劉 淼，林辰壹＊＊，阿依買木·沙吾提，劉玉芳，賈培松

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與園藝學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052;2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)設(shè)施農(nóng)業(yè)研究所，新疆 烏魯木齊 830052;3.塔里木大學(xué)植物科學(xué)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300;4.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，新疆 烏魯木齊 830091)

多脂鱗傘Phonliota adiposa(Fr.)Quél.的子實(shí)體色澤鮮艷呈金黃色，菌蓋、菌柄上布滿黃褐色鱗片，又稱作黃傘，富含蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素及多種礦物質(zhì)元素，可提神醒腦，并可預(yù)防、治療腫瘤和葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎桿菌以及結(jié)核桿菌的感染。食之黏滑爽口，味道鮮美，風(fēng)味獨(dú)特，是1種食藥兼優(yōu)且具有較高商品價(jià)值的珍稀食用菌[1－3]。研究證明，碳氮比含量直接影響菌絲體正常生長(zhǎng)，影響食用菌子實(shí)體發(fā)生時(shí)間和產(chǎn)量[4，5]。新疆多脂鱗傘主要分布于新疆天山、阿勒泰山山區(qū)的河谷闊葉林中，烏魯木齊南山小渠子及精河河岸的楊、柳樹林也有分布[6]。因此，為了獲得最適合多脂鱗傘生長(zhǎng)的碳氮比值，本文針對(duì)采摘于新疆阿瓦提縣野生多脂鱗傘進(jìn)行不同碳氮比利用能力研究，為生理活性物質(zhì)代謝、分析與提取提供技術(shù)支撐，為新疆阿瓦提多脂鱗傘菌種生產(chǎn)及人工栽培提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 野生多脂鱗傘的獲得與菌絲體活化

野生多脂鱗傘采自新疆阿瓦提縣 (39°31′N、79°45′E、海拔1 028 m)拜什艾日克鎮(zhèn)農(nóng)田防護(hù)林中柳樹的枯洞。經(jīng)多代分離獲得穩(wěn)定菌株多脂鱗傘LL－01，試驗(yàn)菌株由新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)所提供。以PDA加富培養(yǎng)基為活化培養(yǎng)基，滅菌后趁熱倒平板，取大小為5 mm×5 mm菌種塊接種，25℃黑暗條件下菌絲體活化培養(yǎng)。

1.2 多脂鱗傘LL－01碳氮比優(yōu)化配方

準(zhǔn)確稱量磷酸二氫鉀2 g、硫酸鎂1 g、VB10.05 g、瓊脂20 g，充分溶解后定容至1 000 mL，培養(yǎng)基為基本配方[7]。以本項(xiàng)目前期研究過程中獲得適宜的碳源 (可溶性淀粉)和氮源 (硝酸銨)為依據(jù)，設(shè)置 10∶1、15∶1、20∶1、25∶1、30∶1、35∶1、40∶1七種碳氮比，以不加可溶性淀粉、硝酸銨為對(duì)照CK;加入20 g可溶性淀粉，不加任何的氮源為CK1;以加入2 g硝酸銨，不加任何碳源為CK2。各配方調(diào)pH至7，滅菌和接種方法同1.1所述。

1.3 指標(biāo)測(cè)定與數(shù)據(jù)處理

菌絲長(zhǎng)勢(shì):+++表示長(zhǎng)勢(shì)濃密、++表示長(zhǎng)勢(shì)一般、+表示長(zhǎng)勢(shì)差稀疏、—表示萎縮、－表示不生長(zhǎng)。

菌落形態(tài)特征:□表示老化斑點(diǎn)、◎表示菌絲干縮、¤表示菌絲松散，同時(shí)觀測(cè)菌絲生長(zhǎng)圈、邊緣特征、菌絲爬壁、菌絲吐水、菌落形狀、中央隆起或倒伏、轉(zhuǎn)色、氣味和雜菌抑制線特點(diǎn)。

顯微特征觀察:在10倍×40倍Motic SFC－28顯微鏡下，觀測(cè)菌絲粗細(xì)、分支、形狀以及每視野下鎖狀聯(lián)合特征等。

每天觀測(cè)并記錄菌絲生長(zhǎng)量[8]，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算平均滿皿時(shí)間 (FT)，即菌絲體生長(zhǎng)至培養(yǎng)皿直徑大小所需天數(shù) (d)、平均總生長(zhǎng)量GT(mm)、平均生長(zhǎng)速率SGT(mm·d－1)、最大日生長(zhǎng)量Gmax(mm)及出現(xiàn)時(shí)間DGmax(d)，達(dá)到50%總生長(zhǎng)量所需的平均生長(zhǎng)天數(shù)G50(d)。

每個(gè)處理重復(fù)5次。25℃黑暗條件下恒溫培養(yǎng)7 d，每天同一時(shí)間觀測(cè)菌絲長(zhǎng)勢(shì)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用DPS 7.05進(jìn)行差異顯著性分析，用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

多脂鱗傘LL－01菌絲體在供試的7種以可溶性淀粉和硝酸銨為碳氮比試驗(yàn)中，接種后第1天菌絲體恢復(fù)生長(zhǎng)，菌絲體氣味正常且都有爬壁現(xiàn)象、菌絲成輻射狀生長(zhǎng)、菌絲體污染率低、抗雜菌能力強(qiáng)。通過多脂鱗傘LL－01在供試的7種碳氮比中菌絲體長(zhǎng)勢(shì)、生長(zhǎng)圈、鎖狀聯(lián)合數(shù)量、生長(zhǎng)速度的比較分析，多脂鱗傘LL－01對(duì)不同碳氮比種類的利用能力存在顯著 (p＜0.05)和極顯著 (p＜0.01)差異，具有碳氮比選擇性利用特征。結(jié)果見圖1、圖2、表1、表2。

表1 可溶性淀粉和硝酸銨為碳氮比條件下多脂鱗傘LL－01菌落形態(tài)特征

表2 可溶性淀粉和硝酸銨為碳氮比條件對(duì)多脂鱗傘LL－01菌絲生長(zhǎng)的影響

由圖1、圖2、表1、表2可見，當(dāng)C/N=30∶1時(shí)，菌絲長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、1 d～7 d內(nèi)菌絲體生長(zhǎng)一直處于增長(zhǎng)期，F(xiàn)T＜7 d，GT、SGT達(dá)到最大生長(zhǎng)量，到達(dá)G50的時(shí)間為4 d～5 d。GT生長(zhǎng)量是碳氮比10∶1和40∶1處理的109.89%和117.95%，Gmax出現(xiàn)時(shí)間比碳氮比為10∶1和40∶1處理滯后了1 d，是多脂鱗傘LL－01生長(zhǎng)適宜的碳氮比。

當(dāng)C/N=25∶1時(shí)，菌絲長(zhǎng)勢(shì)稀疏、生長(zhǎng)速度緩慢、生長(zhǎng)邊緣不完整，F(xiàn)T＞7 d，GT分別是碳氮比30∶1處理、CK、CK1、CK2的 82.49%、146.12%、124.21%、124.16%。Gmax出現(xiàn)時(shí)間比碳氮比30∶1處理、CK分別滯后了2 d。菌絲長(zhǎng)勢(shì)、GT、SGT隨著碳和氮的添加量而增大。這充分表明碳和氮添加量以及適宜的碳氮比濃度，對(duì)多脂鱗傘LL－01菌絲生長(zhǎng)有著顯著影響。

3 討論與結(jié)論

碳氮比過高或過低都不利于菌絲生長(zhǎng)。前人對(duì)采自吉林的野生多脂鱗傘馴化過程中認(rèn)為，葡萄糖/蛋白胨為40∶1是菌絲體生長(zhǎng)的適宜碳氮比[9]，本研究結(jié)果顯示，新疆阿瓦提多脂鱗傘菌絲在可溶性淀粉/硝酸銨=10∶1～40∶l的范圍內(nèi)均有生長(zhǎng)現(xiàn)象，當(dāng)C/N為30∶1時(shí)菌絲長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，菌絲生長(zhǎng)量、生長(zhǎng)速率均達(dá)到最大值，闡明阿瓦提多脂鱗傘對(duì)碳氮比要求有其特殊性，與北冬蟲夏草[10]、花臉香蘑[11]的碳氮比研究結(jié)果一致，說明與其它食用菌種類一樣，多脂鱗傘存在適宜的碳氮比需求和不同的利用能力。

本研究運(yùn)用多脂鱗傘的最適碳源 (可溶性淀粉)和最適氮源 (硝酸銨)進(jìn)行不同梯度的碳氮比試驗(yàn)，與以葡萄糖為碳源、以硝酸鉀為氮源的經(jīng)典碳氮比配方研究相比較[12]，可溶性淀粉含碳量高于葡萄糖，硝酸銨的含氮量高于硝酸鉀，且銨鹽比硝酸鹽更易被食用菌利用[1]，說明以可溶性淀粉和硝酸銨為碳氮比的試驗(yàn)?zāi)軌驗(yàn)槎嘀[傘提供更多的碳氮營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。前人以最適碳源 (蔗糖)和最適氮源 (蛋白胨)進(jìn)行了鮑魚菇的適宜碳氮比研究[13]，而以可溶性淀粉為碳源和以硝酸銨為氮源的碳氮比研究是多脂鱗傘適宜碳氮比研究的首次報(bào)道。

本研究證實(shí)，可溶性淀粉和硝酸鉀碳氮比為10∶1～40∶1之間均能顯著影響新疆阿瓦提多脂鱗傘菌絲體的生長(zhǎng)，當(dāng)C/N=30∶1，菌絲體表現(xiàn)出生長(zhǎng)速度快、活力強(qiáng)、長(zhǎng)勢(shì)整齊。多脂鱗傘表現(xiàn)出對(duì)不同濃度碳氮比利用速率和利用效率的差異。

[1]黃年來，林志彬，陳國(guó)良.中國(guó)食藥用菌[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2010:16－22.

[2]Basaran D.Antimicrobial activity of the macrofungus Pholiota adipose[J].Fitoterapia，2004(75):395－397.

[3]Deng P，Zhang GQ，Zhou B，et al.Extraction and vitro antioxidant activity of intracellular polysaccharide by Pholiota adipose SX－02[J].Journal of Bioscience and Bioengineering，2011(111):50－54.

[4]宮春宇，胡清秀.黃傘菌絲體多糖提取工藝及免疫調(diào)節(jié)作用研究[J].食品工業(yè)，2012(8):48－51.

[5]李德海，王志強(qiáng)，孫常雁，等.黃傘子實(shí)體多糖的初步純化及降血脂研究 [J].食品科學(xué)，2010，31(9):268－271.

[6]趙震宇.新疆食用菌志[M].烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社，2001:102－103.

[7]Manjunathan J，Kaviyarasan V.Studies on the growth requirements of Lentinus tuberregium(Fr.)an edible mushroom [J].Middle East Journal of Scientific Research，2010，5(2):81－85.

[8]Nwokoye AI，Kuforiji OO，Onip I.Studies on mycelia growth requirements of Pleurotus ostreatus(Fr.)singer [J].International Journal of Basic＆ Applied Sciences，2010，10(2):47－53.

[9]黃清榮，楊立紅，劉書濤，等.黃傘液體培養(yǎng)碳氮源的優(yōu)選[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，25(6):611－614.

[10]孟玲，王麗華，黃芳，等.花臉香蘑菌絲體培養(yǎng)特性的研究[J].食用菌學(xué)報(bào)，2010，17(3):41－45.

[11]馬國(guó)良，韓玉軍.北冬蟲夏草菌絲對(duì)不同碳氮源利用的研究[J].青海大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2007，25(2):11－17.

[12]賀新生，候大斌，何培新，等.野生蕈菌生物學(xué)特征與栽培技術(shù)[M].北京:中國(guó)輕工業(yè)出版社，2009:204－205.

[13]趙彥杰.不同碳、氮源對(duì)鮑魚菇生長(zhǎng)的影響研究 [J].植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào)，2005，11(6):858－86.