劉海娟　陳瑞芳　曾夢清　游出超

摘 要：對單胞藻的擴(kuò)大培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行綜述，并對貝類育苗生產(chǎn)過程中的單胞藻培養(yǎng)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行總結(jié)，為大規(guī)模單胞藻培養(yǎng)提供參考。

關(guān)鍵詞：單胞藻 擴(kuò)大培養(yǎng) 生產(chǎn)應(yīng)用

中圖分類號：S963.21 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）06（b）-0228-02

單胞藻是水產(chǎn)育苗和養(yǎng)殖的基礎(chǔ)餌料，具有營養(yǎng)豐富、適應(yīng)性強(qiáng)、生長快速和易培養(yǎng)等特點(diǎn)[1-3]。單胞藻種類繁多，富含蛋白質(zhì)、維生素、多不飽和脂肪酸、活性多糖等，目前也應(yīng)用于食品業(yè)、能源產(chǎn)業(yè)等，市場前景十分廣闊。

隨著養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)日趨成熟，大規(guī)模的生產(chǎn)性育苗養(yǎng)殖正在開展，對配套的基礎(chǔ)餌料單胞藻培養(yǎng)技術(shù)提出較高要求。但在單胞藻培養(yǎng)過程中，往往因?yàn)楦鞣N原因而失敗，給生產(chǎn)帶來直接影響，嚴(yán)重時(shí)致生產(chǎn)無法開展。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，目前研究重點(diǎn)多集中在保種和小規(guī)模的培養(yǎng)階段，對培養(yǎng)條件等做了諸多的闡述[4]，但針對大規(guī)模生產(chǎn)性擴(kuò)大培養(yǎng)具體操作的技術(shù)要領(lǐng)鮮少報(bào)道。本文對文獻(xiàn)中人工育苗生產(chǎn)過程中的單胞藻擴(kuò)大培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行歸納總結(jié)，從單胞藻的擴(kuò)大培養(yǎng)方法、敵害防治和生產(chǎn)應(yīng)用情況三個(gè)方面做詳細(xì)闡述。

1 擴(kuò)大培養(yǎng)方法

1.1 培養(yǎng)用海水

培養(yǎng)用海水需經(jīng)過消毒殺菌處理后才能使用。過濾海水，即外海海水經(jīng)沉淀沙濾黑暗處理后導(dǎo)入單胞藻培育車間，經(jīng)300目以上篩絹袋過濾后加入培育池。接種前用50 g/m3漂白粉處理24 h。池中連續(xù)充氣，氣量小且均勻?yàn)楹茫臃N前加入等量的Na2S2O3中和余氯，將氣量調(diào)大，使其快速溶解中和[5]。一般放置40 min～1 h即可，準(zhǔn)確測定使用簡易的淀粉碘化鉀試劑測定余氯。余氯清除后加入肥料，使用植物生長素50～70 g/m3，溶解后潑灑于培養(yǎng)水中。陳懷定[6]研究發(fā)現(xiàn)在單胞藻培養(yǎng)液中添加有機(jī)肥，例如酵母膏、發(fā)酵魚粉和魚汁等，可加長藻類穩(wěn)定周期。

1.2 培養(yǎng)設(shè)施

擴(kuò)大培養(yǎng)的車間頂為透明的塑料薄膜，兩面玻璃，車間內(nèi)用黑簾等調(diào)節(jié)光照。培養(yǎng)容器規(guī)格小的水泥池或黑桶和規(guī)格較大的水泥池等。水泥池內(nèi)壁及上邊緣涂有防水漆，光滑提高吸光性。歐俊新[7]研究提出使用全封閉式塑料薄膜培養(yǎng)金藻的方式，具有節(jié)約便宜、易于管理和不易污染的特點(diǎn)，在實(shí)踐中取得較好效果。

1.3 培養(yǎng)方法

選擇晴朗天氣，一次性接種即培養(yǎng)容器加滿水用于接種藻液，這樣既起到池壁消毒的作用又充分利用了培育空間。

選擇處于指數(shù)生長期的藻種進(jìn)行接種。將保種室中藻種液接入小規(guī)格的培養(yǎng)容器，池底充氣，開始?xì)庖。耘囵B(yǎng)液面有微波為準(zhǔn)，通過調(diào)整培育池上方的黑色網(wǎng)簾降低光照強(qiáng)度。隨著培育時(shí)間延長，藻液顏色逐漸變深，可適當(dāng)調(diào)大充氣，增強(qiáng)光照強(qiáng)度，但是在天氣炎熱的正中午，應(yīng)適當(dāng)調(diào)整光照，防止光線過強(qiáng)引起藻液變質(zhì)死亡。小池培養(yǎng)一般3～5 d。

用水泵將小池中的藻液接種到大規(guī)格的水泥池中，一般為一對一接種。有研究表明培養(yǎng)條件較優(yōu)時(shí)可分?jǐn)U兩池亦能培養(yǎng)，藻液濃度較深要持續(xù)培養(yǎng)時(shí)，要適當(dāng)添加肥料，保證營養(yǎng)供給[8]。較濃的藻液可重復(fù)增加培養(yǎng)用海水繼續(xù)培養(yǎng)，實(shí)施補(bǔ)充肥料即可。為提高藻類的光合作用效率，適當(dāng)加入NaHCO3和NaSiO3。大池培養(yǎng)一般3～6d。

金藻類對環(huán)境要求較高，嚴(yán)格要求每個(gè)接種過程，與其他藻種隔離較好[9-11]。角毛藻類由于其喜光的特性，應(yīng)在培養(yǎng)過程中加大光照強(qiáng)度，充氣不必太大或停止充氣，其接種密度也可降低，在光線充足的情況下，角毛藻生長迅速，且不易污染[12-13]。小球藻類由于其沉降性和喜氮的特性，培養(yǎng)過程中始終保持較大氣量并在培養(yǎng)過程中加入適量尿素，提高水體中的氮含量[14-15]。扁藻喜磷，培養(yǎng)過程中添加磷肥，提高水體中的磷含量[16]。扁藻在培養(yǎng)條件較好時(shí)，可根據(jù)生產(chǎn)需求進(jìn)行高密度的同級擴(kuò)種，這樣既能快速擴(kuò)大培養(yǎng)又能有效的利用生產(chǎn)空間。

1.4 培養(yǎng)管理措施

單胞藻是利用CO2進(jìn)行光自養(yǎng)的，通入不同濃度的CO2濃度培養(yǎng)的藻細(xì)胞，其pH通過CO2-HCO3-調(diào)節(jié)，CO2濃度越高pH下降越明顯，而pH值對細(xì)胞中酶的活性有一定影響，包括親和CO2的酶，所以適當(dāng)?shù)腃O2濃度可促進(jìn)藻細(xì)胞生長[17-19]。本研究組在藻類培養(yǎng)過程中，通過加入一定濃度的NaHCO3來增加水中CO2濃度，取得了良好的效果。

水溫是影響單胞藻生長的最重要因素之一，而華南地區(qū)高溫天氣持續(xù)時(shí)間較長，所以必須提出有效應(yīng)對高溫的措施。采用低溫地下水對藻液進(jìn)行降溫[20-21]，此種方法適用于一、二級藻種，可以保證用于擴(kuò)種的藻種質(zhì)量，有一定的借鑒價(jià)值，但大規(guī)模的藻類培養(yǎng)無法實(shí)現(xiàn)。本研究組通過生產(chǎn)實(shí)踐嘗試了幾種方法來降低高溫影響：適時(shí)給封閉車間通風(fēng)，調(diào)整黒簾遮擋強(qiáng)光，加大充氣，在車間中間走道潑灑淡水。這些措施一般在天氣較炎熱、晴朗的時(shí)候采用，而且應(yīng)針對不同的藻種做相應(yīng)的調(diào)整，因?yàn)槊糠N藻都有各自的適溫范圍和最適溫度范圍。

2 敵害生物防治方法

2.1 培養(yǎng)用車間內(nèi)的清理消毒

培育設(shè)備和工具用洗潔精刷洗干凈后用漂白粉融水潑灑或浸泡消毒，2～3 d后淡水沖洗干凈，暴曬；在藻類培育前，可對封閉性的車間使用化學(xué)性的蒸汽消毒，此類消毒較徹底并且效果較好，但要嚴(yán)格處理方法，操作人員需保護(hù)措施，以免造成自身傷害。

2.2 培養(yǎng)用水的消毒

培養(yǎng)用水除了化學(xué)處理消毒，用水操作過程應(yīng)該嚴(yán)格預(yù)防污染[22]。加水時(shí)過濾用的篩絹袋使用過后一定要仔細(xì)清洗消毒，集中放在較干燥通風(fēng)的位置，每隔一段時(shí)間進(jìn)行一次徹底消毒。營養(yǎng)鹽溶解潑灑使用器具也要嚴(yán)格消毒，潑灑操作既要保證均勻又要仔細(xì)小心，避免造成很大水浪。培育水盡量避免交叉使用，減少使用步驟，如需間接使用時(shí)必須保證對運(yùn)送工具的消毒。

2.3 接種

為了更好的培養(yǎng)效果，應(yīng)該選擇密度高質(zhì)量好的藻種和較高的接種量[23]。操作過程中，人工操作較多，要求操作者保持自身清潔，搬運(yùn)之前用75% （v/v）酒精噴霧消毒，傾倒要快但要防止四濺。而抽水泵擴(kuò)種則要對水泵和水管嚴(yán)格消毒，在水管頭用篩絹袋再次過濾處理，防止原生蟲等污染。endprint

2.4 培養(yǎng)管理

首先要避免不同藻種間的污染，做不到分車間培養(yǎng)可分區(qū)培養(yǎng)。在蚊蟲較多的時(shí)候，可在車間使用紗窗，或直接在培育池或桶上方加蓋防蚊蟲紗網(wǎng)。大規(guī)模藻類培養(yǎng)過程亦要以防為主，一旦出現(xiàn)個(gè)別池污染，如果達(dá)到投喂標(biāo)準(zhǔn)立即使用，否則立即采用化學(xué)方法處理并對培育設(shè)備進(jìn)行徹底消毒。

3 生產(chǎn)應(yīng)用情況

單胞藻的培養(yǎng)是貝類人工育苗的基礎(chǔ)。目前大范圍的貝類人工育苗生產(chǎn)同時(shí)展開，餌料生物單胞藻的需求量急劇增加。而不同餌料組合和濃度對厚殼貽貝的親貝性腺發(fā)育、幼蟲和稚貝生長發(fā)育產(chǎn)生影響[24]。在目前的貝類人工育苗過程中幾種單胞藻的混合投喂效果明顯[25]。

4 生產(chǎn)實(shí)踐總結(jié)

目前的單胞藻生產(chǎn)性培養(yǎng)過程中往往混合使用培養(yǎng)容器，在消毒不徹底的情況下導(dǎo)致后面所接藻種被污染。本研究組在生產(chǎn)中將培養(yǎng)容器分類專門使用，在充分利用現(xiàn)有資源的基礎(chǔ)上應(yīng)用的，如1 m3的小池和0.5 m3的黑桶。小池經(jīng)過防水漆的噴刷，池子內(nèi)壁較光滑，而且所在車間光線和封閉性較好，故用于培養(yǎng)條件較嚴(yán)格的金藻和角毛藻。在小池?cái)?shù)量有限的情況下，黑桶相對的小容積易于存放，其所放車間較通風(fēng)，可根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)過程進(jìn)行擺放，對于容易培養(yǎng)的小球藻和扁藻非常有利。根據(jù)單胞藻的培養(yǎng)時(shí)限，金藻變濃后極易污染變質(zhì)，不適合長期高濃度培養(yǎng)，需及時(shí)使用，可采用連續(xù)擴(kuò)種的方式，所以使用6 m3水泥池。而小球藻和扁藻培養(yǎng)條件比較容易維持，對其生長影響較小，故選擇10 m3大池。

近年，本研究組在大獺蛤和織錦巴非蛤等貝類的人工育苗生產(chǎn)過程中開展單胞藻培養(yǎng)研究，取得了較好的效果。金藻和角毛藻培養(yǎng)成功率達(dá)到80%以上，小球藻和扁藻培養(yǎng)的成功率達(dá)到90%以上。貝類育苗生產(chǎn)過程中，單胞藻的投喂原則：首先選藻，從培養(yǎng)時(shí)間長的藻開始使用；其次選優(yōu)，選擇質(zhì)量較好的藻；再次選次，在藻類生長出現(xiàn)問題且藻類不足時(shí)選擇污染相對較小的單胞藻。本研究組在2012年9月至12月間，大量培育單胞藻供應(yīng)幾種貝類室內(nèi)人工育苗，成功育得貝類苗種一億粒以上。

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