李 云，黃憲章，鄭松柏，韓麗喬，曹永堅，徐建華，林 莉，李有強，莊俊華，王建兵

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院檢驗科，廣州510120）

臨床檢驗中心室間質(zhì)評的目的是實現(xiàn)不同實驗室間的檢測結(jié)果一致和準確，但其室間質(zhì)評的靶值采用所有實驗室測量結(jié)果去除離群值后的均值，允許范圍要求也較寬泛；而參考方法具有較小的不確定度，可以直接溯源至國際單位［1］。本實驗以參考方法作為參比系統(tǒng)，與其他常規(guī)系統(tǒng)同時檢測臨床檢驗中心2012年第1次室間質(zhì)評樣本和患者血清，其他常規(guī)系統(tǒng)都與參考方法比對，探討酶學(xué)參考方法在常規(guī)化學(xué)室間質(zhì)評應(yīng)用中的可行性，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 （1）儀器：HITACHI U－3310紫外可見分光光度計；HAMILTON ML530B稀釋配液儀；Fluke點式溫度計；Eppendorf Research型移液器；JULABO－ED19型恒溫水浴箱；Sartorius CP225D十萬分之一分析天平；Sartorius DOCU－PH 計；IKA RH－KT／C 加 熱 磁 力 攪 拌 器；Millipore Simplicity UA型超純水機；各種高精度玻璃器皿。（2）試劑：參照IFCC公布的肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）、堿性磷酸酶（ALP）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、γ－谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶（GGT）、α－淀粉酶（AMY）參考測量程序［2－8］，所有試劑均購于北京阿匹斯公司，且均為分析純。（3）參考物質(zhì)：CK、LDH、ALP、ALT、AST、GGT、AMY參考物質(zhì)均購于歐共體參考物質(zhì)測量研究所（IRMM）。

1.2 臨床常規(guī)檢測系統(tǒng) 廣東省中醫(yī)院4家臨床實驗室的5個檢測系統(tǒng)組成，見表1。

1.3 樣本

1.3.1 質(zhì)評樣本 2012年臨床檢驗中心第1次室間質(zhì)評樣本：201211、201212、201213、201214、201215，檢 測 前 按 要 求復(fù)溶。

1.3.2 新鮮血清樣本 收集本院患者新鮮血清：CK、LDH、ALP、ALT、AST、GGT、AMY各5個濃度水平（高、中、低濃度），肉眼可見溶血和脂血標本排除在外。每支0.5mL分裝，密封保存于－80℃凍存。與質(zhì)評樣本于同一天檢測。

表1 臨床常規(guī)檢測系統(tǒng)組成

1.4 方法

1.4.1 參考方法建立 參照IFCC參考測量程序分別建立CK、LDH、ALP、ALT、AST、GGT、AMY 的參考方法，其中ALT、AST參考方法為加和不加磷酸吡哆醛方法。各參考方法的性能驗證（ALT、AST參考方法為加磷酸吡哆醛方法）為：分別連續(xù)檢測參考物質(zhì) （ERM－AD）3～5次，計算均值，比較其結(jié)果是否在給出的靶值±不確定度內(nèi)；每日測量國際參考實驗室比對樣本（RELA）2011A、2011B各5次，連續(xù)測量3d，本實驗室復(fù)現(xiàn)性要求為變異系數(shù)（CV）≤1.5%。參考測量程序的正確性和復(fù)現(xiàn)性符合要求后測量收集的血清樣本，每份樣本測量（ALT、AST參考方法為蒸溜水代替磷酸吡哆醛方法）2次。RELA2011A、2011B作為質(zhì)控品，于實驗開始和結(jié)束時檢測。

1.4.2 臨床常規(guī)檢測系統(tǒng) 于同一天分發(fā)待檢樣本到各實驗室，在保證當日室內(nèi)質(zhì)控在控的前提下，按照本實驗室標準操作規(guī)程測量樣本，每份樣本重復(fù)測量3次，記錄測量結(jié)果，計算均值。

1.4.3 數(shù)據(jù)分析 首先將參考方法檢測結(jié)果（X1）和衛(wèi)生部靶值（X2）比較，計算X1與X2的百分差異；然后分別將各項目臨床常規(guī)系統(tǒng)檢測結(jié)果（Y）與參考方法檢測結(jié)果（X1）和衛(wèi)生部靶值（X2）比較，計算相對偏倚［（Y－X）／X×100%］，以衛(wèi)生部臨檢中心常規(guī)化學(xué)（酶學(xué)）室間比對的允許偏倚為標準分別判斷臨床常規(guī)系統(tǒng)質(zhì)評檢測是否通過。

2 結(jié) 果

2.1 參考方法性能評價 參考方法測量精密度、正確度均符合實驗室要求，結(jié)果見表2。

表2 參考方法的性能評價結(jié)果

2.2 常規(guī)檢測系統(tǒng)與參考方法檢測患者血清樣本結(jié)果的偏倚分析 以參考方法為目標比對系統(tǒng)，各常規(guī)檢測系統(tǒng)檢測患者血清樣本結(jié)果與參考方法測量結(jié)果的相對偏倚，見表3。

表3 常規(guī)檢測系統(tǒng)與參考方法檢測患者血清樣本結(jié)果的相對偏倚（%）

續(xù)表3 常規(guī)檢測系統(tǒng)與參考方法檢測患者血清樣本結(jié)果的相對偏倚（%）

續(xù)表3 常規(guī)檢測系統(tǒng)與參考方法檢測患者血清樣本結(jié)果的相對偏倚（%）

2.3 常規(guī)檢測系統(tǒng)與參考方法檢測臨床檢驗中心室間質(zhì)評樣本結(jié)果的偏倚分析 以參考方法為目標比對系統(tǒng)，各常規(guī)檢測系統(tǒng)測量結(jié)果、臨床檢驗中心靶值與參考方法測量結(jié)果的相對偏倚，見表4。

表4 常規(guī)檢測系統(tǒng)與參考方法檢測臨床檢驗中心室間質(zhì)評樣本的偏倚（%）

續(xù)表4 常規(guī)檢測系統(tǒng)與參考方法檢測臨床檢驗中心室間質(zhì)評樣本的偏倚（%）

3 討 論

酶在人體內(nèi)雖然微量卻發(fā)揮著極為重要的作用，其活性的變化是人體健康的指示燈，但酶活性的檢測結(jié)果與反應(yīng)條件密切相關(guān)，而目前臨床酶學(xué)的檢測系統(tǒng)多種多樣，各實驗室根據(jù)自己的需要選用不同的儀器、試劑和校準品，給實驗室之間結(jié)果的互認造成很大的困難。不同檢測系統(tǒng)測定結(jié)果的一致性研究已成為關(guān)注的焦點［9］。

本研究發(fā)現(xiàn)，本室建立的參考方法的正確度結(jié)果均在參考物質(zhì)不確定度范圍內(nèi)；測量2011年國際參考實驗室比對樣本復(fù)現(xiàn)性CV≤1.5%，均滿足實驗室要求，各檢測項目的參考方法已在實驗室建立，可以作為目標參比系統(tǒng)。

本研究還發(fā)現(xiàn)，臨床檢驗中心每個項目的5個靶值與參考方法測量結(jié)果的偏倚趨勢基本一致，變化范圍在－10.0%～6.4%。濕化學(xué)系統(tǒng)Y1、Y3、Y4、Y5檢測質(zhì)評樣本的結(jié)果，若用臨床檢驗中心的允許總誤差作為判斷標準，不管是以參考方法檢測結(jié)果或臨檢中心靶值為目標，其所有測量結(jié)果均合格。當實驗用臨床檢驗中心酶學(xué)正確度驗證的標準（CK：靶值±5.5%；LDH：靶值±4.0%；ALP：靶值±10.0%；ALT：靶值±6.0%；AST：靶值±5.0%；GGT：靶值±5.5%；AMY：靶值±7.5%）來評判室間質(zhì)評結(jié)果是否通過，以參考方法檢測結(jié)果和臨檢中心靶值為目標，濕化學(xué)系統(tǒng)所有測量結(jié)果合格率分別為72.9%和63.6%，參考方法檢測結(jié)果為目標的合格率提高9.0%。如果采用參考方法定值作為標準，可以減少當多家實驗室出現(xiàn)方向一致的偏倚時所導(dǎo)致靶值出現(xiàn)的偏倚，使本來測量準確的實驗室可能就會不合格，在一定程度上提高正確性。同時本實驗結(jié)果表明，以參考方法檢測結(jié)果為目標，用臨床檢驗中心酶學(xué)正確度驗證的標準，室間質(zhì)評樣本與患者血清的合格率分別為72.9%、67.1%。室間質(zhì)評樣本是否具有基質(zhì)效應(yīng)，有待進一步探討。

常規(guī)檢測系統(tǒng)Y2為干化學(xué)法，用臨床檢驗中心的允許總誤差作為判斷標準，以參考方法檢測結(jié)果為目標，其合格率為77.1%，以臨檢中心干化學(xué)靶值為目標，其合格率為94.3%，而同時測量的患者血清僅AST測試不合格，占2.9%。從表2、3可以看出，系統(tǒng)Y2的CK、AMY項目與參考方法相比出現(xiàn)了一個較大的偏倚，對CK、AMY進行基質(zhì)效應(yīng)評價表明，5個CK質(zhì)評樣本中僅高值表現(xiàn)有基質(zhì)效應(yīng)，而5個AMY質(zhì)評樣本中僅低值沒有顯示基質(zhì)效應(yīng)。本研究也發(fā)現(xiàn)，淀粉酶濃度較低時，其與參考方法的偏倚較小，隨著濃度增高，其偏倚增大。CK不論室間質(zhì)評還是患者血清檢測結(jié)果均發(fā)生了較大的正偏倚。值得注意的是，LDH測量方法本實驗將反應(yīng)方向由“P→L”的反應(yīng)系數(shù)按照與羅氏比對結(jié)果進行了調(diào)整，以參考方法檢測結(jié)果為目標，測量室間質(zhì)評和患者血清均在允許誤差范圍內(nèi)，其中患者血清結(jié)果的偏倚小于1／3允許誤差，即其與參考方法相關(guān)性滿足臨床需要，所以當方法不一致時可以通過調(diào)整系數(shù)達到與參考方法檢測結(jié)果一致進而與常規(guī)化學(xué)檢測結(jié)果統(tǒng)一的目的。

綜上所述，參考方法具有較高的正確性，較小的不確定度，將其作為參比方法，應(yīng)用于室間質(zhì)評，有利于不同實驗室不同系統(tǒng)不同方法之間結(jié)果的一致和可比，能夠促進不同實驗室之間結(jié)果的互認。

［1］Jansen R，Schumann G，Baadenhuijsen H，et al.Trueness verification and traceability assessment of results from commercial systems for measurement of six enzyme activities in serum：an international study in the EC4framework of the calibration 2000project［J］.Clin Chim Acta，2006，368（1／2）：160－167.

［2］Schumann G，Bonora R，Criotti F，et al.IFCC primary reference procedures for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37℃.Part 2.Reference procedure for the measurement of catalytic concentration of creatine kinase［J］.Clin Chem Lab Med，2002，40（6）：635－642.

［3］Schumann G，Bonora R，Criotti F，et al.IFCC primary reference procedures for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37℃.Part 3.Reference procedure for the measurement of catalytic concentration of lactate dehydrogenase［J］.Clin Chem Lab Med，2002，40（6）：643－648.

［4］Schumann G，Klauke R，Canalias F，et al.IFCC primary reference procedures for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37 ℃.Part 9：Reference procedure for the measurement of catalytic concentration of alkaline phosphatase［J］.Clin Chem Lab Med，2006，44（9）：1146－1155.

［5］Schumann G，Bonora R，Criotti F，et al..IFCC primary reference procedures for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37℃.Part4.Reference procedure for the measurement of catalytic concentration of alanine aminotransferase［J］.Clin Chem Lab Med，2011，49（9）：1439－1446.

［6］Schumann G，Bonora R，Criotti F，et al.IFCC primary reference procedures for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37℃.Part5.Reference procedure for the measurement of catalytic concentration of aspartate aminotransferase［J］.Clin Chem Lab Med，2002，40（7）：725－733.

［7］Schumann G，Bonora R，Criotti F，et al.IFCC primary reference procedures for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37℃.Part6.Reference procedure for the measurement of catalytic concentration ofγ－Glutamyltransferase［J］.Clin Chem Lab Med，2002，40（7）：734－738.

［8］Schumann G，Aoki R，F(xiàn)errero CA，et al.IFCC primary reference procedures for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37℃.Part 8.Reference procedure for the measurement of catalytic concentration ofα－amylase［J］.Clin Chem Lab Med，2006，44（9）：1146－1155.

［9］陽蘋，張莉萍，肖勤，等.實驗室內(nèi)不同檢測系統(tǒng)比對周期及比對方案探討［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2011，40（3）：253－255.