朱 瑩，張燦珍

(1.鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院腫瘤科，河南 鄭州450007;2.云南省腫瘤醫(yī)院干療科，云南昆明650118)

苯丁酸鈉(sodium phenylbutyrate，PB)是一種廣譜的誘導(dǎo)分化新藥，在體外對(duì)多種實(shí)體腫瘤細(xì)胞均有抑制其腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用［1－3］。為探討PB對(duì)肺腺癌的作用，作者初步觀察了苯丁酸鈉對(duì)體外人肺腺癌細(xì)胞A549生長(zhǎng)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 人肺腺癌細(xì)胞A549的細(xì)胞株由云南省腫瘤研究所保存;RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco公司，MTT、PB分別購(gòu)自美國(guó)Amresco公司、美國(guó)Alexis公司;流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)Beckman Coulter公司。人肺腺癌細(xì)胞A549用體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，于37℃、體積分?jǐn)?shù)5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2 MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況 將調(diào)整濃度后的人肺腺癌細(xì)胞A549的細(xì)胞懸液接種到96孔板上，待細(xì)胞完全貼壁，分組，每組4孔，重復(fù)3次。加培養(yǎng)基至空白孔中設(shè)為空白對(duì)照組;在空白孔中只培養(yǎng)細(xì)胞設(shè)為對(duì)照組;實(shí)驗(yàn)組:培養(yǎng)細(xì)胞，并分別加入 4 000 μg·mL－1、2 000 μg·mL－1、1 000 μg·mL－1、500 μg·mL－1、250 μg·mL－1的 PB。分別作用 48、72、96 h 后每孔加入 20 μL 5 mg·mL－1的 MTT，終止培養(yǎng)后上酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值(A值)，計(jì)算出抑制率，其中抑制率=(1－實(shí)驗(yàn)組A值/對(duì)照組A值)×100%。

1.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡的改變 搜集不同實(shí)驗(yàn)組的人肺腺癌細(xì)胞 A549，用0.01 mol·L－1的PBS洗滌，離心，制成細(xì)胞懸液，加入5 μL雞血紅細(xì)胞;破膜、避光染色等處理后用流式細(xì)胞儀分析計(jì)算各周期細(xì)胞的百分率及細(xì)胞凋亡率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.5進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)采用±s表示，比較用單因素方差分析，兩兩比較用SNK-q檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 MTT法檢測(cè)PB對(duì)肺癌細(xì)胞A549的增殖的抑制作用 見表1。

表1 PB作用后人肺腺癌細(xì)胞A549增殖抑制率比較 %

2.2 流式細(xì)胞術(shù)分析PB對(duì)人肺癌細(xì)胞A549的細(xì)胞周期和凋亡率的影響 見表2、3。

表2 PB作用48 h后人肺腺癌細(xì)胞A549的細(xì)胞周期和凋亡率的變化 %

表3 PB作用72 h后人肺腺癌細(xì)胞A549的細(xì)胞周期和凋亡率的變化 %

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，PB在體外濃度低至250 μg·mL－1已對(duì)人肺腺癌細(xì)胞 A549產(chǎn)生明顯抑制作用，500 μg·mL－1PB在體外作用于人肺腺癌細(xì)胞A549 72 h以后，G0/G1期細(xì)胞明顯增加，而相應(yīng)S期細(xì)胞減少，這提示PB對(duì)人肺腺癌細(xì)胞A549增殖的抑制作用可能原因是:腫瘤細(xì)胞周期的分布遭到改變，細(xì)胞向S期轉(zhuǎn)化受阻，從而致使多數(shù)腫瘤細(xì)胞停滯于G0/G1期，細(xì)胞內(nèi)DNA合成和有絲分裂減少，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的分化。PB通過活化腫瘤細(xì)胞內(nèi)Bax和Bak等促凋亡蛋白，抑制p21、ras蛋白的異戊烯化及膽固醇的合成，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡［4－7］。本研究發(fā)現(xiàn)，PB在體外能誘導(dǎo)人肺腺癌細(xì)胞A549的凋亡，凋亡率達(dá)9.3%，提示PB在體外抑制肺癌細(xì)胞的機(jī)制之一是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

以上研究結(jié)果表明，PB在體外對(duì)人肺腺癌細(xì)胞A549有明顯的增殖抑制作用，且能誘導(dǎo)其凋亡，這提示PB可用于肺癌的臨床治療，值得進(jìn)一步研究。

［1］朱瑩，張燦珍，朱巖，等.苯丁酸鈉體外對(duì)YTMLC-90細(xì)胞生長(zhǎng)的影響［J］.鄭州大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2010，45(3):493 －495.

［2］劉向光，黎禪玲，簡(jiǎn)曉紅.苯丁酸鈉對(duì)SHG-44膠質(zhì)細(xì)胞瘤株的抗腫瘤作用機(jī)制研究［J］.腫瘤藥學(xué)，2011，1(6):493 －496.

［3］Yu W，Wang J，Jin J，et al.Heat shock protein 90 inhibition results in altered downstream signaling of mutant KIT and exerts synergistic effects on Kasumi-1 cells when combining with histone deacetylase inhibitor［J］.Leuk Res，2011，35(9):1212 －1218.

［4］劉奇，陳德興，趙吉生.苯丁酸鈉對(duì)胃癌細(xì)胞株SGC-7901的增殖抑制作用［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2012，32(22)4960 －4961.

［5］王迎春，楊旭，金青梅.苯丁酸鈉對(duì)人肝癌HepG2.2.15細(xì)胞凋亡及乙型肝炎病毒指標(biāo)的影響［J］.臨床腫瘤學(xué)雜志，2013，18(11)，970 －973.

［6］羅曉華，許雅娟，崔金全，等.苯丁酸鈉對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖及p21WAF1/CIP1和CDK7表達(dá)的影響［J］.中國(guó)婦幼保健，2011，26(4):604 －607.

［7］Kim H，Kim SN，Park YS，et al.HDAC inhibitors downregulate MRP2 expression in multidrug resistant cancer cells:implication for chemosensitization［J］.Int J Oncol，2011，38(3):807 － 812.