張躍飛，高英杰，郭姍姍，時(shí)宇靜，代志，崔曉蘭

(1.華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司 研發(fā)中心，深圳 518110；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 中藥研究所，北京 100700)

重大新藥創(chuàng)制專(zhuān)項(xiàng)基金項(xiàng)目(2012ZX09201201-001)

*

張躍飛，博士，研究方向：中藥藥理毒理；E-mail：zyf04@999.com.cn

不同工藝感冒靈流膏治療流感體內(nèi)藥效學(xué)試驗(yàn)研究△

張躍飛1*，高英杰2，郭姍姍2，時(shí)宇靜2，代志1，崔曉蘭2

(1.華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司 研發(fā)中心，深圳 518110；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 中藥研究所，北京 100700)

目的采用甲型H1N1流感病毒感染小鼠肺炎模型評(píng)價(jià)不同工藝感冒靈流膏對(duì)流感的治療作用，為臨床治療流感的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。方法采用甲型H1N1流感病毒FM1和PR8株分別感染正常動(dòng)物造成肺炎模型，新工藝大、中、小劑量分別為1.8，0.9，0.45 g生藥·kg-1·d-1(分別相當(dāng)于人臨床用藥量的2倍、等倍和1/2倍)，原工藝小鼠劑量為1.34 g生藥·kg-1·d-1(相當(dāng)于人臨床用藥量的2倍)，醇沉沉淀小鼠用量為0.48 g生藥·kg-1·d-1(相當(dāng)于人臨床用藥量的2倍)，感染當(dāng)天給藥4 d，觀察不同工藝感冒靈流膏對(duì)肺指數(shù)、死亡率、死亡保護(hù)率、平均存活天數(shù)和生命延長(zhǎng)率的影響，并測(cè)定血清中免疫球蛋白M(IgM)含量以及肺組織中病毒載量和γ干擾素(IFN-γ)含量，進(jìn)行機(jī)理的探索性研究。結(jié)果FM1和PR8株感染正常小鼠造成肺炎模型，感染當(dāng)天給予感冒靈浸膏治療4 d后，F(xiàn)M1株新工藝大、中劑量組和原工藝組肺指數(shù)均有明顯降低(P<0.05、P<0.01)；PR8株新工藝大劑量組和原工藝組肺指數(shù)明顯降低(P<0.05)；FM1株新工藝大、中劑量組和原工藝組均可顯著降低小鼠肺組織中病毒載量，與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；各工藝藥物對(duì)FM1模型小鼠血清IFN-γ含量和IgM含量無(wú)明顯影響(P>0.05)。對(duì)PR8株模型新工藝大、中、小、原工藝和醇沉部分各給藥組均可提高肺組織IFN-γ含量(P<0.05，P<0.01)。新工藝大、中、小3個(gè)劑量和原工藝組可明顯減少FM1和PR8株感染動(dòng)物的死亡數(shù)，并可明顯延長(zhǎng)動(dòng)物存活天數(shù)(P<0.05、P<0.01)；醇沉沉淀對(duì)PR8株模型有一定程度延長(zhǎng)動(dòng)物存活天數(shù)的作用(P<0.05)。結(jié)論新工藝及原工藝制劑對(duì)FM1和PR8株感染小鼠肺炎均有明顯治療作用；醇沉部分也有一定的治療作用。

感冒靈流膏；工藝；流感；體內(nèi)藥效學(xué)

感冒靈為已上市的中西藥復(fù)方制劑，功能主治為解熱鎮(zhèn)痛，用于感冒引起的頭痛，發(fā)熱，鼻塞，流涕，咽痛等?，F(xiàn)行工藝中野菊花、金盞銀盤(pán)、三叉苦、崗梅4味中藥采取水提醇沉工藝，該品種二次開(kāi)發(fā)過(guò)程中，擬進(jìn)行工藝變更，新工藝取消醇沉過(guò)程。為評(píng)價(jià)感冒靈新工藝流膏對(duì)流感的治療作用，我們?cè)O(shè)計(jì)了相應(yīng)的藥效學(xué)試驗(yàn)，為增加功能主治的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 受試藥品

將三叉苦等4味中藥按處方配比，加水煎煮2次，得感冒靈提取液(批號(hào)：20100115)。

感冒靈原工藝流膏(取感冒靈提取液，批號(hào)20100115，濃縮，醇沉，取上清液，濃縮成流膏，按處方比例加入3味化學(xué)藥，混合均勻，即得)，批號(hào)：20100115Y，含量：9.95 g生藥·g-1，性狀：深棕色浸膏。感冒靈新工藝流膏(取感冒靈提取液，批號(hào)20100115，濃縮成流膏，按處方比例加入3味化學(xué)藥，混合均勻，即得)，批號(hào)：20100115X，含量：7.29 g生藥·g-1，性狀：深棕色流膏。感冒靈醇沉沉淀(取感冒靈原工藝醇沉后產(chǎn)生的沉淀)，批號(hào)：20100115C，含量37.49 g生藥·g-1，性狀：深棕色膏狀物。儲(chǔ)存條件：4 ℃冰箱。

1.2 陽(yáng)性對(duì)照藥

磷酸奧司他韋膠囊(商品名：達(dá)菲，瑞士巴塞爾豪夫邁·羅氏有限公司生產(chǎn)，上海羅氏制藥有限公司分裝，批號(hào)：B1212，分裝批號(hào)：SH0034)；連花清瘟膠囊(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：091182)。

1.3 劑量設(shè)計(jì)

1.3.1 原工藝流膏 原工藝制備的中藥流膏，按照處方比例，與對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、馬來(lái)酸氯苯那敏混合，原工藝小鼠劑量為1.34 g生藥·kg-1·d-1，相當(dāng)于人臨床等效量的2倍。

1.3.2 新工藝流膏 新工藝制備中藥流膏，按照處方比例，與對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、馬來(lái)酸氯苯那敏混合，換算成小鼠臨床等倍量，實(shí)驗(yàn)時(shí)采用以上藥物混合后2倍、等倍、1/2倍劑量，分別作為新工藝大、中、小劑量。新工藝大、中、小劑量分別為1.8 g生藥·kg-1·d-1、0.9 g生藥·kg-1·d-1、0.45 g生藥·kg-1·d-1(分別相當(dāng)于人臨床用藥量的2倍、等倍和1/2倍)。

1.3.3 醇沉沉淀 醇沉沉淀的小鼠用量為0.48 g生藥·kg-1·d-1，相當(dāng)于人臨床等效量的2倍。

1.3.4 陽(yáng)性藥 達(dá)菲、連花清瘟膠囊換算成小鼠等效劑量。試驗(yàn)時(shí)以上各藥物按0.2 mL·(10 g)-1灌胃給藥。

1.4 動(dòng)物

ICR小鼠(SPF/VAF級(jí))，體重(14±1)g，雌雄不限。由北京維通利華試驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物許可證：SCXK(京)2006-0009。

1.5 病毒株

甲型H1N1流感病毒鼠肺適應(yīng)株(FM/1/47株和PR/8/34株)，購(gòu)自中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制研究所，由中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所ABSL-2試驗(yàn)室傳代，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 試劑

乙醚(北京試劑公司，批號(hào)：20090707)；小鼠γ干擾素酶(IFN-γ)酶聯(lián)反應(yīng)試劑盒(美國(guó)R&D公司，生產(chǎn)批號(hào)：08/2010)；小鼠IgM酶聯(lián)反應(yīng)試劑盒(美國(guó)R&D公司，生產(chǎn)批號(hào)：09/2010)；PCR檢測(cè)試劑：一步法熒光染料RT-PCR試劑盒(TaKaRa公司，貨號(hào)：DRR086A)；Trizol提取總RNA試劑(Invitrogen公司)；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)試劑盒、TaqDNA聚合酶、dNTP、DNA marker(Takara公司)；GAPDH、H1N1上下游引物均為美國(guó)invitrogen(上海)英駿生物技術(shù)有限公司合成；三氯甲烷、異丙醇、99%乙醇均為分析純。

1.7 儀器

Applied Biosystems 7500型定量PCR儀(美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司)；HC-3018R高速冷凍離心機(jī)(中科中佳公司)；RT-6000酶標(biāo)儀(深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司)；MSC1.8 A2型生物安全柜(德國(guó)Thermo公司)；YP/0001動(dòng)物體重電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)；AR1140動(dòng)物臟器電子天平(美國(guó)Chaus)。IVC小鼠飼養(yǎng)籠(蘇州教學(xué)籠具廠)。

1.8 試驗(yàn)場(chǎng)所

中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所ABSL-2生物安全實(shí)驗(yàn)室。

2 方法

2.1 治療給藥對(duì)流感病毒感染正常小鼠肺炎模型的作用(肺指數(shù))

取小鼠按體重等級(jí)隨機(jī)分為9組，分別為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，達(dá)菲對(duì)照組，連花清瘟膠囊對(duì)照組，新工藝大、中、小3個(gè)劑量組，原工藝組，醇沉沉淀組，每組10只。除正常對(duì)照組外，將小鼠用乙醚輕度麻醉，以15個(gè)LD50流感病毒液(FM1和PR8株)滴鼻感染，每只35 μL。感染當(dāng)天開(kāi)始每次按0.2 mL·(10g)-1體重灌胃給藥，每天1次，連續(xù)4 d，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組在同等條件下蒸餾水灌胃。第5天稱(chēng)重后摘眼球取血待測(cè)血清中細(xì)胞因子含量(IgM)，然后解剖稱(chēng)肺重，計(jì)算肺指數(shù)及肺指數(shù)抑制率，肺組織留存待測(cè)病毒載量和細(xì)胞因子含量(IFN-γ)。結(jié)果采用單因素方差進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。肺指數(shù)及肺指數(shù)抑制率計(jì)算公式如下：

肺指數(shù)=肺濕重(g)/體重(g)

肺指數(shù)抑制率=(模型對(duì)照組肺重-實(shí)驗(yàn)組肺重)/(模型對(duì)照組肺重-正常對(duì)照組肺重)×100%

2.2 治療給藥對(duì)流感病毒感染正常小鼠肺炎模型的死亡保護(hù)作用

取小鼠按體重等級(jí)隨機(jī)分為8組，分別為模型對(duì)照組，達(dá)菲對(duì)照組，連花清瘟膠囊對(duì)照組，新工藝大、中、小3個(gè)劑量組，原工藝組，醇沉沉淀組，每組20只。各組小鼠用乙醚輕度麻醉，以15個(gè)LD50流感病毒液(FM1和PR8株)滴鼻感染，每只35 μL。感染當(dāng)天開(kāi)始給藥，每次按0.2 mL·(10 g)-1體重灌胃，每天1次，連續(xù)4 d，模型對(duì)照組在同等條件下蒸餾水灌胃。觀察感染后16 d動(dòng)物的死亡情況，計(jì)算死亡率、死亡保護(hù)率、平均存活天數(shù)和生命延長(zhǎng)率。死亡保護(hù)率的比較采用卡方檢驗(yàn)，平均存活天數(shù)的組間比較采用單因素方差進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。死亡率、死亡保護(hù)率、生命延長(zhǎng)率計(jì)算公式如下：

死亡率=死亡數(shù)/動(dòng)物總數(shù)×100%

死亡保護(hù)率=(模型對(duì)照組死亡率-實(shí)驗(yàn)組死亡率)/模型對(duì)照組死亡率×100%

生命延長(zhǎng)率=(實(shí)驗(yàn)組存活天數(shù)-模型對(duì)照組存活天數(shù))/模型對(duì)照組存活天數(shù)×100%

2.3 肺組織中病毒載量的測(cè)定

2.3.1 引物設(shè)計(jì)與合成 針對(duì)流感病毒(H1N1)基因序列的上下游引物分別是：5′-GACCAATCCTGTCAC CTCTGAC-3′和5′-GGGCATTTGGACAAACGTCTACG-3′；針對(duì)內(nèi)參基因GAPDH(監(jiān)控總RNA的使用量，以消除不同樣本間加樣導(dǎo)致的誤差)基因序列的引物分別是：5′-GGTGAAGGTCGGTGTGAACG-3′和5′-CT CGCTCCTGGAAGATGGTG-3′。

2.3.2 Real-time RT-PCR擴(kuò)增 使用TRIzol試劑提取肺組織中的RNA后，分別用上述H1N1和GAPDH引物進(jìn)行一步法實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)，反應(yīng)體積為20 μL，反應(yīng)體系含樣本RNA 2μL，2×One Ste PSYBR RT-PCR Buffer 10 μL，PrimeScript 1 Ste PEnzyme Mix 2 0.8 μL，10 μmol·L-1引物各0.8 μL。反應(yīng)條件為：42 ℃滅活5 min，95 ℃變性10 sec，95 ℃退火5 sec，60 ℃延伸34 sec，共40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行熔解曲線(xiàn)分析，以鑒定PCR產(chǎn)物的特異性。使用Sequence Detection System軟件分析PCR過(guò)程各檢測(cè)樣本的Ct(Threshold of cycle)值。

2.3.3 結(jié)果計(jì)算方法及統(tǒng)計(jì)方法 本實(shí)驗(yàn)使用相對(duì)定量的方法，以GAPDH作為內(nèi)對(duì)照，選擇一個(gè)樣品(Con)作為Calibrator，計(jì)算方法如下：

Con△Ct=Con Ct-Con GAPDH Ct

樣本△Ct=樣本Ct-樣本GAPDH Ct

樣本△△Ct=樣本△Ct-Con△Ct

相對(duì)含量的變化=2-△△Ct×100%(2-△△Ct是各處理組基因表達(dá)相對(duì)Calibrator的倍數(shù)改變)

病毒載量抑制率=(模型對(duì)照組病毒載量-實(shí)驗(yàn)組病毒載量)/模型對(duì)照組病毒載量×100%

結(jié)果采用組間t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2.4 IgM和IFN-γ含量測(cè)定方法

各組小鼠血清按照兩步雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa)測(cè)定IgM的含量；各組肺組織用PBS進(jìn)行勻漿，離心后取上清液，然后按照Elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)IFN-γ的含量。結(jié)果采用組間t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

3 結(jié)果

3.1 治療給藥對(duì)流感病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響

采用甲型H1N1流感病毒FM1和PR8兩株病毒感染正常小鼠后，小鼠肺指數(shù)明顯增高，與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；感染當(dāng)天開(kāi)始給予感冒靈治療4 d后，F(xiàn)M1株新工藝大、中劑量組和原工藝組肺指數(shù)均有明顯降低，與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)；PR8株新工藝大劑量組和原工藝組肺指數(shù)明顯降低，與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 治療給藥對(duì)流感病毒感染正常小鼠肺炎模型的作用(肺指數(shù))

注：與正常對(duì)照組比較，##P<0.01；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01；下同

3.2 治療給藥對(duì)流感病毒感染致小鼠死亡的保護(hù)作用

采用甲型H1N1流感病毒FM1株病毒感染正常小鼠2周內(nèi)，模型組動(dòng)物死亡率為100%，平均存活天數(shù)為9.00 d；感染當(dāng)天治療性給予感冒靈，連續(xù)4 d，新工藝大、中、小3個(gè)劑量組動(dòng)物的死亡數(shù)明顯減少，死亡率分別為55.00%、65.00%和60.00%，死亡保護(hù)率分別為45.00%、35.00%和40.00%，3個(gè)劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)；原工藝組動(dòng)物的死亡數(shù)明顯減少，死亡率為50.00%，死亡保護(hù)率為50.00%，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。新工藝3個(gè)劑量組和原工藝組均可延長(zhǎng)動(dòng)物平均存活天數(shù)，分別為11.75，11.80，11.45，11.80 d，且與模型組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表2。

采用甲型H1N1流感病毒PR8株病毒感染正常小鼠2周內(nèi)，模型組動(dòng)物死亡率為95%，平均存活天數(shù)為8.15 d；感染當(dāng)天治療性給予感冒靈連續(xù)4 d，新工藝大、中、小劑量組和原工藝組動(dòng)物的死亡數(shù)明顯降低，死亡率分別為55.00%、65.00%、60.00%和50.00%，死亡保護(hù)率分別為42.11%、31.58%、36.84%和47.37%，與模型對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)；新工藝3個(gè)劑量組、原工藝組和醇沉沉淀組動(dòng)物平均存活天數(shù)分別為11.50，11.30，11.45，12.05，10.35 d，與模型對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01、P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 治療給藥對(duì)流感病毒FM1株感染正常小鼠肺炎模型的死亡保護(hù)作用

表3 治療給藥對(duì)流感病毒PR8株感染正常小鼠模型的死亡保護(hù)作用

3.3 治療給藥對(duì)流感病毒FM1株感染正常小鼠肺組織中病毒載量的影響

采用甲型H1N1流感病毒FM1株病毒感染小鼠后，肺組織中病毒基因出現(xiàn)高表達(dá)；新工藝大、中劑量組和原工藝組治療4 d后均有降低病毒載量的作用，抑制率分別為99.79%、99.60%和99.70%，與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表4。

3.4 治療給藥對(duì)流感病毒感染正常小鼠肺組織中IFN-γ和血清中IgM的影響

采用甲型H1N1流感病毒FM1株病毒感染正常小鼠造成肺炎模型，當(dāng)天給予感冒靈新工藝、原工藝和醇沉沉淀治療4 d，各工藝藥物對(duì)小鼠肺組織IFN-γ含量和血清IgM含量無(wú)明顯影響。結(jié)果見(jiàn)表5。

采用甲型H1N1流感病毒PR8株病毒感染正常小鼠造成肺炎模型，模型對(duì)照組肺組織IFN-γ和血清IgM含量與正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；當(dāng)天給予感冒靈新工藝、原工藝和醇沉沉淀治療4 d，新工藝大、中、小劑量組，原工藝和醇沉沉淀組均可提高肺組織IFN-γ含量，與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)；各工藝組對(duì)小鼠血清IgM含量無(wú)明顯影響(P>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表6。

表4 治療給藥對(duì)流感病毒FM1株感染小鼠肺組織中病毒載量的影響

表5 治療給藥對(duì)流感病毒FM1株感染正常小鼠細(xì)胞因子含量的影響

表6 治療給藥對(duì)流感病毒PR8株感染正常小鼠細(xì)胞因子含量的影響

4 討論

感冒靈為中西藥復(fù)方制劑，其中有野菊花、金盞銀盤(pán)、三叉苦、崗梅4味中藥，中藥水提取物中常含有一定量的高分子物質(zhì)，這些物質(zhì)多為淀粉、蛋白質(zhì)及多糖類(lèi)成分，傳統(tǒng)中藥制劑工藝中常將其視為無(wú)效成分，采用乙醇沉淀的方法將其去除。感冒靈顆?，F(xiàn)行生產(chǎn)工藝即采用加乙醇至含醇量60%～65%的醇沉工序。

近年來(lái)，隨著人們對(duì)多糖類(lèi)物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)及生物功能認(rèn)識(shí)的加深，證實(shí)了這類(lèi)植物細(xì)胞壁骨架成分具有多種生理活性，如：抗氧化、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖等。感冒靈顆粒中藥水提取物醇沉淀丟棄物中所包含的多糖類(lèi)物質(zhì)可能具有提高感冒患者免疫力的作用，能夠輔助制劑中的小分子化學(xué)成分發(fā)揮最佳療效。因此，我們對(duì)感冒靈原工藝、新工藝(取消醇沉)及醇沉沉淀的體內(nèi)抗流感病毒作用進(jìn)行了研究，結(jié)果表明原工藝與新工藝流膏對(duì)FM1和PR8株感染小鼠肺炎均有明顯治療作用，二者作用強(qiáng)度相當(dāng)；用醇沉部分治療也可一定程度上降低模型動(dòng)物的死亡數(shù)及延長(zhǎng)動(dòng)物的存活天數(shù)。機(jī)理研究中，給予感冒靈各工藝浸膏治療4 d，新工藝及原工藝可降低FM1株流感病毒感染正常小鼠肺組織中病毒載量；新工藝、原工藝及醇沉部分均可提高PR8株流感病毒感染正常小鼠肺組織IFN-γ含量；對(duì)FM1株流感病毒感染正常小鼠肺組織IFN-γ和血清IgM無(wú)明顯影響。該試驗(yàn)為感冒靈工藝改進(jìn)及增加抗流感病毒適應(yīng)癥提供了依據(jù)。

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PharmacodynamicExperimentinvivoofGanmaolingExtractumwithDifferentProcessonTreatmentofInfluenza

ZHANGYuefei1*，GAOYingjie2，GUOShanshan2，SHIYujing2，DAIZhi1，CUIXiaolan2

(1.R&DDepartment，ChinaResourcesSanjiuMedical&PharmaceuticalCo.，Ltd.，Shenzhen518110，China；2.InstituteofChineseMateriaMedica，ChinaAcademyofChineseMedicalSciences，Beijing100700，China)

Objective：Pneumonia model infected with influenza virus H1N1 was adopted to evaluate the efficacy of in vivo protection of Ganmaoling extractum with different process.Experimental basis for the treatment of influenza for clinical application was provided.MethodsPneumonia model was set up by infection of normal mice with influenza virus FM1 and PR8 of H1N1 separately.Large，moderate，and small doses of the extractum with new process were 1.8 g crude drug/kg/day，0.9 g crude drug/kg/day，and 0.45 g crude drug/kg/day respectively，which amounted to twice，once，and half dosage in clinic.Dosage of the extractum with old process was 1.34 g crude drug/kg/day，which amounted to twice of the dosage in clinic.Dosage of the extractum with alcohol sedimentation technique was 0.48 g crude drug/kg/day equivalent to twice dosage in clinic.Different extractum were administered for 4 days after the administration of virus，and the lung index，death rate，protection rate of death，and life extension rate were observed.Immune globulin M(IgM)level in blood serum，viral load and γ interferon(IFN-γ)level in lung tissue were determined to explore the mechanism.ResultsIn the experimental research in pneumonia models of normal mice，after 4 days of treatment administration with Ganmaoling extractum，the lung index of animal of FM1 in large and moderate dosage with new process group and in old process group were decreased apparently(P<0.05，P<0.01).The lung index of animal in large dosage with new process group and old process group of PR8 were decreased apparently(P<0.05).Virus load in lung tissue of animal in large and moderate dosage with new process group and old process group of FM1 had significant differences compared with the model group(P<0.01).IFN-γ level and IgM level in blood serum of animal in all groups of FM1 had no obvious effect(P>0.05).IFN-γ level in lung tissue of animal in all groups of PR8 was increased(P<0.05，P<0.01).Deaths of animal in large and moderate dosage group with new process and old process group of FM1 and PR8 were decreased apparently，furthermore，survival days were prolonged(P<0.05，P<0.01).Survival days of animal in alcohol sedimentation technique group of PR8 were prolonged in some extent(P<0.05).ConclusionGanmaoling extractum with new process and old process had therapeutical effect to pneumonia mice infected with influenza virus FM1 and PR8.Alcohol precipitation part had certain therapeutical effect.

Ganmaoling Extractum；Process；Influenza；Pharmacodynamic Experiment in vivo

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.06.008

2013-09-24)