陳 必 郭賽群 楊佩嫻

國(guó)外報(bào)道原發(fā)性閉經(jīng)患病率約為5% ～10%;國(guó)內(nèi)有資料顯示原發(fā)性閉經(jīng)發(fā)病率逐年上升，已達(dá)10%左右，其中25歲以下患者比例達(dá)25%［1］;且國(guó)內(nèi)外均發(fā)現(xiàn)原發(fā)性閉經(jīng)都有發(fā)病年輕化的傾向［2］。因此原發(fā)性閉經(jīng)的病因及發(fā)病機(jī)制有待進(jìn)一步研究。已有研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性閉經(jīng)患者的CD8+T亞群數(shù)量明顯升高［3－4］，且升高的程度與血清總睪酮(Tor)及雌二醇(E2)的水平含量呈相關(guān)性，這說明CD8+T亞群與原發(fā)性閉經(jīng)患者的性激素代謝有密切關(guān)系。但CD8+T細(xì)胞分為CD8+CD28+殺傷性及CD8+CD28－抑制性兩個(gè)亞群，且兩者構(gòu)成一個(gè)平衡，究竟原發(fā)性閉經(jīng)與該平衡關(guān)系如何，與且該平衡與性激素是否存在相關(guān)性?目前均缺乏探討。以此為創(chuàng)新點(diǎn)，筆者對(duì)原發(fā)性垂體促性腺功能低下導(dǎo)致閉經(jīng)的患者進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)該類患者外周血CD8+CD28－抑制T細(xì)胞含量升高，后者與睪酮及促黃體生成素含量呈相關(guān)性，具體過程如下。

1 資料與方法

1.1 患者資料

選取2009年1月～2011年1月間我院婦產(chǎn)科的原發(fā)性閉經(jīng)患者作為觀察對(duì)象。采用國(guó)際原發(fā)性閉經(jīng)協(xié)作組結(jié)合2006年中華醫(yī)學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科學(xué)分所推薦的診斷方案及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，共入選原發(fā)性垂體促性腺功能低下導(dǎo)致閉經(jīng)的患者32例，并選取32名同齡的健康女性作為對(duì)照組，兩組的年齡無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)

以上觀察對(duì)象均于清晨空腹抽取肘靜脈血［5］，隨后使用Beckman Coulter Cell多色流式細(xì)胞儀，分別檢測(cè)CD28分別為陽(yáng)性及陰性的CD8+T所占的百分比，分別代表CD8+CD28+殺傷性T細(xì)胞及CD8+CD28－抑制性T細(xì)胞的數(shù)量;同法采用多色流式細(xì)胞儀，檢測(cè)以上兩類細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子IFN－γ及IL－4的百分的含量［6］。

1.3 性激素水平測(cè)定

使用放射免疫法檢測(cè)外周血清E2、Tor、FSH及LH含量［7］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 CD8+CD28+與 D8+CD28－T 細(xì)胞檢測(cè)

兩組的CD8+CD28+與D8+CD28－T細(xì)胞及其細(xì)胞因子，均呈顯著梯度變化，其中CD8+CD28+T細(xì)胞及IFN－γ均以健康組含量最高，兩組之間任意兩者均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;而D8+CD28－T細(xì)胞及IL－4的情況相反，以健康組最低(表1及圖1)。

表1 兩組CD8+CD28+與D8+CD28－T細(xì)胞及其胞內(nèi)細(xì)胞因子的含量(±s)

表1 兩組CD8+CD28+與D8+CD28－T細(xì)胞及其胞內(nèi)細(xì)胞因子的含量(±s)

注:與健康組比較，1)p＜0.05

分組CD8+CD28+T細(xì)胞CD8+CD28－T細(xì)胞IFN－γIL－4健康組13.26 ±4.21 16.37 ±6.18 9.82 ±4.91 15.38 ±5.47原發(fā)性閉經(jīng)患者 7.91±1.731)23.92±9.921) 4.01±2.871) 26.72±10.911)t 3.161 2.525 2.819 4.882 p 0.000 0.012 0.006 0.002

圖1 兩組CD8+CD28+與D8+CD28－T細(xì)胞流式細(xì)胞圖

2.2 激素含量比較

與健康組比較，原發(fā)性閉經(jīng)組患者的E2顯著降低(P=0.000)，而 Tor及 LH則顯著高于健康組(P=0.008及0.010)，但兩組的FSH無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.066)，見表2。

表2 兩組性激素含量比較(±s)

表2 兩組性激素含量比較(±s)

分組 E2(pg/ml)Tor(nmol/L)FSH(IU/L)LH(IU/L)健康組165.82 ±53.28 2.24 ±0.87 6.65 ±2.97 9.39 ±3.92原發(fā)性閉經(jīng) 71.38 ±26.34 3.18 ±0.93 9.59 ±3.13 18.28 ±7.28 t 10.382 －3.174 －1.022 －3.762 p 0.000 0.008 0.066 0.010

2.3 相關(guān)性分析

通過Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn):①CD8+CD28+T細(xì)胞與IFN－γ呈正相關(guān)性(P=0.016);②CD8+CD28－T細(xì)胞與IL－4、Tor及 LH三者均呈正相關(guān)性(P=0.021、0.023及0.016);③CD8+CD28+T細(xì)胞與CD8+CD28－T細(xì)胞呈顯著負(fù)相關(guān)性(P=0.000)。

3 討論

CD8+T細(xì)胞是重要的T細(xì)胞亞群。根據(jù)表達(dá)細(xì)胞因子的不同，可將CD8+T細(xì)胞分為Tc1及Tc2兩個(gè)亞群，其中Tc1以表達(dá)IL－2及IFN－γ為主，以介導(dǎo)細(xì)胞免疫為主;而Tc2以表達(dá)IL－4、IL－8等細(xì)胞因子為主，以介導(dǎo)體液免疫為主。本研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性垂體促性腺功能低下導(dǎo)致的原發(fā)性閉經(jīng)患者的CD8+CD28+T細(xì)胞及IFN－γ含量降低，而CD8+CD28－T細(xì)胞及IL－4含量升高，本結(jié)果與宋玉霞［8］報(bào)道的卵巢早衰(POF)患者T細(xì)胞亞群變化有類似之處;該研究發(fā)現(xiàn)卵巢早衰致閉經(jīng)患者的CD8+T細(xì)胞顯著升高，并且發(fā)現(xiàn)POF患者外周血出現(xiàn)卵巢自身抗體(AoAb)滴度升高，提示與體液免疫相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性垂體促性腺功能低下閉經(jīng)患者CD8+T細(xì)胞免疫平衡向CD8+CD28－抑制性T細(xì)胞傾斜，由于IL－4屬于Tc2類細(xì)胞因子，所以該類免疫失衡屬于體液免疫性質(zhì)，與上述報(bào)道有一致性。由于體液免疫與內(nèi)分泌激素代謝存在極為重要的聯(lián)系，就兩者的聯(lián)系進(jìn)一步討論如下。

性激素是包含卵巢在內(nèi)的性腺分泌的重要蛋白質(zhì)，有研究發(fā)現(xiàn)閉經(jīng)患者血清17β－E2水平明顯下降、T明顯升高、PRL值有所下降，說明性激素代謝紊亂是閉經(jīng)的重要表現(xiàn)［9］。由于閉經(jīng)所涉及的激素種類較多，本研究選取 E2、Tor、FSH及LH作為性激素的代表進(jìn)行觀察。我們發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性閉經(jīng)組患者的E2顯著降低，而Tor及LH則顯著升高，但兩組的FSH無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這與李瀅［10］的報(bào)道的閉經(jīng)患者E2降低、LH升高大體一致。本研究結(jié)果提示該類患者雌激素水平明顯缺乏或不足，而雄激素含量升高，符合典型的閉經(jīng)患者激素代謝特征［11］;但本研究與李瀅報(bào)道有所不同的是，本研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性垂體促性腺功能低下閉經(jīng)患者Tor升高，而李瀅發(fā)現(xiàn)Tor與對(duì)照組無明顯差異，可能是該研究入選的患者既包括原發(fā)性閉經(jīng)患者，又包括繼發(fā)性閉經(jīng)患者，而本研究對(duì)象均屬于原發(fā)性垂體促性腺功能低下閉經(jīng)患者，這說明了Tor可能是鑒別不同閉經(jīng)病因的重要指標(biāo)，是原發(fā)性閉經(jīng)患者的一個(gè)重要性激素代謝特征。

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，Tor及LH與CD8+CD28－T細(xì)胞及IL－4四者存在顯著正相關(guān)性，亦即表現(xiàn)為四者呈平行升高，這預(yù)示Tor及LH與閉經(jīng)患者的免疫學(xué)異常關(guān)系更為密切，故Tor及LH臨床意義更為顯著，因此我們認(rèn)為，Tor及LH的水平可以作為該類閉經(jīng)患者免疫學(xué)治療療效的重要內(nèi)分泌學(xué)評(píng)價(jià)指標(biāo)，而IL－4可作為重要的免疫學(xué)評(píng)價(jià)指標(biāo)。

綜合上述，本研究在一定程度上從免疫學(xué)及內(nèi)分泌學(xué)角度闡述了原發(fā)性閉經(jīng)患者免疫失衡與性激素代謝紊亂的關(guān)系，并發(fā)現(xiàn)CD8+CD28+T可能是原發(fā)性閉經(jīng)患者治療的一個(gè)靶細(xì)胞，且該類免疫失衡以Tc2類為主，其機(jī)制可能是CD8+CD28+T過度表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞抑制功能過強(qiáng)，IL－4分泌過多，間接導(dǎo)致Tor及LH過度分泌增加，導(dǎo)致內(nèi)分泌代謝紊亂，最終導(dǎo)致閉經(jīng)。以上結(jié)果可為原發(fā)性垂體促性腺功能低下閉經(jīng)患者免疫調(diào)節(jié)治療提供一定的依據(jù)，筆者將在后續(xù)的研究中進(jìn)一步該T細(xì)胞平衡與其它激素代謝的相關(guān)性。

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