歐陽仙，徐 聰，薛 濤，楊耀蘭，呂 嶸，宋紅蓮，孫紹萍

(1.玉溪市動物疫病預(yù)防控制中心，云南 玉溪 653100;2.易門縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所，云南 易門 651100;3.易門縣龍泉街道農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心，云南 易門 651100)

弓形蟲病(Toxoplasmosis)是由剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)引起的嚴重危害宿主健康的人畜共患寄生蟲病[1]。弓形蟲是專性細胞內(nèi)寄生的原蟲，免疫功能正常的宿主感染后都呈無癥狀帶蟲狀態(tài)，但免疫功能受損及先天感染者常導(dǎo)致嚴重的后果，孕婦感染可引起早產(chǎn)、流產(chǎn)甚至死胎[2－3]。弓形蟲分布廣泛，寄生宿主范圍大，可感染人和豬、馬、牛、羊、狗、貓等多種動物，其臨床表現(xiàn)多樣，從無癥狀隱性到亞臨床到顯性、重癥以至死亡，主要侵害幼畜和新生仔畜，羔羊發(fā)病后表現(xiàn)為免疫力低下、生長緩慢、消瘦、貧血，嚴重時可引起死亡，以及呼吸和神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，懷孕母羊感染后因病變而導(dǎo)致流產(chǎn)、不孕、死胎，造成繁殖障礙。

近年來，玉溪市山羊不明原因流產(chǎn)病例增加，在排除布魯氏菌病感染的前提下，懷疑可能與弓形蟲感染有關(guān)。為了摸清玉溪市農(nóng)村散養(yǎng)山羊弓形蟲病的感染情況，2013年3—4月，應(yīng)用間接血凝試驗(IHA)對玉溪市8縣(區(qū))42個鄉(xiāng)(鎮(zhèn))95戶農(nóng)戶的427份山羊血清樣品進行了弓形蟲病的血清學(xué)調(diào)查，現(xiàn)將調(diào)查情況報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清

427份被檢血清均采自玉溪市轄區(qū)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))自然放牧的山羊群。空腹靜脈采血，擺成斜面，置4℃冰箱3 h后，放在室溫下，待血清析出后收集血清，冷凍保存待檢。

1.1.2 診斷液

弓形體病(IHA)抗原、陰性標準血清、陽性標準血清、稀釋液購自中國農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所，批號分別為:弓形體病(IHA)抗原130305、陰陽性標準血清121008、稀釋液 130105。

1.1.3 器械

96孔“V”型有機玻璃微量反應(yīng)板、微量加樣器、微量振蕩器。

1.2 方法

1.2.1 操作步驟

按照中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準NY/T 573—2002的規(guī)定，在96(12×8)孔V形有機玻璃板上進行檢測，弓形蟲IHA診斷制劑按瓶上標示毫升數(shù)，加入滅菌蒸餾水稀釋搖勻，1 500～2 000 r/min離心 5～10min，棄上清液，加等量稀釋液后搖勻，置4℃下靜置24 h后使用。①加稀釋液:用微量加樣器在96孔有機玻璃反應(yīng)板的每孔中加0.075mL稀釋液。②加待檢血清、陽性對照血清、陰性對照血清:第1孔加入相應(yīng)被檢血清0.025 mL。③稀釋:稀釋至第3孔，第4孔為稀釋液對照。④加診斷液:將診斷液搖勻，每孔加0.025mL診斷液，加完后將反應(yīng)板置微型振蕩器上振蕩1～2min，取下反應(yīng)板，蓋上一塊與反應(yīng)板大小相近的玻璃，置22～37℃作用2～3 h后觀察結(jié)果。

1.2.2 結(jié)果判定

在陽性對照血清效價不低于1∶1 024，陰性對照血清除第1孔允許有前滯現(xiàn)象“+”外，其余各孔均為“－”，稀釋液對照為“－”的前提下，對待檢血清進行判定，否則應(yīng)重做。待檢血清效價達到或超過1∶64為陽性。“++”為陽性終點。

2 結(jié)果

通過上述方法對427份羊血清樣本進行弓形蟲病隱性感染抗體檢測，陽性27份，陽性率6.32%(表1)。

3 討論

(1)本次調(diào)查結(jié)果表明:玉溪市農(nóng)村散養(yǎng)的山羊均存在不同程度山羊弓形蟲隱性感染情況，平均感染率達6.32%，最高縣達13.33%，最低縣也達1.56%，表明了山羊弓形蟲病感染的普遍性，也表明該病在農(nóng)村散養(yǎng)山羊發(fā)生的風險依舊存在，對該病防控應(yīng)高度重視。今后應(yīng)加強對該病的檢疫和病畜淘汰，加強中間宿主的管理，搞好環(huán)境衛(wèi)生，凈化弓形蟲病，力爭將該病的危害降到最低。

表1 玉溪市農(nóng)村散養(yǎng)山羊弓形蟲血清學(xué)檢測結(jié)果分布情況

(2)通過本次血清學(xué)調(diào)查，結(jié)合現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀，進一步證實了弓形蟲病可能是引起近期部分農(nóng)戶山羊流產(chǎn)的主要原因之一。

(3)由于弓形蟲的生活史和致病機理比較復(fù)雜，到目前為止，尚無治療弓形蟲病的理想藥物。因此，使用安全有效的疫苗接種被認為可能是預(yù)防弓形蟲病的最佳措施[4]，加強對該病的防控，做好平時防疫工作，除保持圈舍清潔外，建議經(jīng)常使用1%煤酚皂溶液、3%苛性鈉和5%草木灰等消毒。

(4)根據(jù)弓形蟲病的流行特點，定期進行家畜弓形蟲血清學(xué)檢測，檢出陽性動物要科學(xué)處理，對野生動物和易感染人群也要進行監(jiān)測，為動物防疫工作提供科學(xué)依據(jù)，同時應(yīng)加強人畜共患病防治知識的宣傳教育。

[1]汪明.獸醫(yī)寄生蟲學(xué)[M].第3版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2007:277.

[2]Liu Q，Wei P，Gao SY，et a1.Toxoplasma gondii infection in pregnant women in China[J].Trans R Soc Trop Med Hyg，2009，103(2):162 －166.

[3]許倩，華海涌.弓形蟲既往感染在孕期內(nèi)對胎兒的影響[J].中國血吸蟲病防治雜志，2010，22(2):187－188.

[4]Jongert E，Roberts CW，Gargano N，et a1.Vaccines against Toxoplasma gonii:challenges and opportunities[J].Mem Inst Oswaldo Cruz，2009，104(2):252－266.