溫裕云，陳志華，陳 婷，歐 延

（1.廈門大學(xué)海洋與地球?qū)W院，福建 廈門361102；2.福建遠(yuǎn)東技術(shù)服務(wù)有限公司，福建 泉州362006）

含氯苯酚如五氯苯酚（pentachlorophenol，PCP）、四氯苯酚（tetrachlorophenol，TeCP）、三氯苯酚（trichlorophenol，TriCP）、二 氯 苯 酚 （dichlorophenol，DCP）以及鄰苯基苯酚（o－phenyl phenol，OPP）常用做紡織與皮革的防腐、防霉、防蛀劑，但由于其對(duì)人體具有較強(qiáng)毒性，國內(nèi)外法律法規(guī)已對(duì)其禁用或限用［1－2］；壬基苯酚（nonylphenol，NP）、辛基苯酚（4－tert－octylphenol，OP）、雙酚 A（bisphenol A，BPA）等烷基酚類化合物具有良好的表面活性，常用做紡織和皮革工業(yè)的清洗劑、乳化劑、處理劑等，因其化學(xué)結(jié)構(gòu)與雌性激素相似，屬典型的內(nèi)分泌干擾物，對(duì)人類健康、環(huán)境安全產(chǎn)生的潛在風(fēng)險(xiǎn)廣受關(guān)注［3－5］，歐盟法規(guī)明確對(duì)其限用［1－2］；四溴雙酚 A（tetrabromobisphenol A，TBBPA）則是紡織品、塑料、橡膠、纖維和紙張工業(yè)中大量使用的溴代阻燃劑，因其用量巨大而引起的環(huán)境問題已經(jīng)受到關(guān)注［6－7］，挪威于2007年提出的《消費(fèi)性產(chǎn)品中禁用特定有害物質(zhì)》法案（即PoHS法案）［8］明確禁用TBBPA，歐盟未來的RoHS 2.0指令也可能將其列入禁用范圍.因此，準(zhǔn)確、快速檢測(cè)紡織品中上述9種酚類化合物對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量安全、環(huán)境健康具有重要的現(xiàn)實(shí)意義及應(yīng)用需求.

盡管上述9種酚類化合物的測(cè)定已有國家／國際標(biāo)準(zhǔn) 和 相 關(guān) 的 研 究 報(bào) 道［9－19］，如 氣 相 色 譜 法 （GCECD）測(cè)定紡織品或皮革中的 PCP［9－10］、氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法（GC－MS）測(cè)定紡織品中的多種含氯苯酚［11－13］、高效液相色譜法（HPLC－DAD）測(cè)定紡織品或皮革中的含氯苯酚［14－15］以及液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法（HPLC－MS）測(cè)定紡織品中的含氯苯酚和烷基酚［16－19］.但上述方法基本都是針對(duì)一種或幾種物質(zhì)的測(cè)定，要得到符合法規(guī)要求的多個(gè)酚類組分的含量［1－2］，須采用多個(gè)不同的檢測(cè)方法，并且這些方法的測(cè)定流程比較繁瑣，花費(fèi)時(shí)間長，測(cè)定成本高.

為滿足嚴(yán)格的法規(guī)要求及紡織產(chǎn)品質(zhì)量控制的實(shí)際需要，本工作利用超高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜（UHPLC－MS／MS）定性能力強(qiáng)、檢測(cè)靈敏度高、定量準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，建立了同時(shí)測(cè)定紡織品中2，4－DCP、2，4，6－TriCP、2，3，4，6－TeCP、PCP、OPP、NP、OP、BPA、TBBPA 9種酚類化合物的方法.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器及試劑

Agilent 1290液相色譜儀；Agilent 6460三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀，系統(tǒng)配置：Agilent JetStream Technologies（AJS）電噴霧離子源（ESI）接口，MassHunter工作站軟件；超聲波振蕩器（KQ－400KDE型高功率數(shù)控超聲波，昆山市超聲儀器有限公司）.

甲醇（LC－MS級(jí)，德國 Merck公司）；氨水（LCMS級(jí)，美國Sigma公司）；Mili－Q超純水；一次性過濾膜（聚四氟乙烯，0.22μm）.

標(biāo)準(zhǔn)品：NP購自Aldrich公司（工業(yè)級(jí)），為含不同支鏈壬基部分的異構(gòu)體混合物；OP購自Dr.Ehrenstorfer GmbH公司，為含不同支鏈辛基部分的異構(gòu)體混合物；其他酚類化合物均購自Dr.Ehrenstorfer GmbH公司，純度均大于99.5%，各待測(cè)組分的信息如表1所示.

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱取10mg表1中的標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度為1.0mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液.

使用時(shí)將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用流動(dòng)相（V（甲醇）∶V（水）＝30∶70）稀釋至所需濃度.

1.3 樣品前處理

取樣品3～5g，將其剪碎至約5mm×5mm，混勻.準(zhǔn)確稱取樣品0.500g于具塞樣品瓶中，加入5 mL甲醇并于60℃、功率280W下，超聲萃取60min.冷卻至室溫，取約1mL萃取液過0.22μm聚四氟乙烯濾膜，待測(cè)定.

1.4 UHPLC－MS／MS分析條件

色譜分離使用 Zorbax Eclipse XDB－C18Extended RRHD （2.1mm×100mm，1.8μm）色譜柱，柱溫40℃，流動(dòng)相A為含0.075%（體積分?jǐn)?shù)，下同）氨水的水溶液（pH＝10.5）、B為甲醇，流速0.4mL／min，梯度洗脫程序?yàn)椋?～2.5min，30%～40%B；2.5～4.5min，40%～95%B.進(jìn)樣量1.0μL.

MS檢測(cè)條件：電噴霧負(fù)離子模式（ESI－）；干燥氣溫度：350℃；干燥氣流速：8.0L／min；霧化器壓力：241kPa；鞘氣溫度：380℃；鞘氣流速：8.0L／min；毛細(xì)管電壓：2 000V；噴嘴電壓：500V.定性和定量采用多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式，具體參數(shù)見表1，采用外標(biāo)法定量.

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜分離及MS測(cè)定條件優(yōu)化

酚類物質(zhì)為弱酸性物質(zhì)，易在ESI－模式下形成［M－H］－母離子，通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在流動(dòng)相A（水相）中加入少量氨水可以促進(jìn)酚類物質(zhì)的電離，使待測(cè)組分的MS信號(hào)強(qiáng)度得到顯著提高，因此采用能耐受更寬pH 值 范 圍 的 Zorbax Eclipse XDB－C18Extended RRHD（2.1mm×100mm，1.8μm，2.0 ＜pH＜11.5）色譜柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并且考察了流動(dòng)相A中加入不同濃度氨水（氨水的體積分?jǐn)?shù)為0，0.01%，0.05%，0.075%，0.10%，0.15%）對(duì)靈敏度的影響.結(jié)果表明，所有組分的MS信號(hào)響應(yīng)隨著氨水濃度增大而提高，并在大于0.10%時(shí)趨于平穩(wěn)，待測(cè)組分2，4－DCP、TBBPA的保留時(shí)間隨著氨水濃度增大而增加，其他組分的保留時(shí)間基本不受氨水濃度的影響.因此綜合考慮MS信號(hào)響應(yīng)、分離度、色譜柱在高pH下的壽命，最終采用的流動(dòng)相A為含0.075%氨水的水溶液（pH＝10.5）.優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下，各組分的分離情況如圖1，對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間見表1.

表1 目標(biāo)組分的MRM分析參數(shù)Tab.1 MRM parameters for target compounds

為了獲得最佳的定性定量MRM參數(shù)，分別對(duì)2 mg／L的單組分標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，并采用儀器自帶的優(yōu)化軟件Optimizer對(duì)碎裂電壓（fragmentor）、碰撞能量（collision energy）、定性與定量 MRM離子對(duì)進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳MRM采集參數(shù)，見表1.此外，實(shí)驗(yàn)還優(yōu)化了干燥氣溫度、干燥氣流速、霧化氣壓力、鞘氣溫度、鞘氣流速、毛細(xì)管電壓、噴嘴電壓等離子源參數(shù)，以使大多數(shù)組分得到最佳的靈敏度，最終采用的離子源參數(shù)見1.4中的MS檢測(cè)條件.

2.2 樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

紡織品中酚類測(cè)定的提取方法主要有水蒸汽蒸餾法［9］、超聲萃取法［10－13］、加速溶劑萃取法［14－16］.萃取溶 劑 主 要 有 碳 酸 鉀 水 溶 液［9，11］、甲 醇［10，12－13，17－18］、丙酮［19］等.據(jù)文獻(xiàn)［10，12－13，17－18］報(bào)道，甲醇為萃取溶劑進(jìn)行超聲提取時(shí)萃取效果較好，可得到較高的回收率.因此，本文采用甲醇為萃取溶劑，對(duì)待測(cè)的9種酚類化合物進(jìn)行超聲萃取，并使用自制的陽性樣品，對(duì)超聲萃取時(shí)間、萃取功率、萃取溫度等條件進(jìn)行優(yōu)化.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，溫度60℃、功率280W、時(shí)間為60 min時(shí)，各待測(cè)組分的萃取效率較高，各組分的加標(biāo)回收率在82%～120%之間.

2.3 基質(zhì)效應(yīng)

盡管UHPLC－MS／MS測(cè)定待測(cè)酚類化合物時(shí)，母離子和子離子一一對(duì)應(yīng)的MRM模式可以很大程度上去除基體雜質(zhì)的干擾，但復(fù)雜樣品共提取基質(zhì)成分和試樣前處理引入的雜質(zhì)可能抑制或增強(qiáng)待測(cè)物在ESI源的離子化效率，進(jìn)而影響方法的靈敏度，以及分析結(jié)果的準(zhǔn)確度.

實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)各待測(cè)組分的基質(zhì)效應(yīng)差異較大，即使采用某幾種穩(wěn)定同位素標(biāo)記的組分作為內(nèi)標(biāo)，也無法有效地消除或降低其他組分的基質(zhì)效應(yīng)，并且實(shí)際分析工作中對(duì)每個(gè)組分采用穩(wěn)定同位素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)進(jìn)行定量，分析成本較高，所以本實(shí)驗(yàn)采用萃取不同樣品基質(zhì)（棉布、滌綸布）后的萃取液，來配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，考察其基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果表明在加標(biāo)質(zhì)量濃度較低（2，4，6－TriCP 、2，4－DCP、TBBPA 質(zhì) 量 濃 度 為1.0 mg／L，其他組分為0.05～0.2mg／L）時(shí)，回收率較低，大多數(shù)組分的回收率小于50%，基質(zhì)對(duì)目標(biāo)化合物的影響較顯著；當(dāng)加標(biāo)質(zhì)量濃度較高時(shí)（2，4，6－TriCP、2，4－DCP、TBBPA質(zhì)量濃度為5.0mg／L，其他組分為0.25～2.0mg／L），它們的回收率在80%～120%之間，表明在此質(zhì)量濃度范圍內(nèi)基質(zhì)對(duì)目標(biāo)化合物的影響并不顯著，因此要實(shí)現(xiàn)樣品中低質(zhì)量濃度目標(biāo)組分的準(zhǔn)確測(cè)定，最好采用基質(zhì)匹配（即采用萃取液配制標(biāo)準(zhǔn)溶液）的工作曲線進(jìn)行定量.

2.4 方法的精密度及加標(biāo)回收率

稱取7份樣品前處理優(yōu)化時(shí)自制的陽性樣品，分別進(jìn)行7次平行實(shí)驗(yàn)，計(jì)算方法的精密度，結(jié)果見表2～3，各組分的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在5.1%～9.7%之間.

圖1 9種酚類化合物的MRM色譜圖Fig.1 MRM chromatogram of 9phenols

表2 高濃度組加標(biāo)回收率及精密度Tab.2 The recoveries of standard addition and precision of high concentration group

表3 低濃度組加標(biāo)回收率及精密度Tab.3 The recoveries of standard addition and precision of low concentration group

由于不同組分靈敏度差異較大，因此根據(jù)不同濃度水平分成兩組進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn).以空白紡織樣品為基質(zhì)，在10，20，50mg／kg（2，4，6－TriCP、2，4－DCP、TBBPA）和 1.0，2.0，5.0mg／kg（2，3，4，6－TeCP、PCP、BPA、OPP、OP、NP）的添加水平下進(jìn)行樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，所得結(jié)果見表2～3，可以看出不同濃度的加標(biāo)回收率在82%～120%之間.

表4 方法的LOQ和線性關(guān)系Tab.4 The LOQ and linearity of method

2.5 方法的定量限（LOQ）與線性范圍

方法的LOQ采用標(biāo)準(zhǔn)添加法進(jìn)行測(cè)定，即在空白樣品中添加不同濃度的待測(cè)目標(biāo)組分，前處理后按濃度由高至低檢測(cè)，直到獲得信噪比等于10（S／N＝10）的濃度，確定其為方法的LOQ，結(jié)果見表4.

用含30%（體積分?jǐn)?shù)）甲醇的水溶液配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中2，4－DCP、2，4，6－TriCP、TBBPA 質(zhì)量濃度均為 0.5，1.0，2.0，5.0，10.0mg／L，2，3，4，6－TeCP、PCP、BPA、OPP、OP、NP質(zhì)量濃度均為0.05，0.1，0.2，0.5，1.0mg／L；在優(yōu)化的色譜與 MS條件下進(jìn)行測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中目標(biāo)組分的質(zhì)量濃度（x，mg／L）為橫坐標(biāo)，目標(biāo)組分的定量離子對(duì)峰面積（y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表4，表明9種酚類化合物在各自的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.998 5.

2.6 實(shí)際樣品測(cè)定

用建立的方法對(duì)可能含有待測(cè)酚類化合物的紡織品樣品進(jìn)行測(cè)定，并與本實(shí)驗(yàn)室采用GC－MS測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較，如表5所示.結(jié)果表明，在含有酚類化合物的陽性樣品中，2種方法都能給出準(zhǔn)確的定性、定量結(jié)果，計(jì)算2種方法所得結(jié)果的En值［20］均小于1，表明2種測(cè)定方法的結(jié)果基本一致.圖2為空白天然纖維（棉布）樣品中添加9種酚類化合物的MRM色譜圖，加標(biāo)濃度為2.0mg／kg.

表5 實(shí)際樣品測(cè)定結(jié)果Tab.5 The results of sample analysis mg／kg

圖2 天然纖維（棉布）中添加9種酚類化合物的MRM色譜圖Fig.2 MRM chromatograms of natural sample（cotton）spiked with 9phenols

3 結(jié) 論

建立了UHPLC－MS／MS同時(shí)測(cè)定紡織品中多個(gè)禁用酚類物質(zhì)的方法，具有樣品前處理步驟簡捷、儀器分析速度快、靈敏度好、能較有效去除基體雜質(zhì)干擾等優(yōu)點(diǎn)，滿足歐盟法規(guī)或國內(nèi)外紡織品生態(tài)標(biāo)準(zhǔn)限量的測(cè)定要求，也可以作為GC－MS測(cè)定時(shí)陽性樣品的確證方法.

［1］International Association for Research and Testing in the Field of Textile Ecology（OEKO－TEX?）.OEKO－TEX?Standard 100［S］.Switzerland：［s.n.］，2012.

［2］全國紡織品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)分會(huì).GB／T 18885—2009生態(tài)紡織品技術(shù)要求［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009.

［3］Ying G，Williams B，Kookana R.Environmental fate of alkylphenols and alkylphenol ethoxylates：a review［J］.Environment International，2002，28（3）：215－226.

［4］Gallart－Ayala H，Moyano E，Galceran M T.Recent advances in mass spectrometry analysis of phenolic endocrine disruptors and related compounds［J］.Mass Spectrometry Reviews，2010，29（5）：776－805.

［5］Asimakopoulos A G，Thomaidis N S，Koupparis M A.Recent trends in biomonitoring of bisphenol A，4－t－octylphe－nol，and 4－nonylphenol［J］.Toxicology Letters，2012，210（2）：141－154.

［6］Legler J.New insights into the endocrine disrupting effects of brominated flame retardants［J］.Chemosphere，2008，73（2）：216－222.

［7］Covaci A，Harrad S，Abdallah M，et al.Novel brominated flame retardants：a review of their analysis，environmental fate and behaviour［J］.Environment International，2011，37（2）：532－556.

［8］Norwegian Pollution Control Authority.Draft of new chapter concerning consumer products in the Norwegian product regulations［EB／OL］.［2013－10－20］.http：∥www.klif.no／nyheter／dokumenter／miljogifter＿forbrukerprodukter＿engelsk＿forskrift290507.pdf.

［9］DE－DIN.DIN EN ISO 17070－2007Leather－chemical testsdetermination of pentachlorophenol content （ISO 17070：2006）；English version of DIN EN ISO 17070：2007－01［S］.Germany：European Committee for Standardization，2006.

［10］麥曉霞，蘭麗麗，張曉利，等.氣質(zhì)聯(lián)用測(cè)定紡織品中多種含氯苯酚［J］.印染，2010，36（19）：32－34.

［11］全國紡織品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)分會(huì).GB／T 18414.1—2006紡織品 含氯苯酚的測(cè)定 第1部分：氣相色譜質(zhì)譜法［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

［12］全國紡織品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)分會(huì).GB／T 20386—2006紡織品 鄰苯基苯酚的測(cè)定［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

［13］溫裕云，歐延，洪小燕，等.皮革及紡織品中烷基酚與烷基酚聚氧乙烯醚的液相色譜－質(zhì)譜測(cè)定［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2010，29（2）：189－193.

［14］李琳，薛秀玲，連小彬.加速溶劑萃取－高效液相色譜法測(cè)定皮革和紡織品中含氯苯酚的含量［J］.分析化學(xué)，2010，38（10）：1469－1473.

［15］樊苑牧，賀小雨，俞雪鈞，等.快速溶劑萃取法提取測(cè)定出口紡織品中鄰苯基苯酚［J］.紡織學(xué)報(bào)，2008，29（7）：73－75.

［16］馬強(qiáng)，白樺，王超，等.液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定紡織品和食品包裝材料中的壬基酚、辛基酚和雙酚A［J］.分析化學(xué)，2010，38（2）：197－201.

［17］樊苑牧，賀小雨，俞雪鈞，等.氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用對(duì)紡織品中16種含氯酚及鄰苯基苯酚、β－萘酚殘留量的測(cè)定［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2009，28（7）：794－798.

［18］洪愛華，尹平河，黃曉蘭.高效液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定紡織品中的含氯苯酚［J］.分析試驗(yàn)室，2009，28（11）：88－90.

［19］全國紡織品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)分會(huì).GB／T 18414.2—2006紡織品 五氯苯酚殘留量的測(cè)定 第2部分：氣相色譜法［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

［20］虞惠霞.En值在校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室中的應(yīng)用［J］.現(xiàn)代測(cè)量與實(shí)驗(yàn)室管理，2006，14（5）：42－43.