蔣峻峰（重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院輸血科 402360）

新生兒溶血病（HDN）是由于母親體內(nèi)存在可結(jié)合胎兒紅細(xì)胞的IgG血型抗體而引起的被動(dòng)免疫性疾病，未及時(shí)治療極易導(dǎo)致高膽紅素血癥等并發(fā)癥，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致新生兒智力缺陷，甚至死亡［1－2］。微柱凝膠免疫檢測(cè)是免疫學(xué)檢測(cè)常用方法，廣泛應(yīng)用于血型抗體檢測(cè)臨床［3－4］。本研究以401例疑似HDN新生兒為研究對(duì)象，探討了微柱凝膠免疫檢測(cè)在HDN診斷中的應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年5月至2014年3月與本院就診的疑似HDN新生兒401例，出生時(shí)間小于或等于5d的新生兒303例，出生時(shí)間大于5d的新生兒98例。

1.2 儀器與試劑 FYQ型免疫微柱孵育器、TD－3A型血型血清學(xué)檢測(cè)專用離心機(jī)、新生兒ABO及RhD血型檢測(cè)卡、胎兒及嬰兒HDN不完全抗體檢測(cè)卡、放散試劑盒均購自長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.3 方法 采集乙二胺四乙酸二鉀抗凝靜脈血3～4mL，無溶血標(biāo)本，且采集后立即送檢。檢測(cè)項(xiàng)目包括ABO血型、RhD血型、直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAT）、游離抗體試驗(yàn)、放散試驗(yàn)，其中DAT、游離抗體試驗(yàn)、放散試驗(yàn)同時(shí)采用試管法和微柱凝膠免疫法。微柱凝膠免疫法結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：紅細(xì)胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中判為陽性，提示血清中含有相應(yīng)抗體或血細(xì)胞被致敏；紅細(xì)胞完全沉降至凝膠底部并形成紅細(xì)胞扣判為陰性，提示血清中無相應(yīng)抗體且血細(xì)胞未被致敏。微柱凝膠免疫檢測(cè)注意事項(xiàng)：檢測(cè)前采用專用離心機(jī)將檢測(cè)卡離心1次（離心時(shí)間2～3min），避免使用有干膠和氣泡的檢測(cè)卡；檢測(cè)前將靜脈血標(biāo)本3 000 r／min離心3min，使纖維蛋白充分沉降，避免血漿殘留的纖維蛋白干擾檢測(cè)結(jié)果；在環(huán)境溫度15～25℃條件下進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)，避免因溫度過低而產(chǎn)生冷凝集；加入標(biāo)本及試劑的檢測(cè)卡離心1次后立即判讀結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)。P＜0.05為比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 血型檢測(cè)結(jié)果 401例新生兒中檢出HDN患兒檢出率為65.58%（275／401）。275例 HDN患兒中，ABO血型系統(tǒng)不合占96.00%（264／275），其中母親為O型、新生兒為A或B型占95.83%（253／264），母親為A型、新生兒為B型或母親為B型、新生兒為 A 型占4.17（11／264）；Rh血型不合占4.00%（11／275）。

2.2 溶血試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果 401例新生兒中，DAT、游離抗體試驗(yàn)與放散試驗(yàn)微柱凝膠免疫檢測(cè)結(jié)果均為陰性者占31.42%（126／401），3項(xiàng)試驗(yàn)中至少1項(xiàng)為陽性者占68.58%（275／401）；3項(xiàng)試驗(yàn)試管法檢測(cè)至少1項(xiàng)為陽性者占44.39%（178／401）。兩種方法陽性檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝47.73，P＜0.05）。見表1。

表1 新生兒溶血試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果［n（%）］

3 討 論

HDN是由于母嬰血型不合，母親血型抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒血液循環(huán)中，導(dǎo)致胎兒或新生兒體內(nèi)紅細(xì)胞被破壞，屬于被動(dòng)免疫性疾病。HDN主要由ABO血型系統(tǒng)、Rh血型系統(tǒng)及其他少見的血型系統(tǒng)不合所致，國內(nèi)以ABO血型不合最為常見，約占85.3%，Rh血型不合約占14.6%［5－7］。病情較輕的HDN患兒表現(xiàn)為貧血、水腫、肝脾腫大，病情嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致新生兒運(yùn)動(dòng)障礙、智力發(fā)育不全、核黃疸，甚至死亡。早期診斷和治療HDN極為重要。目前常用的HDN診斷試驗(yàn)包括：DAT、游離抗體試驗(yàn)和放散試驗(yàn)［8－9］，檢測(cè)方法包括試管法和微柱凝膠免疫法。試管法可用于血型抗原與不完全抗體檢測(cè)，但存在操作繁瑣、檢測(cè)耗時(shí)長、結(jié)果準(zhǔn)確率較低等不足。微柱凝膠免疫法可用于血型鑒定、不規(guī)則抗體篩查和鑒定、交叉配血等血清學(xué)試驗(yàn)，可以代替?zhèn)鹘y(tǒng)的血型檢測(cè)方法進(jìn)行紅細(xì)胞抗原、抗體檢測(cè)。與試管法相比，微柱凝膠免疫法該具有標(biāo)本用量少（更適用于新生兒）、結(jié)果容易判斷、靈敏度高、準(zhǔn)確率高等優(yōu)點(diǎn)［10］。

本研究采用試管法和微柱凝膠免疫檢測(cè)法對(duì)疑似HDN新生兒進(jìn)行DAT、游離抗體試驗(yàn)和放散試驗(yàn)檢測(cè)，結(jié)果顯示3項(xiàng)試驗(yàn)微柱凝膠法檢測(cè)陽性率為68.58%，試管法檢測(cè)陽性率僅為44.39%。血型鑒定結(jié)果顯示，母嬰ABO血型系統(tǒng)不合占96.00%，Rh血型系統(tǒng)不合占4.00%。在ABO血型系統(tǒng)不合的患兒中，母親為O型、患兒為A或B型占95.83%。母親為O型時(shí)，外周血中的IgG類抗A、抗B抗體可通過胎盤屏障進(jìn)入胎兒血循環(huán)。母親為A型，胎兒為B或AB型，或母親為B型，胎兒為A或AB型也可導(dǎo)致HDN，但臨床比較少見，主要是由于母親為A或B型時(shí)，外周血中的抗B、抗A抗體主要為IgM類抗體，不易通過胎盤屏障進(jìn)入胎兒血循環(huán)。O型婦女極易在孕前因血型物質(zhì)（如寄生蟲、疫苗等）的刺激產(chǎn)生IgG類抗A、抗B抗體，導(dǎo)致其孕育的胎兒存在較高的HDN發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。母嬰Rh血型系統(tǒng)不合主要是由于Rh陰性孕婦孕育Rh陽性胎兒，一旦胎兒紅細(xì)胞在分娩時(shí)因胎盤失血進(jìn)入母親外周血，可導(dǎo)致母親產(chǎn)生相應(yīng)的血型抗體，但由于母親為初次致敏時(shí)產(chǎn)生的抗體為IgM類抗體，只有在抗原長期刺激后才產(chǎn)生IgG型抗體，因此Rh血型系統(tǒng)不合所致HDN不會(huì)在第1胎發(fā)生。極少數(shù)未輸過血的母親第1次孕育的胎兒在分娩后發(fā)生HDN，可能與產(chǎn)婦為Rh陰性而產(chǎn)婦的母親為Rh陽性有關(guān)。

綜上所述，微柱凝膠免疫檢測(cè)技術(shù)具有操作簡單、靈敏度高、準(zhǔn)確率高、易于標(biāo)準(zhǔn)化（可減少操作者主觀因素的影響）等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于臨床［11－12］。微柱凝膠免疫檢測(cè)技術(shù)在HDN檢測(cè)方面也具有一定的優(yōu)勢(shì)，在產(chǎn)前及產(chǎn)后HDN早期診斷方面具有極高的應(yīng)用價(jià)值，適合臨床推廣應(yīng)用。

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