周驗旭，郭正元，譚 紅，戴 亮

（湖南農(nóng)業(yè)大學資源環(huán)境學院，湖南 長沙410128）

鹽酸嗎啉胍作為一種抗病毒藥，主要用于流感病毒及皰疹病毒感染[1-2]。現(xiàn)廣泛應用于農(nóng)作物上，可有效防治番茄、煙草、水稻等作物的病毒病，而應用于水稻作物，主要防治黑條矮縮病[3]。由于鹽酸嗎啉胍極易溶于水，且水稻田土壤基質(zhì)中水分含量極高，國內(nèi)針對鹽酸嗎啉胍在煙草、番茄等土壤的殘留量分析方法并不適用于水稻田土壤。目前我國和食品法典委員會（CAC）、歐盟、美國等國家和組織均沒有規(guī)定農(nóng)產(chǎn)品中鹽酸嗎啉胍的農(nóng)藥最高殘留限量（MRL）[4-5]，根據(jù)農(nóng)藥殘留試驗結(jié)果推薦鹽酸嗎啉胍在糙米中的MRL 值為3.0 mg/kg[6]，暫擬鹽酸嗎啉胍在土壤中的MRL 值為3.0 mg/kg。

研究結(jié)合稻田土壤水含量多以及鹽酸嗎啉胍易溶于水且在水中穩(wěn)定的特性，試圖建立稻田土壤中鹽酸嗎啉胍的高效液相色譜檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

Agilent-1200 型高效液相色譜儀；ZHWY-2102 雙層大容量全溫度恒溫培養(yǎng)振蕩器；RE-2000 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器有限公司生產(chǎn)）；TP-220A 電子天平；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）。

1.2 試劑

鹽酸嗎啉胍標準品（純度99.8%）、庚烷磺酸鈉、甲醇、乙酸、三乙胺、丙酮、飽和氯化鈉、超純水（以上試劑均為分析純及以上純度）。

1.3 樣品制備

供試農(nóng)藥為5%鹽酸嗎啉胍水劑，2013年于湖南、貴州和吉林三地在水稻作物種植期噴施，施藥劑量：50 kg/hm2；施藥次數(shù)：1 次；采樣距施藥間隔期：2 h、1、2、3、5、7、10、14、21、28、35、45 d；在小區(qū)中用隨機方式選擇10個以上采樣點，用土鉆取10 cm 深土壤，每小區(qū)采集土壤樣本1～2 kg，在不銹鋼盆中去除碎石、雜草和植物根莖等雜物，碾碎后過篩，充分混勻，用四分法分取200 g樣品兩份，按SOPFT-01-05《樣品標簽的使用標準操作規(guī)程》貼好標簽。盡快測定土壤樣品中鹽酸嗎啉胍殘留量。

1.4 樣品提取

準確稱取20 g 水稻田土壤樣品于250 mL 錐形瓶中，加5 mL 蒸餾水、5 mL 飽和氯化鈉溶液和60 mL 丙酮，在35℃恒溫條件下振蕩1 h，經(jīng)抽濾過濾，濾液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至丙酮完全揮發(fā)，殘余水相移入刻度試管，用蒸餾水分多次淋洗瓶壁，并入刻度試管，定容至15 mL，過0.45 μm 膜，待HPLC 測定。

1.5 色譜分析條件

色譜柱為Lichrospher C18（250 mm×4.6 mm）；流動相：緩沖液-甲醇（55:45，V/V），其中緩沖溶液含0.025 mol/L 庚烷磺酸鈉和0.2%三乙胺，pH 值為3.2；流速：0.7 mL/min；檢測波長：238 nm；進樣量：20 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 標準曲線和相關(guān)性

用 超 純 水 配 制0.100、0.504、2.016、5.040、10.080 mg/L鹽酸嗎啉胍標準溶液系列，在上述液相色譜條件下，鹽酸嗎啉胍標準溶液濃度在0.10～10.08 mg/L 范圍時，峰面積（y，mAU）與鹽酸嗎啉胍的濃度（x，mg/L）呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為：Y=160.83 X+2.516 4，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 2，如圖1。

圖1 鹽酸嗎啉胍的標準曲線

2.2 提取條件的優(yōu)化

2.2.1 提取劑的選擇 鹽酸嗎啉胍在水或甲醇中都有較大的溶解度且穩(wěn)定，而水作為提取劑不易濃縮，故采用水與有機試劑配比的方法。通過多次試驗，比較了甲醇、甲醇-水（60∶10，體積比，下同）、甲醇-水-飽和氯化鈉（60∶5∶5）、丙酮-水-飽和氯化鈉（60∶5∶5）四組提取劑在常溫下對稻田土壤中鹽酸嗎啉胍的提取效果。經(jīng)分析檢測，結(jié)果見表1。由表1 可見，以丙酮-水-飽和氯化鈉（60∶5∶5）為提取劑，回收率最高，達58.1%；以甲醇為提取劑，回收率最低，僅0.7%。

表1 4種不同提取液提取土壤中鹽酸嗎啉胍保留時間、峰面積及回收率

2.2.2 提取時間的選擇 將土壤樣品加入提取劑后置于恒溫振蕩器中，分別振蕩0.5、1、2 h，對比提取率，經(jīng)分析檢測，振蕩時間為1 h 提取的回收率最高。結(jié)果見表2。

表2 不同振蕩提取時間對鹽酸嗎啉胍提取效率的影響

2.2.3 提取溫度的選擇 在上述條件下分別設(shè)置恒溫振蕩器的溫度為25℃、35℃，振蕩1 h，對土壤樣品中鹽酸嗎啉胍進行提取。結(jié)果表明，當溫度為25℃時，回收率在60%左右；當溫度為35℃時，回收率在80%以上，回收率能達到農(nóng)藥殘留分析的定量要求。

2.3 精密度與加標回收試驗

按0.10、0.50、3.00 mg/kg 三個水平對空白稻田土壤樣品進行加標回收率試驗，用上述方法進行前處理和高效液相色譜測定，外標法定量，平行測定5 次，鹽酸嗎啉胍在稻田土壤樣品中的平均加標回收率為84.7%～91.7%，RSD 為4.0%～6.6%，均符合農(nóng)藥殘留分析的要求，結(jié)果見表3?？瞻淄寥篮图訕藰悠飞V峰見圖2、3、4、5。

表3 鹽酸嗎啉胍在稻田土壤中的回收率

圖2 標樣（7.0 mg/kg）

圖3 土壤添加空白

圖4 土壤添加濃度（3.0 mg/kg）

2.4 最小檢出量和最小檢測濃度

在上述分析條件下，鹽酸嗎啉胍的最小檢出量為2.0×10-9g，稻田土壤中鹽酸嗎啉胍的最小檢測濃度為0.075 mg/kg。

2.5 鹽酸嗎啉胍在土壤中的消解動態(tài)

用上述建立的分析方法對2013年布置在湖南長沙市、貴州貴陽市和吉林長春市三地的鹽酸嗎啉胍農(nóng)藥殘留試驗稻田土壤樣品進行檢測，得出鹽酸嗎啉胍消解動態(tài)方程、相關(guān)系數(shù)（γ）及半衰期數(shù)據(jù)見表4。

表4 鹽酸嗎啉胍在稻田土壤中的消解動態(tài)方程、相關(guān)系數(shù)及半衰期

3 結(jié) 論

首次建立了稻田土壤中鹽酸嗎啉胍的高效液相色譜檢測方法。采用丙酮-水-飽和氯化鈉（60∶5∶5，體積比）混合溶液對稻田土壤中鹽酸嗎啉胍進行振蕩提取，不需凈化，雜質(zhì)干擾少，費用低。鹽酸嗎啉胍在0.10～10.08 mg/L 濃度范圍內(nèi)質(zhì)量濃度和響應值的線性相關(guān)性為0.999 2，在稻田土壤樣品中的平均加標回收率為84.7%～91.7%，RSD 為4.0%～6.6%。鹽酸嗎啉胍在供試三地的稻田土壤中消解半衰期為8.07～13.62 d。方法的準確度、精密度等各項技術(shù)指標均符合農(nóng)藥殘留檢測的基本要求，可用于稻田土壤中鹽酸嗎啉胍殘留的定量分析。

[1]方東偉，王正權(quán).反相高效液相色譜法測定鹽酸嗎啉胍片的含量[J].中國藥業(yè)，2006，15（5）：41.

[2]錢曉曉，萬宏劍，戴色琴.20%鹽酸嗎啉胍可濕性粉劑的高效液相色譜分析[J].農(nóng)藥科學與管理，2008，29（2）：13-16.

[3]農(nóng)藥登記公告[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998.611-636.

[4]楊懷鏡，李雪梅，張 玲.鹽酸嗎啉胍片含量測定方法的比較[J].中國藥事，2001，15（2）：123-124.

[5]鄭海香，安鳳穎，胡德禹，等.鹽酸嗎啉胍在煙草中的檢測方法及消解動態(tài)研究[J].農(nóng)藥科學與管理，2012，33（10）：30-34.

[6]趙 琳，張曉波，任紅波，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水稻糙米和植株中鹽酸嗎啉胍殘留[J].農(nóng)藥，2013，52（11）：815-817.