盧超等

摘要：用甲基-β-環(huán)糊精不飽和水溶液法制備丹參酮灌注液，并對(duì)其制備工藝進(jìn)行優(yōu)化。通過(guò)單因素試驗(yàn)確定影響丹參酮灌注液制備的主要工藝參數(shù)；以丹參酮ⅡA利用率為指標(biāo)，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化甲基-β-環(huán)糊精不飽和水溶液法制備丹參酮灌注液制備工藝；采用HPLC法對(duì)丹參酮ⅡA的質(zhì)量濃度進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算其回收率及精密度等。結(jié)果表明：影響丹參酮灌注液制備的主要工藝參數(shù)為投料質(zhì)量比、溫度、乙醇含量；甲基-β-環(huán)糊精不飽和水溶液法制備丹參酮灌注液的最佳條件是甲基-β-環(huán)糊精與丹參酮提取藥粉投料質(zhì)量比80 ∶1，60 ℃下加熱1 h，乙醇含量為5%，攪拌時(shí)間3 h，該條件下丹參酮利用率為69.96%；丹參酮ⅡA含量測(cè)定方法穩(wěn)定性好，回收率高。

關(guān)鍵詞：甲基-β-環(huán)糊精；丹參酮灌注液；丹參酮ⅡA；HPLC法

中圖分類號(hào)： S859.5+3文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）10-0200-04

收稿日期：2013-11-04

基金項(xiàng)目：國(guó)家科技支撐計(jì)劃（編號(hào)：2006BAD04A05-04 ）。

作者簡(jiǎn)介：盧超（1989—），男，四川廣元人，碩士研究生，主要從事中獸藥新制劑研究。E-mail：luc19898@126.com。

通信作者：梁劍平，博士，研究員，主要從事天然藥物化學(xué)研究。Tel：（0931）2115286；E-mail：liangjp100@sina.com。丹參酮（tanshinone）是一類從中藥丹參中提取出的脂溶性菲醌類化合物，包括丹參酮Ⅰ、ⅡA、 ⅡB，隱丹參酮，異丹參酮Ⅰ、ⅡA，異隱丹參酮等十多種酮類單體，均含有鄰醌或?qū)︴Y(jié)構(gòu)，其自身及其代謝產(chǎn)物能參與機(jī)體多種生化反應(yīng)，作為輔酶對(duì)某些生化反應(yīng)起促進(jìn)、干擾、電子傳遞作用，因此丹參酮表現(xiàn)出多種藥理作用，如天然抗氧化、心血管藥理作用、抗菌消炎、抗癌、抗病毒等作用。在抗菌消炎方面，丹參酮對(duì)以金黃色葡萄球菌為主的急性感染特別是對(duì)耐藥金黃色葡萄球菌株感染有顯著療效[1-3]。但丹參酮水溶性差，理化性質(zhì)不穩(wěn)定，這大大限制了其應(yīng)用。

甲基-β-環(huán)糊精（M-β-CD）是一種常用包合輔料，具有外親水、內(nèi)疏水的分子結(jié)構(gòu)，溶解度大于β-CD，在25 ℃水中的溶解度可達(dá)到為570 g/L，既溶于水，又溶于有機(jī)溶劑，形成的包合物水溶性增加，可提高藥物溶出速度；環(huán)糊精甲基化后，封閉了其分子內(nèi)羥基，可以抑制其與藥物的不穩(wěn)定反應(yīng)[4]。不飽和水溶液法是將M-β-CD配制成不飽和水溶液，從而對(duì)丹參酮原料藥粉進(jìn)行攪拌包合，制成穩(wěn)定的丹參酮包合液。

奶牛乳房炎是奶牛三大常見(jiàn)疾病之一，一直以來(lái)給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。用丹參酮藥物治療奶牛乳房炎已有很長(zhǎng)時(shí)間，但由于丹參酮原藥在水中溶解度差的問(wèn)題一直沒(méi)有被很好解決，在一定程度上限制了丹參酮藥物療效的發(fā)揮[5]。本研究通過(guò)采用M-β-CD不飽和水溶液法制備出用于治療奶牛乳房炎的丹參酮灌注液，并經(jīng)正交試驗(yàn)優(yōu)化制備工藝，旨在提高丹參酮藥物水溶性，為奶牛乳房炎的臨床治療提供參考。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1藥品與試劑丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)110766-200619）購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品鑒定所；丹參酮原料藥粉（丹參酮含量41.70%，丹參酮ⅡA含量11.57%，隱丹參酮含量3.16%）由本實(shí)驗(yàn)室自行提?。籑-β-CD購(gòu)自山東淄博千匯生物科技有限公司，含量≥98%；無(wú)水甲醇、無(wú)水乙醇、正磷酸為分析純；乙腈為色譜純。

1.1.2儀器Waters2695高效液相色譜儀；磁力加熱攪拌器（德國(guó)Heidolph公司，MR3001型）；電子分析天平（德國(guó) Sartorious 公司，BT25S型）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海鴻都電子科技有限公司，DHG-9070型）；循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；0.22 μm微孔濾膜（天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.2丹參酮含量測(cè)定方法

1.2.1檢測(cè)波長(zhǎng)選擇稱取丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品11.48 mg，置于25 mL棕色容量瓶中，加無(wú)水甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。吸取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液1 mL，置于10 mL棕色容量瓶中，加無(wú)水甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成 45.92 μg/mL 溶液備用。另取適量M-β-CD制成輔料溶液。用HPLC法在200～400 nm波長(zhǎng)掃描標(biāo)準(zhǔn)品貯備液及輔料溶液。

1.2.2色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以0.026%磷酸溶液為流動(dòng)相B，按表1進(jìn)行梯度洗脫。檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm，柱溫為25 ℃，流速為 1.2 mL/min。理論板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計(jì)算應(yīng)不低于2萬(wàn)。

表1梯度洗脫情況

時(shí)間（min）流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）0～2060～9010～4020～30 90 10

1.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制吸取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液1 mL，置于10 mL棕色容量瓶中，加無(wú)水甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。另分別吸取該溶液0.4、0.8、1.2、1.6、2 mL于2 mL離心管中，加無(wú)水甲醇稀釋至刻度，配制成濃度分別為9.18、18.37、27.55、36.74、45.92 μg/mL的系列對(duì)照品溶液備用，以甲醇溶液作空白對(duì)照，在“1.2.1”節(jié)中選擇的波長(zhǎng)處測(cè)定上述標(biāo)準(zhǔn)品吸光度。以峰面積對(duì)進(jìn)樣質(zhì)量濃度進(jìn)行回歸分析。

1.2.4供試樣品制備取適量灌注液，加入等體積無(wú)水乙醇解包合，超聲15 min，靜置12 h，旋蒸除去乙醇，再用乙酸乙酯萃取3次，收集乙酸乙酯層溶液，旋蒸濃縮，甲醇溶解并定容至100 mL容量瓶中，稱取該溶液適量并用甲醇稀釋10倍，即得供試樣品。

1.2.5定量測(cè)定與丹參酮ⅡA利用率的計(jì)算取供試品溶液，測(cè)定其峰面積，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算樣品中丹參酮ⅡA含量，并計(jì)算利用率。

丹參酮ⅡA利用率=灌注液中丹參酮ⅡA量/投入原料藥中丹參酮ⅡA量×100%；

投入原料藥中丹參酮ⅡA量=投入原藥量×11.57%。

1.2.6回收率試驗(yàn)取9份適量M-β-CD，加蒸餾水至刻度，分3組，每組3份。每組分別加入適量丹參酮ⅡA對(duì)照品溶液，配制成質(zhì)量濃度分別為10、15、20 μg/mL的樣品溶液，渦旋混合均勻后按照“1.2.4”節(jié)中供試樣品制備方法進(jìn)行處理，按“1.2.2”節(jié)色譜條件測(cè)定峰面積，并分別計(jì)算回收率及RSD值。

1.2.7精密度試驗(yàn)取“1.2.6”節(jié)回收率試驗(yàn)中相同濃度的丹參酮ⅡA對(duì)照品溶液，按照色譜條件連續(xù)測(cè)定6次，記錄峰面積，計(jì)算RSD值。

1.2.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一樣品，按“1.2.4”節(jié)的方法制備5份供試品，按“1.2.2”的方法進(jìn)樣分析，記錄峰面積，計(jì)算RSD值。

1.2.9穩(wěn)定性試驗(yàn)取“1.2.7”節(jié)中的15 μg/mL溶液，分別放置0、6、12、24、48、72 h后進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算RSD值。

1.3丹參酮灌注液的制備

采用M-β-CD不飽和水溶液法制備丹參酮灌注液。稱取適量M-β-CD置于圓底燒瓶中，加入適量蒸餾水，加熱溶解，制成濃度20%的不飽和M-β-CD溶液，水浴保溫。另取適量丹參酮原料藥粉，用少量無(wú)水乙醇溶解并緩慢滴加入M-β-CD溶液中，同時(shí)加熱攪拌一定時(shí)間后冷卻，經(jīng)022 μm濾膜過(guò)濾除菌，收集濾液。

1.4丹參酮灌注液制備工藝單因素試驗(yàn)

1.4.1投料質(zhì)量比單因素試驗(yàn)M-β-CD與丹參酮的投料質(zhì)量比分別為5 ∶1、10 ∶1、20 ∶1、40 ∶1、80 ∶1，60 ℃（加熱1 h）磁力攪拌6 h，對(duì)各組樣品液丹參酮 Ⅱ A利用率進(jìn)行比較。

1.4.2攪拌溫度單因素試驗(yàn)攪拌溫度分別為23 ℃、40 ℃、60 ℃（加熱1 h）、60 ℃（加熱6 h），投料質(zhì)量比為 80 ∶1，磁力攪拌6 h，對(duì)各組樣品液丹參酮ⅡA利用率進(jìn)行比較。

1.4.3攪拌時(shí)間單因素試驗(yàn)攪拌時(shí)間分別為3、6、12、24 h，投料質(zhì)量比為80 ∶1，60 ℃（加熱1 h）下磁力攪拌，對(duì)各組樣品液丹參酮ⅡA利用率進(jìn)行比較。

1.4.4乙醇含量單因素試驗(yàn)乙醇含量分別為5%、10%、15%，投料質(zhì)量比為80 ∶1，60 ℃（加熱1 h）磁力攪拌6 h，對(duì)各組樣品液丹參酮ⅡA利用率進(jìn)行比較。

1.4.5攪拌速度單因素試驗(yàn)攪拌速度分別為300、500、700 r/min，投料質(zhì)量比為80 ∶1，60 ℃（加熱1 h）攪拌6 h，對(duì)各組樣品液丹參酮ⅡA利用率進(jìn)行比較。

1.4.6pH值單因素試驗(yàn) pH值分別為6.5、7.5、8.5、9.5，投料質(zhì)量比為80 ∶1，60 ℃（加熱1 h）攪拌6 h，對(duì)各組樣品液丹參酮ⅡA利用率進(jìn)行比較。

1.5丹參酮-M -β-CD灌注液制備工藝優(yōu)化

采用L9（34）正交試驗(yàn)表，綜合考察投料質(zhì)量比、攪拌溫度、攪拌時(shí)間、乙醇含量對(duì)丹參酮ⅡA利用率的影響。制備丹參酮-M-β-CD灌注液正交試驗(yàn)的因素、水平見(jiàn)表2。

2.2丹參酮灌注液制備工藝單因素試驗(yàn)結(jié)果

投料質(zhì)量比單因素試驗(yàn)表明，M-β-CD與丹參酮藥粉投料質(zhì)量比分別為5 ∶1、10 ∶1、20 ∶1、40 ∶1、80 ∶1時(shí)，丹參酮ⅡA利用率分別為1.82%、3.71%、17.83%、28.54%、8429%，因此將兩者投料質(zhì)量比初步設(shè)定為80 ∶1。

攪拌溫度單因素試驗(yàn)表明，攪拌溫度分別為23 ℃、40 ℃、60 ℃（加熱1 h）、60 ℃（加熱6 h）時(shí)，丹參酮ⅡA利用率分別為62.85%、45.74%、73.05%、45.01%，由于β類環(huán)糊精的載藥特性及制備反應(yīng)特點(diǎn)，適當(dāng)加熱有利于反應(yīng)進(jìn)行，加熱過(guò)度可能導(dǎo)致逆反應(yīng)發(fā)生，故將攪拌溫度初步設(shè)定為60 ℃（加熱1 h）。

攪拌時(shí)間單因素試驗(yàn)表明，攪拌時(shí)間分別為3、6、12、24 h時(shí)，丹參酮ⅡA利用率分別為60.94%、73.05%、62.58%、72.43%，攪拌時(shí)間在≥6 h后丹參酮ⅡA利用率已經(jīng)沒(méi)有明顯提高，故為了提高制備工藝效率，將攪拌時(shí)間初步設(shè)定為6 h。

乙醇含量單因素試驗(yàn)表明，乙醇含量分別為5%、10%、15%時(shí)，丹參酮ⅡA利用率分別為13.97%、54.21%、4823%，制備過(guò)程中加入適量乙醇有助于將原料藥粉分散于水溶液中，可以加快反應(yīng)過(guò)程，但加入過(guò)量乙醇會(huì)加速反應(yīng)結(jié)合物的降解，故初步將乙醇含量設(shè)定為10%。

攪拌速度單因素試驗(yàn)表明，攪拌速度為300、500、700 r/min 時(shí)，丹參酮ⅡA利用率分別為78.06%、58.05%、60.99%，攪拌速度在300 r/min時(shí)效率最高，但綜合考慮試驗(yàn)誤差因素，在3種攪拌速度情況下丹參酮ⅡA利用率相差不大，表明該因素不是影響工藝制備的主要因素。

pH值單因素試驗(yàn)表明，pH值分別為6.5、7.5、8.5、9.5時(shí)，丹參酮ⅡA利用率分別為56.73%、62.82%、49.44%、6140%，pH值為75時(shí)可獲得最大的丹參酮ⅡA利用率，但可以看出，在本研究pH值范圍內(nèi)丹參酮ⅡA利用率變化不大，表明pH值也不是影響工藝制備的主要因素。

2.3丹參酮-M-β-CD灌注液制備工藝的優(yōu)化

通過(guò)比較表4中的極差（R值），各因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響的大小順序?yàn)橥读腺|(zhì)量比>攪拌溫度>乙醇濃度>攪拌時(shí)間。投料質(zhì)量比是影響工藝的主要因素，攪拌溫度、乙醇濃度次之，攪拌時(shí)間影響最小。最佳制備條件為A2B2C2D1。方差分析表明（表5），若α=0.05，因素A有顯著影響；若α=0.1，因素A、B、D均有顯著影響。綜合直觀分析和方差分析結(jié)果，最佳工藝條件為A2B2D1，即M-β-CD與丹參酮藥粉投料質(zhì)量比為80 ∶1，攪拌溫度為60 ℃（加熱1 h），乙醇含量為5%，攪拌時(shí)間對(duì)制備影響不顯著，為節(jié)省工藝時(shí)間，定為3 h即可。

因素偏差平方和自由度F值F0.1臨界值A(chǔ)351.163278.6489B68.961215.4459C4.46521.0009D49.162211.0119誤差 4.4602

2.4丹參酮灌注液有效成分溶解度結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果顯示，通過(guò)M-β-CD對(duì)丹參酮的包合作用，丹參酮灌注液中治療奶牛乳房炎最關(guān)鍵的2種單體丹參酮ⅡA及隱丹參酮在水中的溶解度分別可達(dá)0.38、0.14 g/L，丹參酮在水中溶解度可達(dá)1.32～1.82 g/L，較丹參酮原料藥粉在水中溶解度有很大提高[6]。

3結(jié)論與討論

本研究對(duì)丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度的線性關(guān)系、回收率、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性等進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示，丹參酮ⅡA在270 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，在質(zhì)量濃度9.18～45.92 μg/mL時(shí)其與峰面積有良好線性關(guān)系。該方法回收率較好，精密度符合要求，且結(jié)果快捷、準(zhǔn)確，可用于丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度的測(cè)定。

本研究采用丹參酮ⅡA作為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定灌注液中丹參酮含量，其實(shí)也可采用隱丹參酮作為標(biāo)準(zhǔn)品，只是考慮到丹參酮ⅡA的保留時(shí)間較為靠后，與其他物質(zhì)保留時(shí)間值區(qū)分明顯，不易受干擾，故選擇丹參酮ⅡA作標(biāo)準(zhǔn)品。但在投料質(zhì)量比單因素試驗(yàn)中可以看出，在投料質(zhì)量比較低時(shí)，M-β-CD對(duì)隱丹參酮的包合效果好（丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度與隱丹參酮質(zhì)量濃度比值數(shù)倍于兩者在原料藥粉中的比值）；在投料質(zhì)量比較高時(shí)，M-β-CD對(duì)丹參酮ⅡA的包合效果更佳，目前對(duì)該現(xiàn)象的研究不多，有待進(jìn)一步研究。

M-β-CD可以增加藥物的溶解度，提高藥物穩(wěn)定性，是β類環(huán)糊精共有特點(diǎn)之一，但由于M-β-CD水溶性好，達(dá)到570 g/L，若按一般文獻(xiàn)報(bào)道的采用飽和水溶液法制備[7-8]，將M-β-CD制備飽和水溶液后，其黏稠度特別大，不利于包合反應(yīng)進(jìn)行，故本研究將M-β-CD水溶液濃度調(diào)至20%，能得到良好的包合效果。同時(shí)，包絡(luò)復(fù)合物在水溶液中隨溫度升高使其被包絡(luò)的水溶性物質(zhì)加大釋放速度和釋放量，在適當(dāng)條件下可以使釋放出的物質(zhì)濃度與包絡(luò)在M-β-CD的物質(zhì)濃度達(dá)到平衡，所以制備過(guò)程中最好開(kāi)始時(shí)溫度高一點(diǎn)，處理過(guò)程中逐漸降溫，故本研究中所有加熱溫度均只加熱1 h，后逐漸降溫?cái)嚢鑋9]。

目前中藥制劑所面臨的共同問(wèn)題是成分復(fù)雜、純化到高含量品質(zhì)成本高、各有效成分發(fā)揮藥效方式研究不明確，對(duì)中藥新劑型研究帶來(lái)一定難度，本研究中丹參酮研究也遇到類似問(wèn)題[10]，采用的丹參酮藥粉中總酮含量?jī)H為41.70%（經(jīng)一般工藝純化得到的較好結(jié)果），丹參酮ⅡA含量11.57%，隱丹參酮含量3.16%，所以對(duì)于包合進(jìn)入M-β-CD中的物質(zhì)成分復(fù)雜多樣，對(duì)此包合物進(jìn)行表征和鑒定有一定難度。本研究也對(duì)灌注液進(jìn)行了30 d的穩(wěn)定性檢查，結(jié)果表明灌注液穩(wěn)定性良好。

本研究先采用單因素試驗(yàn)確定基本因素及其大致適用范圍，再通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化確定出最佳制備工藝條件：M-β-CD 與丹參酮藥粉投料質(zhì)量比為80 ∶1，溫度為60 ℃（加熱1 h），乙醇含量為5%。

對(duì)于水溶性差的原料藥進(jìn)行環(huán)糊精包合制備以增加其水溶性的研究很多 [11-14]。本研究也是利用M-β-CD的獨(dú)特分子結(jié)構(gòu)及包合特性來(lái)增加丹參酮的溶解度，同時(shí)結(jié)合該藥治療奶牛乳房炎的臨床目的及局部給藥（乳房灌注）的給藥方式，從而制備出一種新的中獸藥制劑，并通過(guò)試驗(yàn)優(yōu)化其制備工藝，檢查其溶解度和穩(wěn)定性。丹參酮-M-β-CD灌注液顯著提高了藥物的溶解度和穩(wěn)定性，并且丹參酮含量達(dá)到治療濃度，能夠滿足獸醫(yī)臨床需要。

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因素偏差平方和自由度F值F0.1臨界值A(chǔ)351.163278.6489B68.961215.4459C4.46521.0009D49.162211.0119誤差 4.4602

2.4丹參酮灌注液有效成分溶解度結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果顯示，通過(guò)M-β-CD對(duì)丹參酮的包合作用，丹參酮灌注液中治療奶牛乳房炎最關(guān)鍵的2種單體丹參酮ⅡA及隱丹參酮在水中的溶解度分別可達(dá)0.38、0.14 g/L，丹參酮在水中溶解度可達(dá)1.32～1.82 g/L，較丹參酮原料藥粉在水中溶解度有很大提高[6]。

3結(jié)論與討論

本研究對(duì)丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度的線性關(guān)系、回收率、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性等進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示，丹參酮ⅡA在270 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，在質(zhì)量濃度9.18～45.92 μg/mL時(shí)其與峰面積有良好線性關(guān)系。該方法回收率較好，精密度符合要求，且結(jié)果快捷、準(zhǔn)確，可用于丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度的測(cè)定。

本研究采用丹參酮ⅡA作為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定灌注液中丹參酮含量，其實(shí)也可采用隱丹參酮作為標(biāo)準(zhǔn)品，只是考慮到丹參酮ⅡA的保留時(shí)間較為靠后，與其他物質(zhì)保留時(shí)間值區(qū)分明顯，不易受干擾，故選擇丹參酮ⅡA作標(biāo)準(zhǔn)品。但在投料質(zhì)量比單因素試驗(yàn)中可以看出，在投料質(zhì)量比較低時(shí)，M-β-CD對(duì)隱丹參酮的包合效果好（丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度與隱丹參酮質(zhì)量濃度比值數(shù)倍于兩者在原料藥粉中的比值）；在投料質(zhì)量比較高時(shí)，M-β-CD對(duì)丹參酮ⅡA的包合效果更佳，目前對(duì)該現(xiàn)象的研究不多，有待進(jìn)一步研究。

M-β-CD可以增加藥物的溶解度，提高藥物穩(wěn)定性，是β類環(huán)糊精共有特點(diǎn)之一，但由于M-β-CD水溶性好，達(dá)到570 g/L，若按一般文獻(xiàn)報(bào)道的采用飽和水溶液法制備[7-8]，將M-β-CD制備飽和水溶液后，其黏稠度特別大，不利于包合反應(yīng)進(jìn)行，故本研究將M-β-CD水溶液濃度調(diào)至20%，能得到良好的包合效果。同時(shí)，包絡(luò)復(fù)合物在水溶液中隨溫度升高使其被包絡(luò)的水溶性物質(zhì)加大釋放速度和釋放量，在適當(dāng)條件下可以使釋放出的物質(zhì)濃度與包絡(luò)在M-β-CD的物質(zhì)濃度達(dá)到平衡，所以制備過(guò)程中最好開(kāi)始時(shí)溫度高一點(diǎn)，處理過(guò)程中逐漸降溫，故本研究中所有加熱溫度均只加熱1 h，后逐漸降溫?cái)嚢鑋9]。

目前中藥制劑所面臨的共同問(wèn)題是成分復(fù)雜、純化到高含量品質(zhì)成本高、各有效成分發(fā)揮藥效方式研究不明確，對(duì)中藥新劑型研究帶來(lái)一定難度，本研究中丹參酮研究也遇到類似問(wèn)題[10]，采用的丹參酮藥粉中總酮含量?jī)H為41.70%（經(jīng)一般工藝純化得到的較好結(jié)果），丹參酮ⅡA含量11.57%，隱丹參酮含量3.16%，所以對(duì)于包合進(jìn)入M-β-CD中的物質(zhì)成分復(fù)雜多樣，對(duì)此包合物進(jìn)行表征和鑒定有一定難度。本研究也對(duì)灌注液進(jìn)行了30 d的穩(wěn)定性檢查，結(jié)果表明灌注液穩(wěn)定性良好。

本研究先采用單因素試驗(yàn)確定基本因素及其大致適用范圍，再通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化確定出最佳制備工藝條件：M-β-CD 與丹參酮藥粉投料質(zhì)量比為80 ∶1，溫度為60 ℃（加熱1 h），乙醇含量為5%。

對(duì)于水溶性差的原料藥進(jìn)行環(huán)糊精包合制備以增加其水溶性的研究很多 [11-14]。本研究也是利用M-β-CD的獨(dú)特分子結(jié)構(gòu)及包合特性來(lái)增加丹參酮的溶解度，同時(shí)結(jié)合該藥治療奶牛乳房炎的臨床目的及局部給藥（乳房灌注）的給藥方式，從而制備出一種新的中獸藥制劑，并通過(guò)試驗(yàn)優(yōu)化其制備工藝，檢查其溶解度和穩(wěn)定性。丹參酮-M-β-CD灌注液顯著提高了藥物的溶解度和穩(wěn)定性，并且丹參酮含量達(dá)到治療濃度，能夠滿足獸醫(yī)臨床需要。

參考文獻(xiàn)：

[1]房其年，張佩玲，徐宗沛. 丹參抗菌有效成分的研究[J]. 化學(xué)學(xué)報(bào)，1976，3（3）：197-209.

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[4]崔福德. 藥劑學(xué)[M]. 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2011：447-453.

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[6]聶陽(yáng)，李苑新，劉波，等. 丹參酮干乳劑的制備及體外溶出度的研究[J]. 中成藥，2008，30（6）：831-835.

[7]周一萬(wàn)，李 濤，劉潤(rùn)強(qiáng)，等. 冬青油羥丙基-β-環(huán)糊精包合物制備工藝及殺蟲活性研究[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010（10）：110-114.

[8]魏海濤，宋 敏，李亮華，等. 氟苯尼考-β-環(huán)糊精包合物的研制[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30（4）：94-97.

[9]廖鋒慧.不同環(huán)糊精衍生物對(duì)三種不同分子量藥物包合熱力學(xué)研究[D]. 重慶：重慶大學(xué)，2011.

[10]張霄翔，陳少兵，王艷萍. 總丹參酮提取與純化工藝研究[J]. 中藥材，2008，31（3）：431-434.

[11]安琳娜.環(huán)糊精包合技術(shù)用于提高難溶性藥物溶解性的研究[D]. 北京：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)，2010.

[12]伍永富，吳品江，魏萍，等. Box-Behnken設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化木犀草素-β-環(huán)糊精包合物的制備工藝研究[J]. 中草藥，2010，41（7）：1094-1099.

[13]朱素燕. β-環(huán)糊精及其衍生物包合對(duì)難溶性藥物的增溶作用研究[D]. 杭州：浙江大學(xué)，2006.

[14]陶濤. 羥丙基倍他環(huán)糊精的特性及其藥劑學(xué)應(yīng)用[J]. 中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2002，33（6）：304-308.

因素偏差平方和自由度F值F0.1臨界值A(chǔ)351.163278.6489B68.961215.4459C4.46521.0009D49.162211.0119誤差 4.4602

2.4丹參酮灌注液有效成分溶解度結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果顯示，通過(guò)M-β-CD對(duì)丹參酮的包合作用，丹參酮灌注液中治療奶牛乳房炎最關(guān)鍵的2種單體丹參酮ⅡA及隱丹參酮在水中的溶解度分別可達(dá)0.38、0.14 g/L，丹參酮在水中溶解度可達(dá)1.32～1.82 g/L，較丹參酮原料藥粉在水中溶解度有很大提高[6]。

3結(jié)論與討論

本研究對(duì)丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度的線性關(guān)系、回收率、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性等進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示，丹參酮ⅡA在270 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，在質(zhì)量濃度9.18～45.92 μg/mL時(shí)其與峰面積有良好線性關(guān)系。該方法回收率較好，精密度符合要求，且結(jié)果快捷、準(zhǔn)確，可用于丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度的測(cè)定。

本研究采用丹參酮ⅡA作為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定灌注液中丹參酮含量，其實(shí)也可采用隱丹參酮作為標(biāo)準(zhǔn)品，只是考慮到丹參酮ⅡA的保留時(shí)間較為靠后，與其他物質(zhì)保留時(shí)間值區(qū)分明顯，不易受干擾，故選擇丹參酮ⅡA作標(biāo)準(zhǔn)品。但在投料質(zhì)量比單因素試驗(yàn)中可以看出，在投料質(zhì)量比較低時(shí)，M-β-CD對(duì)隱丹參酮的包合效果好（丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度與隱丹參酮質(zhì)量濃度比值數(shù)倍于兩者在原料藥粉中的比值）；在投料質(zhì)量比較高時(shí)，M-β-CD對(duì)丹參酮ⅡA的包合效果更佳，目前對(duì)該現(xiàn)象的研究不多，有待進(jìn)一步研究。

M-β-CD可以增加藥物的溶解度，提高藥物穩(wěn)定性，是β類環(huán)糊精共有特點(diǎn)之一，但由于M-β-CD水溶性好，達(dá)到570 g/L，若按一般文獻(xiàn)報(bào)道的采用飽和水溶液法制備[7-8]，將M-β-CD制備飽和水溶液后，其黏稠度特別大，不利于包合反應(yīng)進(jìn)行，故本研究將M-β-CD水溶液濃度調(diào)至20%，能得到良好的包合效果。同時(shí)，包絡(luò)復(fù)合物在水溶液中隨溫度升高使其被包絡(luò)的水溶性物質(zhì)加大釋放速度和釋放量，在適當(dāng)條件下可以使釋放出的物質(zhì)濃度與包絡(luò)在M-β-CD的物質(zhì)濃度達(dá)到平衡，所以制備過(guò)程中最好開(kāi)始時(shí)溫度高一點(diǎn)，處理過(guò)程中逐漸降溫，故本研究中所有加熱溫度均只加熱1 h，后逐漸降溫?cái)嚢鑋9]。

目前中藥制劑所面臨的共同問(wèn)題是成分復(fù)雜、純化到高含量品質(zhì)成本高、各有效成分發(fā)揮藥效方式研究不明確，對(duì)中藥新劑型研究帶來(lái)一定難度，本研究中丹參酮研究也遇到類似問(wèn)題[10]，采用的丹參酮藥粉中總酮含量?jī)H為41.70%（經(jīng)一般工藝純化得到的較好結(jié)果），丹參酮ⅡA含量11.57%，隱丹參酮含量3.16%，所以對(duì)于包合進(jìn)入M-β-CD中的物質(zhì)成分復(fù)雜多樣，對(duì)此包合物進(jìn)行表征和鑒定有一定難度。本研究也對(duì)灌注液進(jìn)行了30 d的穩(wěn)定性檢查，結(jié)果表明灌注液穩(wěn)定性良好。

本研究先采用單因素試驗(yàn)確定基本因素及其大致適用范圍，再通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化確定出最佳制備工藝條件：M-β-CD 與丹參酮藥粉投料質(zhì)量比為80 ∶1，溫度為60 ℃（加熱1 h），乙醇含量為5%。

對(duì)于水溶性差的原料藥進(jìn)行環(huán)糊精包合制備以增加其水溶性的研究很多 [11-14]。本研究也是利用M-β-CD的獨(dú)特分子結(jié)構(gòu)及包合特性來(lái)增加丹參酮的溶解度，同時(shí)結(jié)合該藥治療奶牛乳房炎的臨床目的及局部給藥（乳房灌注）的給藥方式，從而制備出一種新的中獸藥制劑，并通過(guò)試驗(yàn)優(yōu)化其制備工藝，檢查其溶解度和穩(wěn)定性。丹參酮-M-β-CD灌注液顯著提高了藥物的溶解度和穩(wěn)定性，并且丹參酮含量達(dá)到治療濃度，能夠滿足獸醫(yī)臨床需要。

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[6]聶陽(yáng)，李苑新，劉波，等. 丹參酮干乳劑的制備及體外溶出度的研究[J]. 中成藥，2008，30（6）：831-835.

[7]周一萬(wàn)，李 濤，劉潤(rùn)強(qiáng)，等. 冬青油羥丙基-β-環(huán)糊精包合物制備工藝及殺蟲活性研究[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010（10）：110-114.

[8]魏海濤，宋 敏，李亮華，等. 氟苯尼考-β-環(huán)糊精包合物的研制[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30（4）：94-97.

[9]廖鋒慧.不同環(huán)糊精衍生物對(duì)三種不同分子量藥物包合熱力學(xué)研究[D]. 重慶：重慶大學(xué)，2011.

[10]張霄翔，陳少兵，王艷萍. 總丹參酮提取與純化工藝研究[J]. 中藥材，2008，31（3）：431-434.

[11]安琳娜.環(huán)糊精包合技術(shù)用于提高難溶性藥物溶解性的研究[D]. 北京：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)，2010.

[12]伍永富，吳品江，魏萍，等. Box-Behnken設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化木犀草素-β-環(huán)糊精包合物的制備工藝研究[J]. 中草藥，2010，41（7）：1094-1099.

[13]朱素燕. β-環(huán)糊精及其衍生物包合對(duì)難溶性藥物的增溶作用研究[D]. 杭州：浙江大學(xué)，2006.

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