趙波濤 羅慶豐 高 玟 黃傳生 涂 侃

應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)新輔助化療前后乳腺癌腫瘤患者標(biāo)本的激素受體ER、PR表達(dá)情況，比較前后的結(jié)果是否一致，探索出手術(shù)后樣本進(jìn)行檢測(cè)是否可行，是否可以解決活檢樣本的局限性，為乳腺癌手術(shù)后規(guī)范的輔助治療作出有益的探索。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集我院2007年12月－2009年8月期間住院患者乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌32例，患者均為女性，年齡33～68歲，平均年齡50.8歲。

1.2 方法

ER、PR表達(dá)檢測(cè)采用MaxvisionTM免疫組化法，按照免疫組化試劑盒的操作說(shuō)明進(jìn)行。ER、PR均為工作液，具體步驟:①4 μm連續(xù)切片，裱于涂有APES的載玻片上，70℃烤片2h;② 二甲苯脫蠟，梯度酒精入水;③3%過(guò)氧化氫室溫孵育30 min，消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶;④ 抗原修復(fù):切片浸于pH6.0檸檬酸溶液中，電飯鍋中煮沸5 min，保溫10 min，自然冷卻;⑤PBS洗，3 min×2次;⑥ 加入ER、PR抗體，4℃冰箱12 h;⑦ 復(fù)溫，PBS洗去一抗3 min×2次;⑧ 滴加Maxvision試劑，室溫作用1 h;⑨ PBS洗3 min×2次;⑩DAB光鏡下顯色，蘇木精復(fù)染，封片。光鏡下觀察ER、PR在乳腺癌組織中表達(dá)。陽(yáng)性對(duì)照:ER、PR蛋白陽(yáng)性組織片(購(gòu)自中杉生物科技有限公司)，陰性對(duì)照:PBS代替一抗。

采用“FEC”(5-氟脲嘧啶，鹽酸表柔比星，環(huán)磷酰胺)方案化療1個(gè)周期，化療結(jié)束1周內(nèi)行手術(shù)治療，確保資料的可比性。

1.3 結(jié)果判斷

ER、PR陽(yáng)性為細(xì)胞核有棕黃色顆粒沉著。根據(jù)著色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞比例計(jì)分。①按切片中細(xì)胞染色深淺評(píng)分:無(wú)染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。②根據(jù)細(xì)胞數(shù)記分:陽(yáng)性細(xì)胞率＜5%為0分，5% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～75%為3分，＞76%為4分。每例積分=①×②。按積分高低分為:0分為陰性(－)，1～4分為弱陽(yáng)性(+)，5～9分為中等陽(yáng)性(++)，9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行配對(duì)資料χ2檢驗(yàn)分析。

2 結(jié)果

32例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者新輔助化療前、后ER、PR檢測(cè)結(jié)果完全相同:5例不表達(dá)ER，8例ER+，12例ER++，7例 ER+++;6例不表達(dá) PR，7例PR+，12例PR++，7例 PR+++。同時(shí) ER、PR陽(yáng)性表達(dá)具有良好一致性(kappa值=0.54)，新輔助化療前后ER、PR陽(yáng)性表達(dá)間具有顯著相關(guān)性(χ2=39.1，P=0.000，P ＜0.01，γ =0.748)，見(jiàn)表 1。

表1 32例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中ER、PR表達(dá)相關(guān)性/例

3 討論

內(nèi)分泌治療依據(jù)是根據(jù)乳腺癌激素受體ER、PR表達(dá)狀況，研究表明ER陽(yáng)性患者有效率達(dá)到50% ～60%，而ER陰性患者的有效率僅為5% ～8%;ER、PR均為陽(yáng)性者其內(nèi)分泌治療的有效率為70%［1］。由此可見(jiàn)，ER、PR狀況對(duì)乳腺癌內(nèi)分泌治療的療效有著重要影響，值得注意的是，在判斷復(fù)乳腺癌患者ER、PR的表達(dá)狀況時(shí)，主要依賴(lài)于它們?cè)谠l(fā)灶中的表達(dá)狀況，以往常常應(yīng)用手術(shù)后的病理標(biāo)本作檢測(cè)，患者檢測(cè)前未接受任何輔助治療，該方法獲取的組織標(biāo)本大，檢測(cè)的結(jié)果代表性強(qiáng)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。隨著新輔助化療為近期研究熱點(diǎn)，新輔助化療的療效已得到肯定，越來(lái)越廣泛的應(yīng)用于臨床 ，新輔助化療患者乳腺癌激素受體ER、PR表達(dá)檢測(cè)準(zhǔn)確性在手術(shù)后的輔助治療中具有重要意義，但目前關(guān)于新輔助化療對(duì)于乳腺癌激素受體ER、PR的影響的研究較少。一般在采用新輔助化療前，患者常需要治療前乳腺腫塊均經(jīng)空心針活檢證實(shí)為癌，該組織可作為激素受體檢測(cè)的標(biāo)本，但空心針活檢的組織標(biāo)本較少，檢測(cè)的難度很大，切片細(xì)胞數(shù)目有限且代表性較局限，常常影響陽(yáng)性結(jié)果的判斷，并不能準(zhǔn)確反映患者乳腺癌激素受體ER、PR表達(dá)情況。同時(shí)檢測(cè)ER、PR激素表達(dá)情況非常必要，隨著越來(lái)越多的乳腺癌患者接受新輔助化療，新輔助化療后手術(shù)的標(biāo)本是否能代表該腫瘤患者的激素受體ER、PR表達(dá)情況，新輔助化療前后該腫瘤患者標(biāo)本的激素受體ER、PR表達(dá)情況是否一致，是一個(gè)值得探討的問(wèn)題。

趙玉斌等［4］研究表明新輔助化療對(duì)乳腺癌激素受體表達(dá)的沒(méi)有影響，本研究32例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌接受新輔助治療前后樣本標(biāo)記比較結(jié)果具有完全相同，同時(shí)研究表明ER、PR受體陽(yáng)性表達(dá)具有良好一致性(kappa值=0.54)，ER、PR受體陽(yáng)性表達(dá)率關(guān)聯(lián)性較好，采用接受新輔助化療后的手術(shù)標(biāo)本進(jìn)行乳腺癌激素受體ER、PR表達(dá)的檢測(cè)可行，該方法取得樣本細(xì)胞含量多，最能代表患者乳腺癌激素受體表達(dá)，同時(shí)進(jìn)一步證明新輔助化療是安全有效的，不會(huì)影響患者乳腺癌激素受體表達(dá)，本研究采用32例配對(duì)樣本研究，有必要進(jìn)一步加大樣本含量，進(jìn)一步檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

［1］Jimil K，Kumar K，F(xiàn)atima SH，et al.Clinical Studies on Hormonal Status in Breast Cancer and its Impact on Quality of Life QOL〔J〕.J Cancer Sci and Ther，2010，1(2):225-230.

［2］李永清，王永勝，劉延冰，等.新輔助化療對(duì)乳腺癌bcl-2、bax基因表達(dá)影響的研究〔J〕.實(shí)用癌癥雜志，2006，21(3):263-265.

［3］孫迪文.新輔助化療后乳腺癌組織中survivin表達(dá)及其與Ki-67、AI的相關(guān)性研究〔J〕.實(shí)用癌癥雜志，2010，25(2):126-129.

［4］趙玉斌，張少華，張積仁，等.新輔助化療對(duì)乳腺癌ER、PR和EphA2表達(dá)的影響及意義〔J〕.腫瘤防治研究，2010，37(4):457-460.