李國華，杜杰亮，董躍武，李茂森，李四燾

(1.洱源縣鳳羽鎮(zhèn)畜牧工作組，云南 洱源 671200;2.洱源縣畜牧工作站，云南 洱源 671200;3.洱源縣茈碧湖鎮(zhèn)畜牧工作站，云南 洱源 671200)

鄧川黑白花奶牛是云南省地方品種，該品種是在20世紀(jì)50年代開始，以當(dāng)?shù)厝橛命S牛品種鄧川牛為母本，引入黑白花奶牛種公牛，開展雜交改良，經(jīng)過不斷選育而成。鄧川黑白花奶牛存欄在15萬頭左右，中國西部地區(qū)多數(shù)奶牛都含其血液成分。牛胚胎移植是一項(xiàng)新的育種技術(shù)，是快速提高良種化的很好途徑。盡管奶牛胚胎移植推廣多年，但基層畜牧獸醫(yī)部門能夠掌握該項(xiàng)技術(shù)的人員較少，特別縣、鄉(xiāng)兩級(jí)尤為突出，影響了奶牛胚胎移植的推廣應(yīng)用。為提高育種技術(shù)，開展同期發(fā)情及胚胎移植試驗(yàn)，讓基層畜牧科技人員進(jìn)一步了解奶牛胚胎移植，掌握技術(shù)要領(lǐng)，部分人員在專家的指導(dǎo)下初次完成移植。

1 受體牛及材料

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)和時(shí)間

地點(diǎn)在洱源縣鳳羽、茈碧湖、三營3個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))奶牛養(yǎng)殖區(qū)，時(shí)間2012年10月至2013年8月。

1.2 材料

CIDR栓、CIDR槍、PGF2α注射液、1%普魯卡因注射液、10 mL注射器、一次性針頭、新潔爾滅溶液、酒精棉球、塑料桶3只、毛巾2條、直檢手套、凡士林、紙巾。

1.3 受體母牛準(zhǔn)備

待選受體牛品種為鄧川黑白花奶牛，以18～24月齡的育成牛為主。體格較大，后軀發(fā)育好;膘情中等，體重350 kg以上;健康(無傳染病、生殖道疾病、肢蹄病等);性周期正常，發(fā)情表現(xiàn)良好。胎次為0，已有2次發(fā)情期未配種，生殖器官正常(包括陰道、子宮和卵巢)，乳房發(fā)育良好。在開展移植前10 d，由改良點(diǎn)技術(shù)人員調(diào)查統(tǒng)計(jì)、登記。待選受體母牛數(shù)通常是移植胚胎數(shù)的5倍，本次試驗(yàn)有159頭待選。

1.4 奶牛胚胎

由大理州家畜繁育指導(dǎo)站從外地購買34枚奶牛冷凍胚胎，品種為荷斯坦奶牛，運(yùn)輸至洱源縣奶牛改良點(diǎn)備用。

2 方法及步驟

2.1 受體母牛初步篩選

通知養(yǎng)牛戶(場)，按規(guī)定時(shí)間，把待選母牛牽拉到各改良點(diǎn)。保定后，向畜主詢問基本信息，了解年齡大小和飼養(yǎng)管理情況，評定體型、體重，檢查子宮、卵巢形狀、大小、質(zhì)地，卵巢在長2 cm、寬2 cm 、厚1 cm(直徑)以上。生殖器官正常無疾病者留用，異常者淘汰。

2.2 同期發(fā)情處理

采用CIDR栓+PGF2α法誘導(dǎo)處理，使母牛群體在相對集中時(shí)間內(nèi)發(fā)情。對每頭初選合格的母牛，用新潔爾滅溶液清洗外陰部，酒精消毒;用新潔爾滅溶液對CIDR槍消毒，將CIDR栓裝入CIDR槍，將CIDR栓置入母牛陰道，保留10～20 cm尾線。從埋植當(dāng)日起開始記時(shí)，該日為第1天。第8天時(shí)對每頭母牛注射PGF2α注射液0.6mg。第10天時(shí)取出 CIDR栓;第11～13天，每天定時(shí)觀察母牛發(fā)情情況并記錄;第18～20天每天檢查生殖道、卵巢及黃體，判定是否可作為受體母牛，以及確定移植時(shí)間。當(dāng)卵巢上的黃體大小超過1 cm(直徑)，堅(jiān)實(shí)有彈性、輪廓明顯，體積占卵巢1/3以上時(shí)，就達(dá)到移植條件。

2.3 移植方法

2.3.1 受體母牛準(zhǔn)備

母牛常在注射PGF2α后3 d開始出現(xiàn)發(fā)情癥狀，主要表現(xiàn)為鳴叫，煩躁不安，相互爬胯，陰門流出黏液，尿頻，外陰腫脹、潮紅，見紅色黏液等。發(fā)情后6～8 d(多數(shù)在第7天)卵巢上出現(xiàn)黃體，黃體明顯突出卵巢表面，頂部有冠狀開口，直徑大于1.5 cm，彈性好。保定好母牛，在受體牛百會(huì)穴硬膜外麻醉，即1～2尾椎間剪毛消毒，注射普魯卡因4mL。固定尾巴，清洗、擦拭外陰部。

2.3.2 解凍胚胎

從液氮中取出冷凍胚胎細(xì)管，在空氣中保持6 s，使液氮充分揮發(fā)，放入35℃溫水中20 s后取出，左手持細(xì)管，以右手的拇指和中指輕彈數(shù)次，把空氣排到上端，剪切口，將裝有胚胎的細(xì)管裝上移植槍，給移植槍套上硬外套，用塑料環(huán)卡緊，再套上保護(hù)膜軟外套。

2.3.3 移植

一只手戴塑料手套，伸入直腸，把握住子宮，另一只手持移植槍插入母牛陰道，順著子宮頸、子宮體、子宮角，當(dāng)移植槍頭部達(dá)到有黃體一側(cè)子宮角的上1/3～1/2處(子宮大彎)時(shí)，輕推移植槍，把胚胎移植到母牛子宮角內(nèi)，然后輕輕拔出移植槍，讓母牛休息片刻。

3 移植后飼養(yǎng)管理

3.1 登記檢查

記錄移植時(shí)間、品種、胚胎的各種信息。移植2個(gè)月后，進(jìn)行著床及妊娠檢查，確診為妊娠，每頭注射黃體酮2mL，推算預(yù)產(chǎn)期，記錄入表格。

3.2 飼養(yǎng)管理

做到規(guī)范飼養(yǎng)管理，環(huán)境清潔，飼草、飼料結(jié)構(gòu)合理，飲水要新鮮，補(bǔ)充食鹽和必要的添加劑。分群合理，防止過擠，避免機(jī)械性流產(chǎn)。長期舍飼的母牛要注意加強(qiáng)運(yùn)動(dòng)。防止在移植前后因飼料及環(huán)境改變造成的應(yīng)激反應(yīng)。

4 結(jié)果及分析

4.1 結(jié)果

對鄧川黑白花奶牛同期發(fā)情處理，移植34枚荷斯坦奶牛胚胎，妊娠16頭，妊娠率為47.1%。產(chǎn)犢11頭。本次奶牛胚胎移植順利完成，達(dá)到預(yù)期效果。

表1 同期發(fā)情結(jié)果

表2 妊娠及產(chǎn)犢結(jié)果

4.2 分析

4.2.1 發(fā)情率高

待選母牛153頭，初選96頭，再經(jīng)綜合檢查、篩選后，對60頭母牛埋植CIDR栓，44頭出現(xiàn)發(fā)情，發(fā)情率73.3%。CIDR+PGF2α法對鄧川黑白花奶牛誘導(dǎo)發(fā)情效果顯著，可成為將來同期發(fā)情胚胎移植首選方法，還可應(yīng)用于同期發(fā)情人工授精。

4.2.2 妊娠率高

對34頭鄧川黑白花奶牛移植胚胎，妊娠率為47.1%。說明此次試驗(yàn)技術(shù)方案成熟，技術(shù)路線合理。全部選用了育成母牛，減少了隱性子宮內(nèi)膜炎對胚胎附植的影響。以鄧川黑白花奶牛作受體母牛開展胚胎移植，同其它品種相比，差異不大。

4.2.3 有可供示范的良種犢牛群

產(chǎn)犢11頭，給養(yǎng)殖場(戶)增加6頭后備良種奶牛，5頭肉用公牛。這批胚胎源于純種荷斯坦奶牛，從犢牛階段就可看出乳用特征明顯，將來能有較高的產(chǎn)奶量，給當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖場提供優(yōu)秀個(gè)體實(shí)物，以示范帶動(dòng)提高良種意識(shí)。

4.2.4 給當(dāng)?shù)嘏囵B(yǎng)了技術(shù)人員

當(dāng)?shù)赜?0人參加受體母牛初選，有3人全程跟蹤觀摩，有1人在專家手把手指導(dǎo)下，獨(dú)立完成移植6枚胚胎，有2頭妊娠。當(dāng)?shù)丶夹g(shù)人員得到實(shí)踐操作，有了信心，為將來獨(dú)立承擔(dān)牛胚胎移植打下了基礎(chǔ)。

5 討論

5.1 育成牛為受體

子宮內(nèi)膜炎是影響胚胎附植及妊娠率的主要因素，一旦有炎癥，機(jī)體就把炎性分泌物和胚胎當(dāng)成異物進(jìn)行排斥。經(jīng)產(chǎn)母牛產(chǎn)后胎衣血污排不干凈，人工授精器械消毒不嚴(yán)，常發(fā)生子宮內(nèi)膜炎。另外，常發(fā)生營養(yǎng)失衡，微量元素不足，導(dǎo)致卵巢及黃體發(fā)育不良，奶牛的生殖機(jī)能異常，不利于胚胎著床及妊娠。育成牛為受體，減少子宮內(nèi)膜炎發(fā)病率，減少排斥因素。育成牛不產(chǎn)犢，不產(chǎn)奶，不易發(fā)生營養(yǎng)代謝性疾病，生殖系統(tǒng)機(jī)能正常，利于胚胎著床。

5.2 體成熟為標(biāo)準(zhǔn)

母牛性成熟時(shí)，有些器官還未發(fā)育成熟，不具備著床及妊娠條件，或妊娠后胎兒發(fā)育、母體自身發(fā)育都有影響。檢查時(shí)要看年齡，不低于18個(gè)月齡;體重不低于350 kg;子宮發(fā)育良好對稱;卵巢大小正常。每個(gè)環(huán)節(jié)都要認(rèn)真細(xì)致檢查，嚴(yán)格篩選，好中選好。待選母牛群體以1∶5最好。

5.3 同期發(fā)情效果好

對初選母牛進(jìn)行同期發(fā)情處理，在集中時(shí)限內(nèi)移植，省力省時(shí)。陰道栓 CIDR埋植，誘導(dǎo)發(fā)情，注射PGF2α溶解黃體，發(fā)情率高，發(fā)情狀態(tài)好。對于缺乏技術(shù)，異地聘請技術(shù)人員是較好的方法。

5.4 加大技術(shù)培訓(xùn)

奶牛胚胎移植工程生產(chǎn)和使用已明確分工，冷凍胚胎已批量化生產(chǎn)，商品化出售。冷凍胚胎移植技術(shù)程序相似于人工授精，不同點(diǎn)在于排卵后第6～8天(多應(yīng)用第7天)，觸摸黃體大小、質(zhì)地進(jìn)行判斷;只要對人工授精技術(shù)熟練的人員開展培訓(xùn)，就能掌握技術(shù)。鼓勵(lì)養(yǎng)殖場購買奶牛胚胎，聘請當(dāng)?shù)丶夹g(shù)人員到場進(jìn)行移植，實(shí)現(xiàn)奶牛胚胎移植技術(shù)的普及化。

5.5 自然發(fā)情成本低

以孕激素+PGF2α法進(jìn)行誘導(dǎo)同期發(fā)情，效果顯著，但移植前處理費(fèi)用高，每頭藥費(fèi)800～1 300元。如牛群數(shù)量大，有技術(shù)人員，可用自然發(fā)情，不需生殖激素處理，一旦有發(fā)情母牛應(yīng)及時(shí)檢查，及時(shí)移植，減少成本。

5.6 經(jīng)產(chǎn)母牛也可作為受體

如果受體母牛少，育成牛有特殊用途，可選擇1～4胎經(jīng)產(chǎn)母牛為受體。須防治子宮內(nèi)膜炎，開展布病監(jiān)測，及時(shí)淘汰陽性牛，凈化牛群。分娩前飼喂牛羊舔磚和營養(yǎng)舔磚，補(bǔ)充硒等礦物質(zhì)。產(chǎn)后灌服益母生化散:益母草120 g、當(dāng)歸 75 g、川芎 65 g、桃花 70 g、干姜55 g，根據(jù)情況可加減黨參、黃芪，溫水灌服，每天1次，連用3～4 d。同時(shí)子宮內(nèi)灌注宮凈康(或青霉素鈉、硫酸鏈霉素注射液、硫酸慶大霉素注射液、乳酸環(huán)丙沙星注射液、頭孢曲松鈉、鹽酸左氧氟沙星、土霉素)，或用催產(chǎn)素、氯前列醇鈉加速排胎，恢復(fù)子宮及卵巢機(jī)能。

5.7 飼養(yǎng)管理不可忽視

在移植后2個(gè)月內(nèi)，有5頭奶牛發(fā)生流產(chǎn)，這可能與飼養(yǎng)管理不當(dāng)有關(guān)。對于受體母牛，外來胚胎是異物，胚胎著床是一個(gè)復(fù)雜過程，任何刺激都會(huì)引起應(yīng)激反應(yīng)，加大排斥，導(dǎo)致胚胎流出，出現(xiàn)流產(chǎn)。移植后，除給優(yōu)質(zhì)飼料，合理搭配外，盡量避免受體母體受到驅(qū)打、碰撞、跌倒、驚嚇，圈舍潮濕，飲冷水，不要注射、投服胎動(dòng)藥。妊娠檢查后，注射黃體酮50～100mg保胎。有些妊娠母牛在2個(gè)月內(nèi)會(huì)出現(xiàn)假發(fā)情，暫不要配種，要進(jìn)一步觀察。