李維嘉，鐘 晨，王錦國，牛少雄，牛建華△，李永康，黃 瑾

（石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院：1.第一附屬醫(yī)院普外三科；2.生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室，新疆石河子832000）

Neuritin是以色列科學(xué)家Nedivi等［1］在1993年通過構(gòu)建谷氨酸類似物海人藻酸（kainic acid，KA）激活型大鼠海馬齒狀回cDNA文庫得到的一個(gè)基因。之前的研究表明，Neuritin在神經(jīng)突起的生長和成熟中起著重要作用［2－4］。但近年來有研究表明，Neuritin的作用不僅局限于神經(jīng)系統(tǒng)，在神經(jīng)系統(tǒng)以外的某些腫瘤組織中存在高表達(dá)，且在一定程度上參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［5－11］。然而，胃癌作為消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，目前國內(nèi)外尚未見Neuritin在胃癌中表達(dá)的研究。本研究旨在通過檢測Neuritin在胃癌組織中的表達(dá)水平，以探討其與胃癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料 本實(shí)驗(yàn)所采用的標(biāo)本為58例胃癌患者手術(shù)存檔蠟塊（胃癌組織及同一患者的癌旁正常組織），均來自2010～2013年石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科，均經(jīng)本院病理科行病理診斷證實(shí)。所有患者均經(jīng)術(shù)后組織病理學(xué)確診為胃癌，有明確的手術(shù)時(shí)間，術(shù)前均未接受化療和放療，其中男40例（68.97%），女18例（31.03%）；標(biāo)本患者年齡35～80歲，平均60歲；隆起型胃癌4例（6.70%），潰瘍型胃癌45例（77.59%），浸潤型胃癌9例（15.52%）。Neuritin抗體購于Sigma公司（PRS4101），第二抗體購于中杉金橋公司（PV－6001）。

1.2 方法 免疫組織化學(xué)染色，每張切片的厚度為4μm。采用Envision兩步法：切片脫蠟至水，微波加熱（95℃、15min）以修復(fù)抗原，H2O2孵育10min以減少背景染色；4℃一抗孵育過夜（1∶200稀釋）；PBS振洗3次，每次5min；滴加第二抗體，37℃孵育30min；PBS振洗3次，每次5min。DAB顯色后進(jìn)行蘇木素核復(fù)染、脫水、透明、封片、干燥。每次實(shí)驗(yàn)均以PBS代替第一抗體作為陰性對(duì)照。結(jié)果判斷采用AB值法。A：按切片中細(xì)胞顯色有無及深淺評(píng)分，0分：無著色；1分：淺黃色；2分：棕／深黃色；3分：棕褐色。B：按切片中顯色細(xì)胞比例評(píng)分，1分：顯色細(xì)胞占切片中細(xì)胞總數(shù)的10%以下；2分：大于等于10%至小于50%的細(xì)胞顯色；3分：大于等于50%至小于75%以上細(xì)胞顯色；4分：75%以上細(xì)胞顯色。每例樣本積分＝A×B，按積分高低劃分：小于等于4分：陰性；5～8分：陽性；9～12分：強(qiáng)陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，百分率比較用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

2 結(jié) 果

2.1 胃癌石蠟組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 Neuritin表達(dá)的陽性部位位于胞漿和胞核，胞漿著色明顯，著色為棕黃色或棕褐黃色；胞核著色較弱，著色為淡黃色或棕黃色。58例胃癌組織中有2例表達(dá)為陰性，8例表達(dá)為陽性，48例表達(dá)為強(qiáng)陽性（圖1、2），陽性率為96.55%，強(qiáng)陽性率為82.76%；58例癌旁正常組織中有3例表達(dá)為陰性，46例表達(dá)為陽性（圖3、4），9例表達(dá)為強(qiáng)陽性，陽性率為94.83%，強(qiáng)陽性率為15.52%。圖5為陰性對(duì)照。Neuritin在兩組間表達(dá)的陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1，但Neuritin在兩組間表達(dá)的強(qiáng)陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

圖1 胃癌組織中Neuritin蛋白陽性表達(dá)（×200）

圖2 胃癌組織中Neuritin蛋白強(qiáng)陽性表達(dá)（×200）

圖3 癌旁正常組織中Neuritin蛋白陽性表達(dá)（×200）

2.2 胃癌中Neuritin的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 Neuritin高表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤的TNM分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、病理學(xué)類型及有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性（均P＞0.05），見表3。

圖4 癌旁正常組織中Neuritin蛋白強(qiáng)陽性表達(dá)（×200）

圖5 陰性對(duì)照（×200）

表1 Neuritin在胃癌及癌旁正常組織中表達(dá)水平比較［n（%）］

表2 Neuritin在胃癌及癌旁正常組織中表達(dá)的強(qiáng)陽性情況［n（%）］

表3 Neuritin的表達(dá)水平與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

續(xù)表3 Neuritin的表達(dá)水平與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討 論

Neuritin是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族中的一種小分子物質(zhì)，之前Neuritin的研究一直集中在神經(jīng)系統(tǒng)，近年來的研究顯示在神經(jīng)系統(tǒng)外的其他組織也有 Neuritin的表達(dá)［5－11］。黃瑾等［7］發(fā)現(xiàn)Neuritin在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞、肝細(xì)胞等正常人體細(xì)胞中存在有表達(dá)。Kojima等［5］發(fā)現(xiàn)Neuritin在心、肺、卵巢也有一定的表達(dá)。Raggo等［12］將轉(zhuǎn)染了Neuritin的3T3細(xì)胞注射到裸鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)相應(yīng)部位可出現(xiàn)腫瘤。巴鵬飛等［9］發(fā)現(xiàn)Neuritin在肺癌組織中存在高表達(dá)，可能參與了肺癌的發(fā)生、發(fā)展。曹健等［13］發(fā)現(xiàn)Neuritin在乳腺癌組織中存在高表達(dá)，且與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)。黃瑾等［7］發(fā)現(xiàn)Neuritin在膀胱癌細(xì)胞及膽管內(nèi)皮癌細(xì)胞等細(xì)胞株中無表達(dá)。而胃癌作為消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，目前國內(nèi)外尚未見Neuritin在胃癌中表達(dá)的研究。

本研究發(fā)現(xiàn)，Neuritin在胃癌及癌旁正常組織中均有表達(dá)，顯微鏡下大部分胃癌癌旁正常組織切片中Neuritin著色為棕黃色，著色細(xì)胞比例大于50%，表明胃癌癌旁正常組織存在Neuritin表達(dá)；顯微鏡下大部分胃癌組織切片中Neuritin著色為棕褐色，著色細(xì)胞比例大于75%，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明胃癌組織中Neuritin的表達(dá)程度明顯高于癌旁正常組織組中Neuritin的表達(dá)程度（P＜0.05），表明Neuritin在胃癌組織中存在高表達(dá)。鐘晨［14］研究表明，Neuritin的高表達(dá)能夠部分抑制Notch信號(hào)途徑配體JAG1蛋白的內(nèi)吞，進(jìn)而抑制Notch信號(hào)途徑的激活。還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)Notch1信號(hào)通路的激活可以抑制胃癌細(xì)胞的增殖［15］。所以，Neuritin的高表達(dá)或許在一定程度上通過影響Notch信號(hào)途徑的激活促進(jìn)了胃癌細(xì)胞的增殖，進(jìn)而影響了胃癌的發(fā)生、發(fā)展。但Neuritin在胃癌組織中的高表達(dá)是否能夠通過影響Notch1通路從而影響胃癌的發(fā)生、發(fā)展，這還有待于進(jìn)一步研究。本研究表明Neuritin的表達(dá)與胃癌患者的年齡、腫瘤的分化程度及病理學(xué)類型無相關(guān)性，這與曹健等［13］在乳腺癌中的研究結(jié)果相似。但是，曹健等［13］發(fā)現(xiàn)Neuritin的表達(dá)與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)，而本研究發(fā)現(xiàn)Neuritin的表達(dá)與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等沒有相關(guān)性，這或許是因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)樣本量有限，有待于擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。

綜上所述，Neuritin在胃癌組織與癌旁正常組織中的表達(dá)水平存在差異，胃癌組織中Neuritin存在高表達(dá)，并且Neuritin有可能成為胃癌預(yù)防和治療的一個(gè)新靶點(diǎn)。

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