顧 瓊 ，焦 揚(yáng) ，趙 川 ，唐 鋮 ，唐生安 ，段宏泉 ，，周 晶

（1.天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300070；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部,天津300193；3.天津醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中心，天津300070）

海綿是天然產(chǎn)物的寶庫(kù)，從海洋中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多與陸地植物具有顯著結(jié)構(gòu)差異的新穎獨(dú)特并具有良好生物學(xué)活性的化合物。日本、美國(guó)和英國(guó)等國(guó)家已在海洋生物中發(fā)現(xiàn)并提取了3 000多種具有醫(yī)用價(jià)值的生物活性物質(zhì)，在獲取抗腫瘤、抗炎、抗心血管、抗菌和抗病毒藥物方面已取得了明顯的成效，顯示出海洋藥物研究具有十分廣闊的前景，是創(chuàng)新藥物的又一豐富來(lái)源[1]。其中，Jaspis屬海綿中存在豐富的具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和強(qiáng)烈的生物活性的化學(xué)成分。至今已經(jīng)有50多篇該屬海綿的化學(xué)成分的報(bào)道，化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)類(lèi)型涵蓋異臭椿型萜類(lèi)[2-3]、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)[4]、bengamide 類(lèi)[5]和環(huán)肽類(lèi)[6]等。本文以天然藥物化學(xué)研究手段，對(duì)中國(guó)南海海綿Jaspisstellifera進(jìn)行了提取分離，采用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和HPLC制備色譜和重結(jié)晶方法分離純化得到單體化合物，采用1H-NMR、13C-NMR、DEPT、COSY、HMBC、HSQC 等有機(jī)波譜方法鑒定化合物結(jié)構(gòu)。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑及材料 核磁共振儀：Bruker AV 400 instrument（TMS 內(nèi)標(biāo))；液質(zhì)聯(lián)用色譜儀：Alliance 2695，QuattroMicro TM ESI（Waters)；半制備高效液相色譜儀：日本分光公司（JASCO），PU-2089（泵），RI-2031和 UV-2075（檢測(cè)器)；制備 HPLC 色譜柱，C-18反相柱：YMC-Pack ODS-A SH-343-5（20mm×250mm）；GPC（凝膠滲透色譜柱）：Shodex，Asahipak GS-20G（20mm ×500mm×2）；凝膠柱色譜：ToyopearlHW-40C（Tosoh）；氘代試劑（ALDRICH公司）；柱色譜和薄層色譜用硅膠均系青島海洋化工廠(chǎng)生產(chǎn)，所用試劑均系分析純。

本文所用海綿采自海南三亞西島水域。海綿的鑒定由荷蘭國(guó)家自然博物館Leen van Ofwegen教授鑒定為南海海綿Jaspisstellifera。標(biāo)本存放于天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院。

1.2 提取分離 海綿Jaspis stellifera（濕重3 kg)經(jīng)勻漿后，用甲醇和丙酮分別提取3次（每次3 000 mL），得總浸膏80 g，最后將浸膏用氯仿和水進(jìn)行萃取，氯仿層經(jīng)減壓濃縮得到氯仿層萃取物20 g。將氯仿層萃取物用硅膠（200－300目）進(jìn)行柱色譜分離，以石油醚∶乙酸乙酯以及氯仿∶甲醇梯度洗脫得8個(gè)餾分，分別編號(hào)為A-H。

D組分（1.5 g），以硅膠柱色譜（硅膠600 g，300-400 目）分離，依次用 CH2Cl2:Eto A c（20∶1→10∶1→5∶1→2∶1）→MeOH梯度洗脫，通過(guò)TLC鑒定合并類(lèi)似組分。將上述組分樣品分別經(jīng)過(guò)硅膠柱常壓柱，Sephadex LH-20凝膠柱層析，ToyopealHW-40凝膠滲透柱色譜，制備薄層色譜以及制備高效液相色譜分離純化，分別得到化合物 1（1.0mg），2（0.8mg），3（28.5mg），4（35.1mg），5（10.0mg）。

2 結(jié)果

從南海海綿Jaspis stellifera提取物中分離得到5個(gè)化合物，見(jiàn)圖1。

圖1 從中國(guó)南海海綿Jaspisstellifera中分離得到的異臭椿型萜類(lèi)成分Fig 1 Compounds1-5 isolated from Jaspisstellifera

2.1 化合物1 22，23-dihydrostellettin B，黃色固體，ESI-MS 給出準(zhǔn)分子離子峰 m/z：465[M+H]+，結(jié)合1H NMR和13C NMR譜推測(cè)其分子式為:C30H40O4。1H NMR（400MHz，CDCl3）中有 4 個(gè)烯質(zhì)子信號(hào)，δH8.80（1H，d，J=15.0Hz，H-15），6.85（1H，dd，J=11.0，15.0Hz，H-16），6.33 （1H，d，J=11.0Hz，H-17），6.65（1H，br s，H-24）和 7 個(gè) CH3 信號(hào) δH2.07（3H，s，CH3－18），0.88 （3H，s，CH3－19），1.93（3H，s，CH3－21），1.97 （3H，s，CH3－27），1.08 （3H，s，CH3－28），1.14（3H，s，CH3－29），1.41（3H，s，CH3－30）。13C NMR（100MHz，CDCl3）共給出 30 個(gè)碳信號(hào)，分別為δC31.4（C－1），33.2（C－2），219.4（C－3），46.8（C－4），45.4（C－5），19.6（C－6），37.0（C－7），44.5（C－8），47.9（C－9），34.6 （C－10），36.6 （C－11），206.0 （C－12），145.8（C－13），142.0（C－14），133.5（C－15），129.8（C－16），128.7（C －17），16.0（C －18），23.2（C －19），136.8（C－20），13.1 （C－21），83.5 （C－22），28.7 （C－23），138.8（C－24），128.6（C－25），165.6（C－26），17.0（C－27），29.2（C－28），19.3（C－29），24.6（C－30）。

2.2 化合物2 isogeoditin A，淺黃色固體，ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z 451[M+H]+，給出分子式C29H38O4。1H NMR 譜（400MHz，CDCl3）中有 5 個(gè)烯質(zhì)子信號(hào)，分別為 δH9.01（1H，d，J=15.5Hz，H-15），6.98（1H，dd，J＝15.5，11.5Hz，H－16），7.22（1H，d，J＝11.5Hz，H－17），6.08（1H，d，J＝12.0Hz，H－23），5.78（1H，d，J＝12.0 Hz，H－24）和 7 個(gè) CH3信號(hào)，其中 4個(gè) δH0.59（3H，s，CH3－19），1.04（3H，s，CH3－27），1.05（3H，s，CH3－29），1.17（3H，s，CH3－28）為角甲基；3個(gè) δH1.81（3H，s，CH3－26），1.82（3H，s，CH3－18），2.21（3H，s，CH3－21）為烯雙鍵上的 CH3信號(hào)。13CNMR譜（100MHz，CDCl3）共給出 29 個(gè)碳信號(hào)，分別為 δC31.3（C－1），33.5（C－2），216.3（C－3），46.8（C－4），45.5（C－5），19.7（C－6），37.1（C－7），44.9（C－8），47.6（C－9），34.8（C －10），37.0（C －11），205.4（C －12），148.3（C－13），140.3（C－14），139.3（C－15），129.8（C－16），140.1（C－17），15.7（C －18），23.4（C －19），140.8（C －20），12.0（C－21），195.3（C－22），137.6（C－23），134.2（C－24），197.4（C－25），29.7（C－26），29.2（C－27），19.7（C－28），24.5（C－29）。

2.3 化合物3 stellettin A，黃色針狀晶體，ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z:463[M+H]+，結(jié)合1H NMR和13C NMR譜推測(cè)其分子式為:C30H38O4，1H NMR（400MHz，CDCl3）圖譜中，低場(chǎng)區(qū)存在5個(gè)烯碳質(zhì)子信號(hào)：δH6.21（1H，d，J＝7.0 Hz，H－23），6.87（1H，d，J＝15.0 Hz，H－15），6.96 （1H，dd，J＝15.0，11.0 Hz，H－16），7.14（1H，dd，J＝7.0，1.0Hz，H－24），7.27（1H，d，J=11Hz，H-17);高場(chǎng)區(qū)有4個(gè)連在sp3雜化季碳上的甲基信號(hào) （δH0.80，1.00，1.09，1.42），3 個(gè)連接于sp2 雜化烯碳上的甲基 （δH2.00，2.07，2.27）。13C NMR 譜（100MHz，CDCl3）給出 30個(gè)碳信號(hào)，分別為δC31.3（C－1），33.4（C－2），219.0（C－3），46.8（C－4），45.4（C－5），19.3（C－6），38.4（C－7），45.0（C－8），47.7（C－9），34.7 （C－10），36.7 （C－11），207.0 （C－12），147.4（C－13），141.0（C－14），136.8（C－15），130.8（C－16），130.4（C －17），14.3（C －18），23.4（C －19），128.4（C－20），12.7（C-21)，158.7（C-22)，103.1（C-23)，139.7（C-24)，124.5（C-25)，163.0（C-26)，16.9（C-27)，29.1（C-28)，19.6（C-29)，25.9（C-30)。

2.4 化合物4 stellettin B，亮黃色棱狀晶體，ESIMS給出準(zhǔn)分子離子峰為m/z463[M+H]+，結(jié)合1H NMR和13CNMR譜推測(cè)其分子式為C30H38O4。1H NMR（400MHz，CDCl3）圖譜中，低場(chǎng)區(qū)存在 5 個(gè)烯碳質(zhì)子信號(hào):δH6.24 （1H，d，J=7.0Hz，H-23)，6.95（1H，dd，J=15.0，11.0Hz，H-16)，7.16 （1H，dd，J=7.0，1.0Hz，H －24），7.27 （1H，d，J＝11.0Hz，H －17），8.28（1H，d，J＝15.0Hz，H－15）；高場(chǎng)區(qū)有 4 個(gè)連在sp3 雜化季碳上的甲基信號(hào)（δH0.88，1.08，1.14，1.43），3個(gè)連接于 sp2雜化烯碳上的甲基（δH2.05，2.09，2.14）。13CNMR 譜（100MHz，CDCl3）給出30 個(gè)碳信號(hào)，分別為 δC31.4（C-1)，33.5（C-2)，219.1（C－3），46.8（C－4），45.4（C－5），19.4（C－6），38.5（C－7），44.9（C －8），47.8（C －9），34.7（C －10），37.1（C －11），205.8 （C－12），146.8 （C－13），141.8 （C－14），136.8（C－15），131.1（C－16），129.4（C－17），16.8（C－18），23.5（C －19），128.3（C －20），12.8（C －21），159.3（C－22），102.5（C－23），139.6（C－24），124.1（C－25），163.0（C －26），15.9（C －27），29.2（C －28），19.7（C －29），24.6（C－30）。

2.5 化合物5 Jaspolide B，亮黃色固體，1H NMR譜（400MHz，CDCl3）給出了 5 個(gè)烯質(zhì)子信號(hào) δH6.96（1H，d，J=15.3Hz，H-15），7.28（1H，d，J=11.4Hz，H-17），7.17 （1H，d，J=6.9Hz，H-24)，6.98 （1H，dd，J=11.4，15.3Hz，H-16)，6.25（1H，d，J=6.9Hz，H-23），3個(gè)連在烯碳上的甲基信號(hào) δH2.15（H－27），2.32（H－18），2.04（H－21），4 個(gè)角甲基信號(hào) δH1.43（H－30），1.09（H－28），1.01（H－19），0.83（H－29）。13CNMR 譜（100MHz，CDCl3）給出了30個(gè)碳信號(hào)，分別為δC33.4（C－1），29.0（C－2），79.2（C－3），39.7（C－4），46.6（C－5），18.4（C－6），39.2（C－7），45.0（C－8），50.1（C－9），35.6（C －10），36.7（C －11），207.9（C －12），148.6（C－13），140.3（C－14），137.3（C－15），130.5（C－16），130.6（C －17），15.9（C －18），22.3（C －19），128.1（C －20），12.8（C－21），158.9（C－22），103.0（C－23），139.7（C－24），124.5（C－25），163.1（C－26），16.8（C－27），29.1（C－28），15.9（C－29），26.0（C－30）。

3 討論

本試驗(yàn)以天然藥物化學(xué)研究手段，對(duì)中國(guó)南海海綿Jaspis stellifera進(jìn)行了提取分離,采用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和HPLC制備色譜和重結(jié)晶方法分離純化得到單體化合物，采用1H-NMR、13CNMR、DEPT、HMBC、HSQC 等有機(jī)波譜方法鑒定化合物結(jié)構(gòu)。從Jaspis stellifera中分離得到5個(gè)化合物，1H NMR和13CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致分別鑒定為 22,23-dihydrostellettin B（1）[7]、isogeoditin A（2）[7]、stellettin A（3）[8]、stellettin B（4）[9]、jaspolide B（5）[10]。其中化合物1和2為首次從該屬海綿中分離得到的異臭椿型萜類(lèi)成分。該研究進(jìn)一步豐富了海綿化學(xué)成分的研究?jī)?nèi)容。

[1]郭躍偉.歐洲海洋藥物的研究現(xiàn)狀及對(duì)我國(guó)海洋藥物研究的啟示[J].中國(guó)新藥雜志,2001,10(2):81

[2]Naonobu T,Rei M,Azusa S,etal.Stelliferins J-N,isomalabaricane-type triterpenoids from Okinawanmarine sponge Rhabdastrella cf.globostellata[J].Tetrahedron,2011,67(4):6689

[3]Li J,Zhu H J,Ren JW,etal.Globostelletins J-S,isomalabaricanes with unusual cyclopentane sidechains from the marine sponge Rhabdastrellaglobostellata[J].Tetrahedron,2012,68(10):559

[4]Juntchi K,Osamu M.Jaspisamides A-C,new cytotoxic macrolides from theOkinawan sponge Jaspissp[J].JNatProd,1993,56(5):787

[5]Amiram G,Joshua JN.Cytotoxic metabohtes from an Australian colection of the sponge Jaspis Species[J].JNat Prod,1999,62(12):1691

[6]Zabriskie TM,Klocke K A,Heland CM,etal.Jaspamide,amodified peptide from a Jaspis sponge,with insecticidal and antifungal activity[J].JAm Chem Soc,1986,108(11):3123

[7]Lv F,Deng ZW,Li J,etal.Isomalabaricane-type compounds from themarine sponge rhabdastrella affdistincta[J].JNatProd,2004,67(3):2033

[8]Su JY,Meng Y H,Zeng LM.Cytotoxic stellettin A,a new triterpenoid pigment from themarine sponge Stelletta tenuis[J].JNat Prod,1994,7(10):1450

[9]McCabe T,Clardy JA.Triterpenoid pigmentwith the isoma labaricane skeleton from the sponge Stelletta sp[J].Tetrahedron Lett,1982,23(33):3307

[10]Tang SA,PeiYH,Fu H Z,etal.Jaspolide A-F,six new isomalabricane-type terpenoids from the sponge Jaspis sp[J].Chem Pharm Bull,2006,54(1):4