鄒林，黃杰，簡詠芬，陳尚花，周少雄（廣東省佛山市第二人民醫(yī)院檢驗科 528000）

珠蛋白生成障礙性貧血（地貧）是一種危害極大的單基因遺傳性疾病，其臨床最常見的類型有α地貧與β地貧2種。廣東和廣西人群中α與β地貧基因攜帶率分別高達11.07%和23.98%［1－2］。嚴重類型（包括重型和中間型）α與β地貧均為致死性或致殘性血液病，目前尚無理想的治愈方法，給家庭和社會帶來沉重負擔。夫婦雙方若同為輕型地貧（即地貧基因攜帶者），子代遺傳概率中1／4為正常胎兒，1／2為輕型地貧（同父母一樣），1／4為重型地貧患者。地貧的遺傳與性別無關(guān)，發(fā)病概率均等。因此，開展地貧篩查，指導高風險夫婦在懷孕后特定時期進行產(chǎn)前診斷，是防止重型地貧兒出生，達到優(yōu)生優(yōu)育的重要措施。本文通過回顧性分析各種地貧基因型和紅細胞參數(shù)資料，闡明兩者間的關(guān)系，為臨床通過基因型預測該病的臨床表現(xiàn)和進程及預后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2012年2月至2013年6月佛山市第二人民醫(yī)院經(jīng)基因診斷確診的地貧基因攜帶者為研究對象，其中α地貧315例，根據(jù)其缺失α基因個數(shù)分3組，缺失1個基因者為A組，缺失2個基因者為B組，缺失3個基因者為C組。A組68例（－α3.747例，－α4.221例），B組201例，C組46例（－－SEA／－α3.7：27例，－－SEA／－α4.2：19例）。β地貧165例，其中CD41－42雜合子63例，IVS2nt654雜合子42例，－28雜合子26例，CD17雜合子21例，其他少見類型13例。αβ復合型貧26例。隨機選取100名健康體檢者作為對照組。所有研究對象年齡均在18～55歲。

1.2 檢測方法

1.2.1 采血使用基因診斷的真空采血管，用枸櫞酸鈉或乙二胺四乙酸抗凝全血提取DNA，不可用肝素抗凝全血，及時送檢或置2～8℃冰箱中并于5d內(nèi)檢測，或在－20℃存放1個月以內(nèi)檢測。

1.2.2 方法采用XT－5000全自動血細胞分析儀進行血常規(guī)分析。α－地貧采用跨越斷裂點的聚合酶鏈反應（PCR）技術(shù)（也稱裂口PCR，gap－PCR），檢測東南亞型缺失（－－SEA），右側(cè)缺失（－α3.7），左側(cè)缺失（－α4.2）。β－地貧采用PCR－膜反向點雜交技術(shù)（RDB）檢測17種基因位點突變，分別是CD41－42、IVS2nt654、－28、CD71－72、CD17、βE、CD31、CD27／28、IVS1－1、CD43、－32、－29、－30、CD14－15、CAP、Int、IVS1－5。

1.3 統(tǒng)計學處理使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK 檢驗，基因型和紅細胞參數(shù)相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)性分析，以α＝0.05為檢驗水準，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 α地貧基因型組間紅細胞參數(shù)的比較缺失不同個數(shù)的α地貧基因攜帶者均表現(xiàn)為不同程度的小細胞低色素性貧血。隨著缺失基因個數(shù)的增多，紅細胞（RBC）數(shù)量呈上升趨勢A＜B＜C，血紅蛋白（Hb）與紅細胞3個平均指數(shù)［平均紅細胞血紅蛋白（MCH）、平均紅細胞容積（MCV）、平均血紅蛋白濃度（MCHC）］呈下降趨勢顯示A＞B＞C，而描述紅細胞體積異質(zhì)性的紅細胞分布寬度（RDW－CV）呈上升趨勢A＜B＜C。表3顯示缺失1個α基因的A組兩個亞型：右側(cè)缺失（－α3.7），左側(cè)缺失（－α4.2）各項指標差異均無統(tǒng)計學意義。表2顯示缺失3個α基因的C組兩個亞型（－－SEA／－α3.7）與（－－SEA／－α4.2）各項指標差異也均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。采用Pearson相關(guān)性分析α基因缺失個數(shù)與紅細胞參數(shù)的相關(guān)性顯示：α基因缺失個數(shù)與RBC 及RDW－CV呈正相關(guān)（r分別為0.872，0.561，P＜0.05），與Hb、MCV、MCH、MCHC呈負相關(guān)（r分別為－0.708，－0.901，－0.826，－0.735，P＜0.05）。

2.2 β地貧基因型組間紅細胞參數(shù)的比較通過對中國人群最常見的4種β地貧基因型及αβ復合型的統(tǒng)計學分析比較，結(jié)果見表4。顯示RBC，MCHC，RDW－CV 各組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），而Hb、MCV、MCH 在各組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。其中－28位點突變的β地貧在Hb，MCV，MCH，MCHC 4個參數(shù)值高于其他β地貧組。RBC－CV顯示αβ復合型體積異質(zhì)性最大。

表1 不同α地貧基因型組別間紅細胞參數(shù)的比較（）

表1 不同α地貧基因型組別間紅細胞參數(shù)的比較（）

表2 不同α地貧基因型A組亞型間紅細胞參數(shù)的比較（）

表2 不同α地貧基因型A組亞型間紅細胞參數(shù)的比較（）

表3 不同α地貧基因型C組亞型間紅細胞參數(shù)的比較（）

表3 不同α地貧基因型C組亞型間紅細胞參數(shù)的比較（）

表4 不同β地貧基因型組別間紅細胞參數(shù)的比較（）

表4 不同β地貧基因型組別間紅細胞參數(shù)的比較（）

續(xù)表4 不同β地貧基因型組別間紅細胞參數(shù)的比較（）

續(xù)表4 不同β地貧基因型組別間紅細胞參數(shù)的比較（）

3 討論

本研究分別對α地貧各種基因型與紅細胞參數(shù)的關(guān)系，以及中國人群最常見的4種β地貧基因型與紅細胞參數(shù)的關(guān)系進行了回顧性的分析。

α地貧的分子基礎(chǔ)是α2和α1基因缺失或發(fā)生點突變，使α－珠蛋白產(chǎn)量下降，胎兒體內(nèi)過多的γ－珠蛋白形成Hb Bart′s或成人體內(nèi)過多的β－珠蛋白形成Hb H，導致無效造血和紅細胞被破壞。α地貧血以α－珠蛋白基因缺失為主，臨床上分為靜止型（α地貧2，缺失1α）；標準型（α地貧1，缺失2α）；中間型（Hb H 病，缺失3α）；重型（Hb Bart′s胎兒水腫綜合征，缺失4α）。在中國主要是東南亞缺失型（－－SEA）；－－／αα（α地貧1）。α地貧則多為右側(cè)缺失型（α－3.7）；－α／αα及左側(cè)缺失型（－α－4.2）；－α／αα。α－地貧的點突變較少見，本文在收集資料的過程中暫未發(fā)現(xiàn)α－地貧的點突變的患者。在對α地貧各種基因型與紅細胞參數(shù)的關(guān)系研究中發(fā)現(xiàn)，α珠蛋白基因缺陷的個數(shù)與RBC數(shù)目呈正相關(guān)，與反映RBC 體積異質(zhì)性的RDW－CV 呈正相關(guān)；與Hb、MCV、MCH、MCHC則呈現(xiàn)負相關(guān)。這與同類研究中張永良等［3］，陳和平等［4］研究一致。也就是說α地貧的表型取決于α基因缺陷的基因型，其表型的嚴重程度與基因缺失個數(shù)密切相關(guān)。

人類β－珠蛋白基因位于11號染色體短臂1區(qū)2帶（11p1.2），β地貧的病因主要是由于該基因的點突變，少數(shù)為基因缺失。目前世界范圍內(nèi)已報道200多種β基因突變類型，中國人中已發(fā)現(xiàn)34種，其中以CD17、CD41－42、IVS2nt654、－28等4種為熱點突變，約占突變類型的90%［5－6］。本文對這最常見的4種突變進行了研究，結(jié)果顯示，對于中國人群最常見的4種β地貧基因突變來說，所引起的血液學表型相差不大。其中－28位點突變引起的血液學表型變化相對稍輕一些。另外發(fā)現(xiàn)αβ復合型地貧與單純的β地貧所引起的血液學表型變化并無大的差異。

另外從本研究可以發(fā)現(xiàn)，無論是α地貧、β地貧還是αβ復合型地貧，患者Hb降低，而RBC 數(shù)量升高，這有別于缺鐵性貧血等其他類型貧血的血液學特征。其他學者也觀察到了這一現(xiàn)象［3，7－9］，認為這種紅細胞數(shù)量增多的現(xiàn)象是因為促紅細胞生成素介導的反調(diào)節(jié)作用所致。在地貧患者的骨髓中，原始紅細胞提高了Ca2＋和cAMP的水平從而使細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1／2增多［10］

綜上所述，本文通過對地貧患者不同基因型的血細胞參數(shù)變化特點進行分析，可以指導臨床對該類患者進行快速準確的診斷，并及時的評價該類患者病情。

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