白銀花，劉婧，李曉，張立實

（四川大學華西公共衛(wèi)生學院，四川成都610041）

蘆薈（Aloe）是百合科多年生常綠肉質(zhì)草本植物，富含多糖、有機酸、蛋白質(zhì)以及多種礦物質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)和多酚類還原性物質(zhì)，被譽為“21世紀最佳保健食品”和純天然抗氧化劑[1]。 銀杏（Ginkgo biloba L.）葉、果和外種皮等皆具有藥用價值，被稱為“全身都是寶的活化石”[2-3]。國內(nèi)外研究表明，銀杏葉所含的黃酮化合物具有明顯抗氧化活性和抗自由基活性[4-6]。擬用大劑量乙醇造小鼠氧化損傷模型，對不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑的抗氧化作用進行比較。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蘆薈銀杏復(fù)合制劑：XX生物科技有限公司；清潔級雄性KM小鼠，60只，體質(zhì)量25 g～30 g，8周齡，成都達碩生物科技有限公司。

GSH試劑盒、T-SOD試劑盒、GSH-Px試劑盒、MDA試劑盒、蛋白質(zhì)羰基含量試劑盒：南京建成生物工程研究所；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-2800型紫外-可見分光光度計：尤尼柯（上海）儀器有限公司；BIO-RAD680酶標儀：上海普林斯頓生物科技發(fā)展有限公司；AU400生化分析儀：奧林巴斯中國有限公司；DY89-IDI電動玻璃勻漿器：寧波新芝科技有限公司；Thermo ST16低溫高速離心機：Thermo Scientific；L530高速臺式離心機：長沙湘儀儀器公司；HHSYZL-Ni電熱恒溫水浴箱：北京長風儀器公司。

1.3 方法

1.3.1 動物分組

實驗小鼠飼養(yǎng)溫度18℃～22℃，濕度55%～75%，自然光照，自由采食和飲水。小鼠在實驗環(huán)境下給予基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，按體質(zhì)量隨機分成6組，分別為正常對照組、模型對照組、2A組、1A組、1B組和2B組。

1.3.2 造模及給藥方法

實驗組按1 000 mg/kg·bw·d的劑量灌胃給予不同配方的受試樣品，正常對照組和模型對照組給予同體積雙蒸水，連續(xù)灌胃30 d，末次灌胃后，模型對照組和實驗組禁食16 h（過夜），然后1次性灌胃給予50%乙醇12 mL/kg·bw，正常對照組不作處理。

1.3.3 測試樣品的制備和檢測

模型對照組和實驗組灌胃乙醇6 h后，股動脈取血處死，1.5 mL EP管收集血液，3 000 r/min離心10 min，取上清液備用。解剖小鼠，取肝臟，稱取0.4 g～0.5 g和0.1g～0.2g肝臟組織，分別加入9倍體積的生理鹽水（用于測肝臟GSH、T-SOD、GSH-Px和MDA含量）和蛋白質(zhì)羰基含量測試盒試劑一（用于測肝臟蛋白質(zhì)羰基含量），于勻漿器中制成10%的組織勻漿液，2 500 r/min離心10 min，取上清液備用。

采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒檢測血清和肝組織抗氧化物質(zhì)GSH含量、抗氧化酶TSOD和GSH-Px活力、脂質(zhì)氧化產(chǎn)物MDA含量以及蛋白質(zhì)羰基含量；采用全自動生化分析儀測定肝組織蛋白含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑對小鼠一般情況的影響

不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑對小鼠一般情況的影響見表1。

表1 蘆薈銀杏復(fù)方制劑對小鼠體重的影響（x±s）Table 1 Aloe gingko compound preparation effect on body weight in mice（±s）

表1 蘆薈銀杏復(fù)方制劑對小鼠體重的影響（x±s）Table 1 Aloe gingko compound preparation effect on body weight in mice（±s）

注：A為蘆薈全凝膠凍干粉；B為200：1蘆薈凝膠凍干粉；1為配方1；2 為配方 2。

組別 劑量/（g/kg·bw）動物數(shù) 0 d體重/g 15 d體重/g 30 d體重/g正常對照 0.00 10 27.70±1.42 39.00±3.16 45.50±2.55模型對照 0.00 10 28.30±1.83 42.30±3.30 46.10±2.96 2A 0.38 10 28.70±2.54 39.50±2.91 46.90±1.73 1A 0.30 10 28.70±1.83 41.90±3.14 47.80±2.66 1B 0.30 10 28.20±1.99 41.00±2.63 48.20±2.62 2B 0.38 10 28.50±1.37 39.80±2.74 47.90±2.28

實驗結(jié)束時，模型對照組與正常對照組比較體重略有增加但無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），各受試配方組動物體重與模型對照組比較亦無顯著性差異（P＞0.05）。各組動物在實驗過程中活動正常，無異常表現(xiàn)，表明各配方對小鼠生長發(fā)育和一般健康情況均無不良影響。

2.2 不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑對小鼠血清抗氧化能力的影響

不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑對小鼠血清抗氧化能力的影響見表2。

表2 蘆薈銀杏復(fù)方制劑對小鼠血清GSH、SOD、GSH-Px和MDA的影響（X±S，N=10）Table 2 Aloe gingko compound preparation in mice serum GSH ，SOD，GSH-Px and MDA（X±S，N=10）

給予大劑量乙醇造模，模型對照組與正常對照組比較，小鼠血清 GSH、SOD 水平下降（P＜0.01），GSH-Px水平降低（P＜0.05），MDA 水平升高（P＜0.01）。說明乙醇氧化損傷模型造模成功。

給予不同配方的蘆薈銀杏復(fù)方制劑30d后，經(jīng)大劑量乙醇造模，實驗組與模型對照組比較，小鼠血清GSH、SOD 水平升高（P＜0.01）；1A組 GSH-Px水平升高（P＜0.01）；MDA 水平降低（P＜0.01）。不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑血清抗氧化能力順序為：2A＞2B＞1A＞1B。即蘆薈全凝膠凍干粉配方2＞200：1蘆薈凝膠凍干粉配方2＞蘆薈全凝膠凍干粉配方1＞200：1蘆薈凝膠凍干粉配方1。

2.3 不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑對小鼠肝組織抗氧化能力的影響

不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑對小鼠肝組織抗氧化能力的影響見表3。

表3 蘆薈銀杏復(fù)方制劑對小鼠肝組織GSH、SOD、GSH-Px、MDA和蛋白質(zhì)羰基的影響（X±S，N=10）Table 3 Aloe gingko compound preparation in mice liver tissue GSH，SOD，GSH-Px，MDA and the Effects of Protein Carbonyl（X±S，N=10）

給予大劑量乙醇造模，模型對照組與溶劑對照組比較，小鼠肝組織GSH和GSH-Px水平下降（P＜0.05），SOD 水平下降（P＜0.01），MDA和蛋白質(zhì)羰基水平升高（P＜0.01）。說明乙醇氧化損傷模型造模成功。

給予不同配方的蘆薈銀杏復(fù)方制劑30 d后，經(jīng)大劑量乙醇造模，各實驗組與模型對照組比較，小鼠肝組織GSH水平升高（P＜0.01）；SOD和GSH-Px水平升高（P＜0.01）；MDA 和蛋白質(zhì)羰基水平降低（P＜0.01）。不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑肝組織抗氧化能力順序為：2A＞2B＞1A＞1B。 即蘆薈全凝膠凍干粉配方 2＞200：1蘆薈凝膠凍干粉配方2＞蘆薈全凝膠凍干粉配方1＞200：1蘆薈凝膠凍干粉配方1。

3 結(jié)論

乙醇大量攝入，可激活氧分子產(chǎn)生自由基，導致組織細胞過氧化效應(yīng)及體內(nèi)還原性谷胱甘肽的耗竭。灌胃大劑量乙醇后，SOD活性下降，MDA含量升高[7-8]。本實驗中，給予50%乙醇12 mL/（kg·bw）造模，模型對照組與溶劑對照組比較，小鼠血清和肝組織GSH、SOD、GSH-Px水平均降低，MDA和蛋白質(zhì)羰基水平均升高。說明乙醇氧化損傷模型造模成功。

機體防御體系的抗氧化能力的強弱與健康程度存在著密切聯(lián)系[9-10]。GSH的主要生理作用是清除體內(nèi)的自由基，做為體內(nèi)一種重要的抗氧化劑，保護蛋白質(zhì)和酶等分子中的巰基。GSH-Px和SOD是機體內(nèi)兩種重要的抗氧化酶。GSH-Px能催化過氧化氫的分解，SOD能夠清除超氧陰離子自由基，這兩種酶活力的變化能反映機體氧化損傷的程度；MDA和蛋白質(zhì)羰基分別是脂質(zhì)和蛋白質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，它們的變化可以反映細胞損傷的程度[11-12]。大量研究表明，當機體遭受自由基攻擊而被氧化時，抗氧化劑的注入和使用，使抗氧化物質(zhì)GSH含量增加，血清和肝組織中抗氧化酶類SOD和GSH-Px活性等酶活性提高，MDA和蛋白質(zhì)羰基含量下降，從而使機體的抗氧化能力增強[13-17]。

本實驗中，給予不同配方的蘆薈銀杏復(fù)合制劑30 d后，經(jīng)大劑量乙醇造模，實驗組與模型對照組比較，小鼠血清和肝組織GSH、SOD、GSH-Px水平升高，MDA和蛋白質(zhì)羰基水平降低。說明不同配方的蘆薈銀杏復(fù)合制劑均能夠使乙醇氧化損傷模型小鼠抗氧化作用增強。不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑抗氧化能力順序為：2A＞2B＞1A＞1B。即蘆薈全凝膠凍干粉配方2＞200∶1蘆薈凝膠凍干粉配方2＞蘆薈全凝膠凍干粉配方1＞200∶1蘆薈凝膠凍干粉配方1。