石曉麗，毛澤偉，左愛學(xué)，饒高雄

（云南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，云南昆明 650500）

巖白菜為虎耳草科巖白菜屬多年生草本植物，主要分布云南、四川、西藏等地，具有抗菌、消炎、化痰止咳等功效，中醫(yī)臨床廣泛用于治療腹瀉、痢疾、食欲不振、肺結(jié)核咳嗽、氣管炎咳嗽、風(fēng)濕疼痛等[1-2]。文獻報道[3]，巖白菜主要含香豆素、黃酮等成分。從巖白菜中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些具有顯著生物活性的物質(zhì)，如巖白菜素（Bergenin）具有鎮(zhèn)咳化痰作用[4]，熊果苷（Arbutin）具有抗菌消炎作用[5]等。為了進一步探索巖白菜的化學(xué)成分，比較不同產(chǎn)地巖白菜藥材化學(xué)成分的異同，我們對產(chǎn)自云南大理巖白菜的化學(xué)成分進行了研究。

1 實驗儀器與材料

YANACO顯微熔點儀測定；Bio-Rad FTS-135紅外光譜儀，KBr壓片；島津UV-2450紫外光譜儀；Bruker AM-400核磁共振波譜儀，TMS為內(nèi)標。柱色譜硅膠及薄層色譜硅膠板均為青島海洋化工廠生產(chǎn)，葡聚糖凝膠LH-20為Pharmacia公司生產(chǎn)；乙醇、丙酮、環(huán)己烷等試劑用工業(yè)或化學(xué)純?nèi)軇?；薄層色譜顯色劑用10%硫酸乙醇溶液或5%磷鉬酸乙醇溶液。

巖白菜藥材于2010年采自云南大理，植物標本經(jīng)中國科學(xué)院昆明植物研究所標本館鑒定為虎耳草科巖白菜屬巖白菜（Bergenia pururascens（Hook.f.et Thoms.）Engl.）。

2 提取與分離

巖白菜塊根1.5kg，粉碎過60目篩網(wǎng)，以95%乙醇回流提取3次，每次加5L溶劑，回流2h，合并提取液，減壓回收乙醇得浸膏500g。乙醇浸膏加1L水分散，依次用環(huán)己烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別得到環(huán)己烷部分（Fr-A，10g）、乙酸乙酯部分（Fr-B，143g）和正丁醇部分（Fr-C，123g）。

Fr-A部分以20g硅膠拌樣后用200g硅膠柱層析，用環(huán)己烷-乙酸乙酯溶劑系統(tǒng)梯度洗脫（10：0~10：10），主要斑點流份再經(jīng)多次硅膠柱色譜分離純化，得到化合物 2（500mg）。

Fr-B部分有結(jié)晶析出，重結(jié)晶后，得到化合物1（29g）；殘留濾液 114g用硅膠柱色譜，用氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫（50：1~10：1），洗脫液經(jīng)薄層色譜檢查后合并成8個流份，再經(jīng)多次硅膠柱色譜分離，氯仿-丙酮（80：10~60：40）洗脫，并輔以十八烷基鍵合相RP-18[以甲醇-水溶劑系統(tǒng)梯度洗脫]分離，最后用LH-20純化，甲醇洗脫得到化合物3（3.78g）、4（43mg）、7（69mg）、8（369mg）、9（2.08g）。

Fr-C部分用MCI樹脂柱色譜分段，用水-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，水洗脫去糖和水溶性色素，含醇溶劑部分經(jīng)薄層色譜檢查后合并成2個流份，各流份再經(jīng)多次硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇（80：10~70：30）洗脫，并輔以十八烷基鍵合相RP-18多次分離，以甲醇-水溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，最后用LH-20純化，甲醇洗脫得到化合物 1 （5.1g）、3（2.69g）、5（534mg）、6（632mg）。

3 研究結(jié)果

從大理產(chǎn)巖白菜藥材中分離得到9個單體化合物，通過理化性質(zhì)和光譜測試，分別鑒定巖白菜素（Bergenin，1）、齊墩果酸（Oleanic acid，2）、熊果苷（Arbutin，3）、阿夫兒茶精（Afzelechin，4）、11-O-沒食子酰巖白菜素（11-O-galloyl bergenin，5）、沒食子酸（Gallic acid，6）、Breynioside A（7）、Diethyl disulfoxide（8）、（+）-兒茶素（（+）-Catechin，9）。

結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1：白色粉末；mp.133.0~133.4℃；IR（KBr）cm-1：3392 cm-1，3246 cm-1，1703 cm-1，1610 cm-1，1462 cm-1，1338 cm-1，1087 cm-1；1H-NMR（500 MHz，DMSO）δ：3.17（1H，m，H-2），3.19（1H，m，H-3），3.63 （1H，m，H-3），4.00（1H，t，J=9.9 Hz，H-4a），7.08（1H，s，H-7），4.94（1H，d，J=10.5 Hz，H-10b），3.80（1H，d，J=11.4 Hz，H-11），3.54（1H，t，J=10.0 Hz，H-11），5.43 （1H，d，J=4.3 Hz，3-OH），5.64（1H，d，J=4.5 Hz，4-OH），3.63 （3H，s，9-OCH3），9.78（1H，s，8-OH），8.43（1H，s，10-OH），4.96（1H，d，J=10.5 Hz，11-OH）；13C-NMR（125 MHz，DMSO）δ：82.5（d，C-1），71.5（d，C-2），74.5（d，C-3），80.5（d，C-4），164.2（s，C-5），118.9（s，C-6），110.2（d，C-6a），151.7（s，C-7），141.3（s，C-8），148.8（s，C-9），116.8（s，C-10），72.9（d，C-10a），61.8（t，C-10b），60.6（q，C-9-OCH3）。其 1H-NMR 和 13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻[6]報道的基本一致，鑒定為巖白菜素（Bergenin）。

化合物2：白色針狀（丙酮）；紫色斑點（10%硫酸乙醇），mp.285~288℃；與齊墩果酸標準品對照，在TLC中Rf值和顯色行為一致，且混合熔點不下降，確定為齊墩果酸（Oleanic acid）。

化合物 3：白色粉末；mp.161.5~162 ℃；IR（KBr）cm-1：3329 cm-1，1647 cm-1，1512 cm-1，1450 cm-1，827 cm-1，1217 cm-1；1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ：6.96（1H，d，J=10.0 HZ，H-2），6.69（1H，d，J=10.0 HZ，H-3），6.69（1H，d，J=10.0 HZ，H-5），6.96（1H，d，J=10.0 HZ，H-6），4.73 （1H，d，J=7.2 HZ，H-1′），3.38（1H，m，H-2′），3.42（1H，m，H-3′），3.38（1H，m，H-4′），3.42（1H，m，H-5′），3.44（1H，dd，J=11.9，3.9 HZ，H-6′），3.8（1H，d，J=11.9 HZ，H-6′）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：153.8（s，C-1），119.3（d，C-2），116.6（d，C-3），152.4（s，C-4），116.6（d，C-5），119.3（d，C-6），103.6（d，C-1′），74.9（d，C-2′），78（d，C-3′），71.4（d，C-4′），77.9（d，C-5′），62.3（t，C-6′）。其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)[7]與文獻報道基本一致，鑒定為熊果苷（Arbutin）。

化合物 4：白色粉末；mp.190.0~190.5℃；IR（KBr）cm-1：3379 cm-1，1618 cm-1，1512 cm-1，1460 cm-1，1138 cm-1，1032 cm-1，1082 cm-1；1H-NMR（500 MHz，CD3OD）：δH 4.60 （1H，d，J=7.85 Hz，H-2），4.00（1H，m，H-3），2.90（1H，dd，J=16.1，5.5 Hz，H-4），2.52（1H，dd，J=16.1，8.5 HZ，H-4），5.84（1H，d，J=2.3 Hz，H-6），5.93 （1H，d，J=2.3 Hz，H-8），7.22（1H，d，J=10.5 Hz，H-2），6.80（1H，d，J=10.5 Hz，H-3′），6.80（1H，d，J=10.5 Hz，H-5′），7.22（1H，d，J=10.5 Hz，H-6′）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：82.9（d，C-2），68.8（d，C-3），28.9（t，C-4），157（s，C-5），96.3（d，C-6），157.6（s，C-7），96.4（d，C-8），157.9（s，C-9），100.9（s，C-10），131.5（s，C-1′），129.6（d，C-2′），116（d，C-3′），158.4（s，C-4′），116（d，C-5′），129.6（d，C-6′）。其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻[8]報道基本一致，鑒定為阿夫兒茶精（Afzelechin）。

化合物 5：白色粉末；mp.217.0~218.0℃；IR（KBr）cm-1：3412 cm-1，1699 cm-1，1616 cm-1，1458 cm-1；1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：3.94（1H，m，H-2），3.54（1H，t，J=8.9 Hz，H-3），3.84（1H，t，J=8.9 Hz，H-4），4.12（1H，t，J=10.2 Hz，H-4a），7.08（1H，s，H-7），5.03（1H，d，J=10.4 Hz，H-10b），4.82（1H，d，J=12.3，2.0 Hz，H-11），4.40 （1H，m，H-11），3.88（3H，s，H-9-OCH3），7.10（1H，s，H-2′），7.10（1H，s，H-6′）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：80.7（d，C-2），71.8（d，C-3），75.4（d，C-4），81.3（d，C-4a），165.7（s，C-6），119.4（s，C-6a），110.2（d，C-7），152.4（s，C-8），142.2（s，C-9），149.3（s，C-10），117（s，C-10a），74.4（d，C-10b），64.6（t，C-11），61（q，C-9-OCH3），121（s，C-1′），110.2（d，C-2′），146.5（s，C-3′），140（s，C-4′），146.5（s，C-5′），110.2（d，C-6′），168.1（s，C-7′）。其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻[9]報道的基本一致，鑒定為11-O-沒食子酰巖白菜（11-O-dalloyl Bergenin）。

化合物 6：白色粉末；mp.236.2~237.0℃；IR（KBr）cm-1：3462 cm-1，1654 cm-1，1263 cm-1，1612 cm-1，1444 cm-1；1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ：7.05（1H，s，H-2），7.05（1H，s，H-6）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：121.9（s，C-1），110.3（d，C-2），146.4（s，C-3），139.6（s，C-4），146.4（s，C-5），110.3（d，C-6），170.4（s，1-COOH）。其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻[10]報道基本一致，鑒定為沒食子酸（Gallic acid）。

化合物 7：白色粉末；mp.228.8~229.6℃；IR（KBr）cm-1：3406 cm-1，1699 cm-1，1606 cm-1，1510 cm-1，1070 cm-1；1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ：6.94（1H，d，J=10.0 Hz，H-2）、6.61（1H，d，J=10.0 Hz，H-3），6.61（1H，d，J=10.0 Hz，H-5），6.94（1H，d，J=10.0 Hz，H-6），4.72 （1H，d，J=7.4 Hz，H-1′），3.48-3.41（3H，m，H-2′），3.48-3.41（3H，m，H-3′），3.48-3.41（3H，m，H-4′），3.75（1H，ddd，J=10.0 Hz，7.5，2.0 Hz，H-5′），4.36（1H，dd，J=11.8，2.1 Hz，H-6′），4.67（1H，dd，J=11.8，2.1 Hz，H-6′），7.89（1H，d，J=10.5 Hz，H-2′′），6.94（1H，d，J=10.0 Hz，H-3′′），6.94（1H，d，J=10.0 Hz，H-5′′），7.89（1H，d，J=10.5 Hz，H-6′′）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ：152.2（s，C-1），119.5（d，C-2），116.5（d，C-3），153.9（d，C-4），116.5（d，C-5），119.5（d，C-6），103.6（d，C-1′），74.9（d，C-2′），77.9（d，C-3′），72（d，C-4′），75.5（d，C-5′），65（t，C-6′），122.1（s，C-1′′），132.9（d，C-2′′），116.2（d，C-3′′），163.6（s，C-4′′），116.2（d，C-5′′），132.9（d，C-6′′），167.9（s，C-7′′）。其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻[11]報道基本一致，鑒定為Breynioside A。

化合物8：無色針狀結(jié)晶；mp.136.2~136.8℃；IR（KBr）cm-1：2935 cm-1，2748 cm-1，2677 cm-1，2490 cm-1，1473 cm-1，1035 cm-1；1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ：1.32 （3H，t，J=7.0 Hz，H-1），3.22（3H，dd，J=7.3，14.5 Hz，H-2），3.22（3H，dd，J=7.3，14.5 Hz，H-5），1.32（3H，t，J=7.0 Hz，H-6）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：9.2（q，C-1），47.8（t，C-2），47.8（t，C-3），9.2（q，C-4）。其1H-NMR 和13C-NMR 數(shù)據(jù)與文獻[12]報道基本一致，鑒定為Diethyl disulfoxide。

化合物 9：白色粉末；mp.150.6~151.0℃；IR（KBr）cm-1：3390 cm-1，1618 cm-1，1519cm-1，1460 cm-1，1145 cm-1，1107 cm-1，1030 cm-1；1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：4.56 （1H，d，J=7.5 Hz，H-2），3.96（1H，m，H-3），2.85 （1H，dd，J=16.1，5.5 Hz，H-4），2.51（1H，dd，J=16.1，8.2 Hz，H-4），5.85（1H，d，J=2.3 Hz，H-6），5.92（1H，d，J=2.3 Hz，H-8），6.83（1H，d，J=2.5 Hz，H-2′），6.75（1H，d，J=10.0 Hz，H-5′），6.70（1H，dd，J=10.0，2.0 Hz，H-6′）；C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：82.8（d，C-2），68.8（d，C-3），28.5（t，C-4），100.8（s，C-4a），157.6（s，C-5），96.2（d，C-6），156.9（s，C-7），95.5（d，C-8），157.8（s，C-9），132.2（s，C-1′），116.1（d，C-2′），146.2（s，C-3′），146.2（s，C-4′），115.2（d，C-5′），120（d，C-6′）。其1H-NMR 和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻[13]報道基本一致，鑒定為（+）-兒茶素（（+）-Catechin）。

4 結(jié)果與討論

從云南大理產(chǎn)巖白菜藥材中分離得到9個成分，分別鑒定為巖白菜素（1）、齊墩果酸（2）、熊果苷（3）、阿夫兒茶精（4）、11-O-沒食子酰巖白菜素（5）、沒食子酸（6）、Breynioside A（7）、Diethyl disulfoxide（8）、（+）-兒茶素（9）。其中，化合物 4、7、8是首次從該種植物中分離得到，化合物8為首次從該屬植物中分離得到。研究結(jié)果豐富了我們對于巖白菜藥材物質(zhì)基礎(chǔ)認識，也為從內(nèi)在物質(zhì)基礎(chǔ)的角度評價巖白菜藥材質(zhì)量控制指標提供了分析比較的線索和依據(jù)。

值得注意的是化合物8是含硫化合物，此類成分在自然界分布極少，以前只在木棉科的著名熱帶水果榴蓮（Durio zibethinus Murr.）中分離得到過[14]。此外，一系列和巖白菜素結(jié)構(gòu)類似的化合物的發(fā)現(xiàn)，為進一步篩選和尋找抗支氣管炎的天然活性成分具有一定的意義。

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