吳興萍 沙翔垠 宋 莉 羅佩娜 郭露萍

全身多種致病因素綜合作用如心肺復(fù)蘇、麻醉意外等短暫缺血造成視神經(jīng)功能損害正成為人們致殘的原因之一〔1〕。目前對其的早期治療正得到廣泛重視。近年來，銀杏葉提取物在國內(nèi)外臨床主要用于冠心病、腦梗塞、糖尿病〔2，3〕等，并且獲得了很好的效果。隨著它的研究不斷深入，在眼科疾病方面也有其獨特的療效〔4，5〕。 由于光學(xué)相干斷層掃描（Optical coherence tomography，OCT）能對評價治療視網(wǎng)膜疾病的結(jié)果提供客觀、精確、有效的依據(jù)，筆者模擬大鼠短暫缺血后所致眼部視網(wǎng)膜改變，并用OCT檢查，觀察銀杏葉提取物治療后能否有助于提高視網(wǎng)膜血流灌注，減輕視力損害。

1 材料與方法

1.1 實驗動物分組

Wistar雄性大鼠24只（南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供），年齡 20～25 周，體重 200～380 g，實驗前檢查雙眼眼前節(jié)和眼底均正常。隨機分為4組：正常組、短暫缺血組、生理鹽水對照組和銀杏葉提取物治療組，每組各6只。每只鼠任取一只眼進行研究，所有實驗動物的操作和飼養(yǎng)均符合中華人民共和國《實驗動物管理條例》。

1.2 大鼠短暫缺血模型的制備

10%水合氯醛（350 mg/kg成年大鼠）腹腔注射麻醉。頸部正中橫切口，分離兩側(cè)頸總動脈約1 cm，將缺血裝置套上頸總動脈，即將一條硅膠管系于頸總動脈周圍并將其穿過聚乙烯紐扣的兩個小孔，再穿過一個2cm長的塑料圓筒，打結(jié)，避免血管受壓和血流受阻，簡易縫合切口。將大鼠固定于定位儀上，枕部縱切口，暴露第一頸椎板及橫突板上的翼小孔，用雙極電凝針電凝雙側(cè)翼小孔內(nèi)的椎動脈，縫合切口后待動物完全蘇醒，將其移至籠內(nèi)飼養(yǎng)，夜間禁食，此時動物行為正常，沒有明顯的腦損傷。24 h后在大鼠完全清醒的狀態(tài)下，夾閉雙側(cè)頸總動脈10分鐘，即將穿過圓筒的硅膠管拉緊，從而將動脈緊緊壓向紐扣造成短暫缺血。此時肉眼可見球結(jié)膜蒼白，眼底鏡發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜缺血，缺血10分鐘后解除夾閉的缺血裝置，恢復(fù)血流后見球結(jié)膜充血和視網(wǎng)膜血液。

1.3 檢查方法

（1）肉眼、裂隙燈及檢眼鏡鏡觀察眼部情況：排除屈光間質(zhì)和眼底異常。（2）OCT檢查：首先在鼠眼視盤中點下方（6:00位）2 mm處作為視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)檢查的標(biāo)記點。然后，將鼠眼固定于OCT（日本Topcon 3D OCT-1000型）頜架合適位置上，通過監(jiān)視屏觀察，保證OCT探測光源對準處，采用直線橫向掃描方式，對視網(wǎng)膜進行橫向斷層掃描，掃描線長4 mm。重復(fù)檢測3次以上，對其中成像清晰者存盤（不少于3幅圖像）以備分析。分析測量依電腦內(nèi)裝程序，根據(jù)不同光反射強度來分辨視網(wǎng)膜內(nèi)界膜和色素上皮前界（呈現(xiàn)紅色），再用OCT分析儀中設(shè)置的標(biāo)尺對上述兩點間的距離進行測量，將4 mm長掃描圖5等分，測定5個點位的距離，求其平均值。

1.4 給藥方法

銀杏葉提取物治療組：短暫缺血后，即刻按5 ml/kg體重劑量尾靜脈注射1%銀杏葉提取物（舒血寧），連用10 d。生理鹽水對照組：短暫缺血后，即刻尾靜脈注射同樣體積的生理鹽水，連用10 d。短暫缺血組和正常組不做處理。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用spss 11.5軟件包，比較鼠眼正常組、短暫缺血組、生理鹽水對照組和銀杏葉提取物治療組的OCT檢查視網(wǎng)膜厚度平均值的變化。采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

視網(wǎng)膜厚度的比較：短暫缺血組6只實驗大鼠均顯示視網(wǎng)膜厚度增加，神經(jīng)上皮層（除光感受器外）的反射性增強；銀杏葉提取物治療組則視網(wǎng)膜厚度和神經(jīng)上皮層反射性均比短暫缺血時的鼠眼有所減低；而上述類似改變在生理鹽水對照組則不明顯。對鼠眼正常組（圖1）、短暫缺血組（圖2）、生理鹽水對照組（圖3）和銀杏葉提取物治療組（圖4）的視網(wǎng)膜厚度平均值的OCT檢查結(jié)果，進行兩者均值t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義的是：短暫缺血組與正常組（t=4.489，P＜0.01)；銀杏葉提取物治療組與短暫缺血組（t=3.366，P＜0.01)；銀杏葉提取物治療組與生理鹽水對照組（t=6.765，P＜0.01)。而銀杏葉提取物治療組與正常組（t=1.939，P＞0.05）;生理鹽水對照組與短暫缺血組比較（t=0.579，P＞0.05），差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 各組鼠眼視網(wǎng)膜厚度的OCT檢查結(jié)果（±s，μm）

表1 各組鼠眼視網(wǎng)膜厚度的OCT檢查結(jié)果（±s，μm）

?

3 討論

隨著社會日益城鎮(zhèn)化及飲食結(jié)構(gòu)的改變，溺水、異物吸入、手術(shù)麻醉意外、人口老齡化所致短暫全腦缺血、心臟驟停、等多種因素引起短暫缺血，使供應(yīng)眼部血管（眼動脈、睫狀動脈與視網(wǎng)膜中央動脈）的血流減少甚至中斷，導(dǎo)致視功能損害的事件不斷發(fā)生，所以有必要早期、有效、積極的干預(yù)治療以避免視功能受損。

OCT作為一種非接觸性、非侵入性、高分辨率的成像手段，可以產(chǎn)生高精度的視網(wǎng)膜斷面圖像〔6〕，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于眼底疾病的定位和定性等方面，尤其是對視網(wǎng)膜疾病的診治起著十分重要的作用。鼠眼短暫缺血以及干預(yù)治療后使用OCT進行視網(wǎng)膜檢查有很高的敏感性和特異性，可獲得類似于活體組織病理學(xué)觀察的結(jié)果。因此本研究采用大鼠模擬短暫缺血后所致眼部視網(wǎng)膜改變模型，進行OCT檢查以觀察銀杏葉提取物的療效，為相應(yīng)臨床研究提供診療依據(jù)。

我國擁有銀杏葉資源占世界90%，作為銀杏研究最早、首先將其作為藥物的國家，其提取物亦是近年來成為研究的熱點才備受世人關(guān)注。在歐美國家已采用銀杏葉提取物治療心腦血管和老年癡呆疾病取得良好療效〔7〕，銀杏葉提取物是從植物銀杏葉中提取精制而成的，銀杏葉性味甘苦澀平，有益心斂肺，化濕止瀉作用。據(jù)現(xiàn)代藥理研究，銀杏葉對人體和動物體的作用較為廣泛，已有的資料表明其主要藥理作用有兩大類：銀杏黃酮和內(nèi)酯成分，前者發(fā)揮抗氧化，后者起擴張血管的作用〔8，9〕，國外有學(xué)者 用放射性同位素標(biāo)記后，給動物口服銀杏葉，在視網(wǎng)膜上顯示藥物有足夠的濃度及其代謝產(chǎn)物〔10〕，再次說明銀杏葉能通過血眼屏障到達視網(wǎng)膜節(jié)細胞。

從本實驗結(jié)果來看：夾閉大鼠雙側(cè)頸總動脈10分鐘造成的短暫缺血時間已經(jīng)超過了細胞耐受極值，此時肉眼可見球結(jié)膜蒼白，檢眼鏡顯示視網(wǎng)膜缺血。采用OCT檢測短暫缺血組與正常組的鼠眼視網(wǎng)膜厚度，兩者均值比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；短暫缺血組不僅視網(wǎng)膜厚度增加，而且神經(jīng)上皮層的反射性亦增強；這就表明建立的短暫缺血后視網(wǎng)膜改變模型已成功。同樣地OCT檢測鼠眼視網(wǎng)膜厚度：兩者均值比較，銀杏葉提取物治療組與短暫缺血組；銀杏葉提取物治療組與生理鹽水對照組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；銀杏葉提取物治療組療效明顯優(yōu)于生理鹽水對照組。在神經(jīng)上皮層反射性方面，視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)或細胞形態(tài)學(xué)改變可引起其光學(xué)特性的改變，引起反射性增強的原因包括視網(wǎng)膜動脈阻塞、炎癥滲出至各層視網(wǎng)膜、硬性滲出、出血、新生血管膜、視網(wǎng)膜色素沉著以及前膜形成等；反射性減弱可以由視網(wǎng)膜水腫引起。本研究中銀杏葉提取物治療組神經(jīng)上皮層反射性均比短暫缺血時的鼠眼有所減低；而上述類似改變在生理鹽水對照組則不明顯，表明銀杏葉提取物治療組療效優(yōu)于對照組。我們推測銀杏葉提取物在臨床劑量下，調(diào)節(jié)血管活性，改善微循環(huán)等作用，有利于疏通小血管內(nèi)的血液瘀滯，有可能減低鼠眼短暫缺血后視網(wǎng)膜病變，從而保護和恢復(fù)缺血后視功能，避免不可逆的的視功能損害。

[1]衛(wèi)玉榮，徐汝璽，鄭海濤，等.麻醉意外誘發(fā)缺血性視神經(jīng)病變療效分析[J].中國實用眼科雜志，2003，9（1）：7-19.

[2]王景濤，扈清云，王培軍，等.銀杏葉提取物對腦組織保護作用的研究[J].黑龍江醫(yī)藥學(xué)，2003；26（1）：15-16.

[3]李旭光，林金建.銀杏葉黃酮擴血管機理的探討[J].佳木斯醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1998，21（2）：50.

[4]李才銳，孫曙光，姜德詠，等.銀杏葉提取物治療早期糖尿病視網(wǎng)膜病變觀察[J].國際眼科雜志，2006.6（1）：78-81.

[5]馬科，徐亮.銀杏葉提取物與青光眼視神經(jīng)保護[J].國外醫(yī)學(xué)眼科學(xué)分冊，2005，29（3）：181-183.

[6]Fukuchi T， Takahashi K，Shou k，et al.Optical coherence tomography（OCT）findings in normal retina and laser-induced choroidal neovascularization in rats[J].Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol，2001，239（1）：41.

[7]楊光.再論科研開發(fā)銀杏資源的重要意義 [J].北京中醫(yī)藥，2008，27（6）：463-466.

[8]Fital G，Wassilew G.The influence of hypoxia on the myocardium of experimentally diabetic arts with and without protection by Ginkgo biloba extract.III.Ultrastructural investigations mitochondria[J].Exp Toxicol Pathol，2001，52（4）：557-568.

[9]李月華，徐亮，馬科.銀杏葉提取物對大鼠視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細胞的保護作用[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2007，14（6）：33-34.

[10]Moreau JP，Eck J，McCabe J，et al.Absorption distribution et elimination de lextrait marque de Ginkgo biloba chez le rat[J].Presse Med，1996，15（4）：1458-1463.