病性腎臟疾病大鼠尿白蛋白影響的機(jī)制研究［J］.四川中醫(yī)，2012，30(9):48 －50.

［7］楊新波，黃正明，曹文斌，等.澤瀉提取物對(duì)鏈脲佐菌素高血糖小鼠的治療和保護(hù)作用［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2002，12(6):336－338.

［8］李莉.生地黃治療糖尿病的藥理研究［J］.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，8(4):670 －672.

［9］徐先祥，李道中，彭代銀，等.菟絲子多糖改善糖尿病大鼠糖脂代謝作用［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，9(18):232 －234.

［10］倪受東，夏倫祝，徐先祥，等.太子參多糖對(duì)四氧嘧啶糖尿病小鼠的治療作用［J］.安徽醫(yī)藥，2012，14(5):521 －522.