宋永軍，趙增任，侯 林，李向陽(yáng)

（國(guó)家獸用藥品工程技術(shù)研究中心，河南洛陽(yáng)471003）

刺五加，又名五加參，是五加科植物刺五加Acanthopanax senticosus（Rupr.et Maxim.）Harms干燥的根或莖，具有調(diào)節(jié)機(jī)體紊亂，使之趨于正常的功能。刺五加莖或根的主要化學(xué)成分為多糖、酚苷類化合物、氨基酸（包括16種氨基，其中7種為人體必需的）及多種微量元素等［1］。其中苷類物質(zhì)是其重要的生物活性成分，又以丁香苷含量最高，約占總苷含量的48.39%，藥理作用較明顯，常以紫丁香苷的含量來(lái)確定刺五加類藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［2］。紫丁香苷結(jié)構(gòu)式如下圖1，是一種無(wú)色晶體，溶于熱水和乙醇，微溶于冷水，幾乎不溶于醚類溶劑。市場(chǎng)上的刺五加類產(chǎn)品大都是由刺五加的水浸膏粗制而成，水溶性的雜質(zhì)含量很高，有效成分紫丁香苷含量低且不穩(wěn)定［3］。為了獲得較好的提取紫丁香苷方法，避免有效成分損失，提升藥材利用率，本研究在水［5］、乙醇［6］、甲醇回流法［7］及機(jī)械化學(xué)輔助提取法［4］四種提取方式研究基礎(chǔ)上，創(chuàng)新的利用藥材中各個(gè)成分的理化性質(zhì)不同，采用化學(xué)方法處理分部析出，同時(shí)進(jìn)行技術(shù)組合，對(duì)中藥提取方法進(jìn)行改進(jìn)。后的離心上清液合并，減壓濃縮，定容至50 mL。即得紫丁香苷為主的提取物。提取工藝如圖2所示。

圖1 紫丁香苷結(jié)構(gòu)式

1 儀器與材料

1.1 儀器 DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、HH-WO智能數(shù)顯多功能水浴鍋、SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵，鞏義予華儀器有限責(zé)任公司；日立高速離心機(jī)CR21GIII轉(zhuǎn)速10000 rpm，日本日立公司；WK-100高速藥物粉碎機(jī)，青州精誠(chéng)機(jī)械有限公司；WZJ（BFM）-6J振動(dòng)研磨機(jī)，濟(jì)南倍力粉技術(shù)工程有限公司；標(biāo)準(zhǔn)分樣篩，河南新鄉(xiāng)康達(dá)新機(jī)械有限公司；Waters ACQUITY超高效液相色譜儀。

1.2 材料 刺五加飲片，批號(hào)：20101022批，河南千方藥業(yè)有限公司，按照二○一○年版《中華人民共和國(guó)獸藥典》鑒定合格；紫丁香苷標(biāo)準(zhǔn)品，批號(hào)：111574-200502，含量100%，中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；其余試劑均為分析純。

2 方法

2.1 紫丁香苷的提取

2.1.1 機(jī)械化學(xué)輔助提取 用高速藥物粉碎機(jī)將刺五加飲片粉碎至粗粉，60℃下干燥3 h備用（即粗粉，以下同）。取粗粉200 g與8 g助劑（Na2CO3／Na2B4O7，1 ∶1 ，w／w）混合研磨。 精確稱取研磨后的粉末50.0 g（按生藥計(jì)），加入60倍20%乙醇水溶液，室溫?cái)嚢?.5 h，過(guò)濾，取濾液，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值為4.0，靜置過(guò)夜，一次離心，沉淀為黃酮為主的浸膏；離心上清液濃縮至粘稠狀后加90%乙醇攪拌均勻后，于10℃冷藏4 h，取出立即離心，離心得沉淀為多糖提取物；對(duì)提取過(guò)的藥材加6倍量85%乙醇回流提取三次，趁熱過(guò)濾得濾液，與醇沉

圖2 機(jī)械化學(xué)輔助提取工藝路線圖

2.1.2 單獨(dú)水提 提取藥材量50 g，具體提取方法參考文獻(xiàn)［5］。提取液減壓濃縮，定容至50 mL。

2.1.3 乙醇提取 提取藥材量50 g，具體提取方法參考文獻(xiàn)［6］。提取液減壓濃縮，定容至50 mL。

2.1.4 甲醇提取 提取藥材量50 g，具體提取方法參考文獻(xiàn)［7］。提取液減壓濃縮，定容至50 mL。

2.2 樣品測(cè)定

2.2.1 干浸膏得率的測(cè)定 準(zhǔn)確吸取各提取液25 mL，分別置于干燥的蒸發(fā)皿中，于105℃干燥3 h，移置干燥器中，冷卻30 min，迅速準(zhǔn)確稱定質(zhì)量，計(jì)算干浸膏得率。

2.2.2 紫丁香苷含量測(cè)定 紫丁香苷含量測(cè)定方法照高效液相色苷法測(cè)定［8］：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇 ∶水（20∶80）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為265 nm。理論板數(shù)按紫丁香苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

對(duì)照品溶液的制備：精密稱取紫丁香苷對(duì)照品適量，加甲醇制成80 μg／mL的溶液，即得。

供試品溶液的制備：精密吸取本品5 mL至25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液10 μL，注入色譜儀中，測(cè)定即得。

3 結(jié)果與分析

不同提取方法得到的提取物中紫丁香苷的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同提取方法提取物中紫丁香苷的含量

結(jié)果可知，采用機(jī)械化學(xué)輔助方法提取所得紫丁香苷的含量均高于常規(guī)提取方法，達(dá)到65.1 μg／mL；干膏收率四種方法中最高， 達(dá)到10.76%。同時(shí)在最后提取紫丁香苷時(shí)提取溶劑采用85%乙醇提取，并且在趁熱條件下離心，一方面增大了所提有效部位的溶解性，同時(shí)避免了有效成分的損失。本方法由于藥材利用率高，降低產(chǎn)業(yè)化成本，適于工業(yè)化大生產(chǎn)，為最佳提取方法。

研究確定的提取工藝為：刺五加粗粉與助劑混合研磨后，加入60倍20%乙醇水溶液，室溫?cái)嚢?、過(guò)濾、取濾液，濾液調(diào)pH值4.0，使得黃酮析出分離；對(duì)離心得上清液濃縮后加90%乙醇，冷藏，離心得沉淀為多糖提取物；對(duì)提取過(guò)的藥材加6倍量85%乙醇回流提取三次，趁熱過(guò)濾得濾液，所得濾液與醇沉后的離心上清液合并，減壓濃縮，即得紫丁香苷為主的提取物。

4 討論與小結(jié)

對(duì)刺五加中有效成分進(jìn)行分析，其中黃酮類物質(zhì)主要為檞皮素及其相關(guān)的黃酮苷類化合物，該類黃酮分子中含有酚經(jīng)基，呈酸性，可被堿中和，成鹽，使水溶性增加，在常規(guī)操作中常采用堿水加熱提取。同時(shí)多糖也可溶于水中。另外，由于此類黃酮分子中的鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)易被堿破壞，與堿作用時(shí)需加硼酸鹽保護(hù)［9］。

水提方法雖然環(huán)保，但由于紫丁香苷在熱水中溶解效果好，而微溶于冷水，這樣可能會(huì)在提取過(guò)程中損失大部分有效成分，同時(shí)，水溶性的雜質(zhì)含量很高，從而導(dǎo)致有效成分紫丁香苷含量低且不穩(wěn)定。甲醇提取溶劑本身毒性比較大，并且在后續(xù)中不斷要使用乙醚、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑提取，不但會(huì)使提取物中夾帶有機(jī)雜質(zhì)，在綠色環(huán)保方面也不如本研究的改良方法。

根據(jù)上述性質(zhì)，參考文獻(xiàn)［4］方法，選用碳酸鈉／硼酸（Na2CO3／Na2B4O7，1 ∶1，w／w）為助劑（占總物料干重的4%）與粉碎后的刺五加共同研磨，藥材與提取液（20%乙醇）以1∶60比例進(jìn)行提取，提取時(shí)間選擇30 min。

采用機(jī)械化學(xué)方法提取刺五加藥材，從整體上對(duì)藥材進(jìn)行分析，不拘于某一成分考慮，利用藥材中有效成分的理化性質(zhì)不同對(duì)有效部位進(jìn)行分類分次提取，不但提高了中藥材的利用率，并且在提取其他有效成分的同時(shí)也實(shí)現(xiàn)了紫丁香苷的有效分離，減少其他成分的干擾，為從刺五加中獲得純度較高并且穩(wěn)定的紫丁香苷提供了新方法。

［1］孟凡欣，蔣朝軍，于笑坤，等.刺五加多糖的提取及含量測(cè)定［J］.食品工業(yè)技術(shù)與科學(xué)，2005，7：110-112.

［2］庫(kù)爾班江，張 炎.刺五加丁香苷提取工藝的研究［J］.伊犁師范學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2009，1（1）：34-37.

［3］王洪濤.紫丁香苷藥物組合物及其制備方法和用途［P］.CN 102038694 A.

［4］劉 瑩，金禮吉，徐永平，等.機(jī)械化學(xué)法輔助提取刺五加總黃酮的工藝研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥， 2009， 18（12）：2889-2891.

［5］姜 濱.刺五加莖紫丁香昔提取工藝研究［J］.中華臨床醫(yī)學(xué)研究雜志，2006，12（12）：1644-1645.

［6］袁曄蓉，李 強(qiáng).刺五加中紫丁香苷的制備及其含量測(cè)定［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2007，34（6）：809-810.

［7］項(xiàng)艷薇，史十例，李 莉，等.從刺五加中提取紫丁香苷的研究［J］.中華綜合醫(yī)學(xué)雜志， 2005， 6（5）：412.

［8］第四屆中國(guó)獸藥典委員會(huì)，中華人民共和國(guó)獸藥典2010年版二部［S］.

［9］匡海學(xué).中藥化學(xué)，第1版［M］.北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2003：49.