夏蘊瓊

(上海華源安徽錦輝制藥有限公司，安徽阜陽 236018)

丹參具有袪瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩的作用，主治冠心病、心絞痛、心煩不眠、月經(jīng)不調、閉經(jīng)、痛經(jīng)等癥［1］。其化學成分主要為脂溶性的二萜類成分和水溶性的酚酸類成分［2］。水溶性化合物主要有丹參素(Danshensu)、原兒茶醛(Procatechualdehyde)、丹酚酸(Salvianolic acid)［3］等。丹參水溶性成分檢測采用HPLC法，指標性成分主要是丹參素鈉、原兒茶醛和丹酚酸B等［4-7］。本實驗是對丹參滴注液清潔驗證殘留活性成分的檢驗方法進行確認。同時對丹參滴注液清潔驗證的取樣回收率進行確認。

1 設備、材料和試劑

1.1 設備 車間生產(chǎn)所使用的設備按照與產(chǎn)品接觸的情況，可分為三類:直接接觸產(chǎn)品的設備(濃配罐、稀配罐、配液系統(tǒng)循環(huán)管路、灌裝機貯液罐);非接觸產(chǎn)品的設備(濃配罐外表面、稀配罐外表面、配液系統(tǒng)循環(huán)管路外表面、灌裝機外表面、加塞機外表面);非直接接觸產(chǎn)品的設備(振動理塞斗、理塞軌道、加塞桿)。

1.2 檢驗儀器與試藥 檢驗儀器:安捷倫1260高效液相色譜儀(G1311C四元泵，G1314F VWD紫外檢測器，G1329B ALS自動進樣器，安捷倫液相色譜系統(tǒng)工作站);電子分析天平AE240(梅特勒)。

試藥:丹參素鈉對照品，購自上海源葉生物科技有限公司;原兒茶醛對照品，購自中國藥品生物制品檢定所;甲醇(色譜純)、冰醋酸(分析純)購自國藥集團化學試劑有限公司。

2 方法

2.1 清潔設備的確認 清潔驗證對象:直接接觸產(chǎn)品的設備。設備清潔方式:在線清潔、手動清潔。所用清潔劑:注射用水、1%氫氧化鈉溶液、1%枸櫞酸溶液。

2.2 配液系統(tǒng)及灌裝機清潔方法的確認

2.2.1 預洗 濃配系統(tǒng):經(jīng)清洗球淋洗濃配罐內(nèi)壁循環(huán)5 min后，通過罐底排污閥門排盡淋洗液。

稀配系統(tǒng)及罐裝機組:開啟循環(huán)泵，經(jīng)稀配管路、鈦棒過濾器、折疊濾芯過濾器、灌封管道循環(huán)5 min后，經(jīng)終端過濾器、儲液缸灌封機36個灌裝工位排盡淋洗液。

2.2.2 清洗 于濃配罐中注入1%氫氧化鈉溶液，開啟循環(huán)泵經(jīng)循環(huán)管路及清洗球淋洗濃配罐10 min后，泵入稀配罐，開啟循環(huán)泵，使1%氫氧化鈉溶液經(jīng)稀配管路、鈦棒過濾器、折疊濾芯過濾器、灌封管道循環(huán)10 min后，經(jīng)終端過濾器、儲液缸，灌封機36個灌裝工位排盡，再打開各排污閥，排盡罐內(nèi)、鈦棒過濾器、折疊過濾器中的1%氫氧化鈉溶液;再于濃配罐中注入5 kg枸櫞酸，配制成1%枸櫞酸溶液，開啟循環(huán)泵經(jīng)循環(huán)管路及清洗球淋洗濃配罐10 min后，泵入稀配罐;開啟稀配循環(huán)泵，使1%枸櫞酸溶液經(jīng)稀配管路、鈦棒過濾器、折疊濾芯過濾器、灌封管道循環(huán)10 min后，經(jīng)終端過濾器、儲液缸、灌封機36個灌裝工位排盡，再打開各排污閥，排盡罐內(nèi)、鈦棒過濾器、折疊過濾器中的1%枸櫞酸溶液;酸堿沖洗結束后，注入注射用水于濃配罐中，開啟循環(huán)泵經(jīng)循環(huán)管路及清洗球淋洗濃配罐10 min后，打開濃配罐和砂棒過濾器底部的排污隔膜閥，再打開排污閥，排盡罐內(nèi)及砂棒過濾器中的注射用水;注入注射用水于濃配罐中開啟循環(huán)泵，使注射用水經(jīng)清洗球淋洗濃配管路循環(huán)10 min后，泵入稀配罐，開啟循環(huán)泵，讓注射用水溶液經(jīng)稀配管路、鈦棒過濾器、折疊濾芯過濾器、灌封管道環(huán)10 min，經(jīng)終端過濾器、儲液缸循后，灌封機36個灌裝工位排盡，再打開各排污閥，排盡罐內(nèi)、鈦棒過濾器、折疊過濾器中的注射用水，此操作共3遍。配液管路系統(tǒng)和灌封機組的清潔有效期為10 h。

2.3 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇—0.5%冰醋酸溶液(5∶95)為流動相，流速1.0 mL·min-1，檢測波長為281 nm，理論板數(shù)按丹參素鈉峰計算應不低于5 000。

2.4 對照品溶液的制備 精密稱取含量為98.0%的丹參素鈉對照品14.21 mg置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 mL置50 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。得丹參素鈉濃度為55.7 mg·L-1的對照品溶液。

精密稱取原兒茶醛對照品10.76 mg置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。得濃度5.38 mg·L-1的對照品溶液。

3 清潔驗證檢驗方法與結果

3.1 線性關系考察 分別取2.4項下丹參素鈉、原兒茶醛對照品貯備液1、2、3、4、5 mL 置 10 mL 量瓶中，分別加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試液。精密量取供試液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，記錄峰面積，由溶液濃度(C)對峰面積(A)線性回歸，得回歸方程:A=13.426C-1.655，r=0.999 9，A=83.203C-0.306 6，r=0.999 9。

3.2 檢測限 取空白基線一段，計算其噪音峰高，再將丹參素鈉對照品溶液(濃度為55.70 mg·L-1)、原兒茶醛對照品溶液(濃度為5.38 mg·L-1)用水稀釋到適當?shù)臐舛冗M樣，使其峰高為噪音峰高的3倍，經(jīng)試驗，此時的進樣濃度為27.85、5.38 μg·L-1，即最低檢出量為 0.6、0.1 ng。

3.3 精密度試驗 取丹參素鈉對照品溶液、原兒茶醛對照品溶液，對低(5.57、0.538 mg·L-1)、中(16.71、1.614 mg·L-1)、高(55.70、2.690 mg·L-1)濃度的樣品溶液均分別平行測定了5次，以峰面積來考察精密度，計算低、中、高濃度組RSD分別為0.1% 、0.9%，0.1%、0.3%，0.1%、0.3%。表明儀器的精密度很好。

3.4 重復性試驗 取同一批樣品分別制成6份供試液，按含量測定的方法測定含量。結果丹參素鈉、原兒茶醛含量的平均值為8.86、1.94 mg·L-1，RSD為0.3%、1.2%。

3.5 準確度試驗 取已知丹參素鈉含量為442.80 mg·L-1、原兒茶醛含量為94.86 mg·L-1的丹參滴注液樣品1份，加入9份濃度約為55.70 mg·L-1的丹參素鈉對照品溶液、濃度約為5.38 mg·L-1的原兒茶醛對照品溶液，分別混合均勻作為供試液，按丹參滴注液成品中丹參素鈉含量檢驗方法檢驗，取此供試液進樣2次。制備兩份供試液，檢測丹參素鈉、原兒茶醛的含量分別為94.60、14.29、94.43、14.36 mg·L-1，平均回收率為100.21%、99.94%。

3.6 樣品的檢測 丹參素鈉對照品溶液的制備:精密稱取丹參素鈉對照品(含量98.0%)0.012 16 g，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，從中精密量取2 mL置25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL中含丹參素鈉為9.53 μg的對照品溶液。

原兒茶醛對照品溶液的制備:精密稱取原兒茶醛對照品0.013 84 g，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，從中精密量取5 mL置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL中含原兒茶醛6.92 μg的對照品溶液。

表1 清潔水中丹參素鈉和原兒茶醛的含量

測定法:分別精密吸取上述兩種對照品溶液與清潔水各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。

按上述色譜條件測定方法，測定了清潔水中丹參素鈉和原兒茶醛的含量，結果見表1。

3.7 擦拭取樣方法及取樣回收率 棉簽擦拭取樣:取三塊與設備類似的潔凈的316L不銹鋼板，分別在鋼板上劃出5 cm×5 cm的區(qū)域，用移液管精密量取丹參素鈉、原兒茶醛對照品溶液(濃度約為100 mg·L-1)1 mL，將其盡量均勻地涂布在5 cm×5 cm區(qū)域內(nèi)，晾干。取一支潔凈的棉簽，用注射用水充分潤濕，握住棉簽柄，以30°角與取樣表面接觸，用力使其稍彎曲，呈Z字形平穩(wěn)而緩慢的擦拭取樣表面。在向前移動的同時將其翻轉從一邊移到另一邊，擦拭過程應覆蓋整個表面，翻轉棉簽，讓另一面也進行擦拭，但與前次擦拭移動方向垂直，如圖1所示。

擦拭完成后，將棉簽頭剪下放入潔凈瓶中，往瓶中精密加入25 mL注射用水，超聲15 min，取此溶液為供試液，按丹參滴注液成品中丹參素鈉、原兒茶醛含量檢驗方法檢測丹參素鈉、原兒茶醛的含量。計算回收率，丹參素鈉及原兒茶醛的取樣回收率均不得低于80%。

圖1 擦拭示意圖

4 討論

丹參滴注液為靜脈滴注，生產(chǎn)結束后清潔劑為1%氫氧化鈉溶液、1%枸櫞酸溶液和注射用水，清潔后殘留物限度≤10 mg·L-1［8-11］。本實驗結果表明，該清潔方法能夠滿足丹參滴注液生產(chǎn)結束后的清潔要求，該實驗條件能夠滿足丹參滴注液清潔驗證殘留物檢測;結合TOC和電導率的檢測，能夠準確有效的判斷丹參滴注液清潔驗證的有效性、可靠性、重現(xiàn)性。

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