姜妍+王妍+金玲+韓淑英

摘 要：為了觀察蕎麥黃酮復(fù)合物對(duì)小鼠真菌性陰道炎的影響，本文采用了體外實(shí)驗(yàn)MTT法評(píng)價(jià)蕎麥黃酮復(fù)合物對(duì)白色念珠菌的抑制作用以及體內(nèi)試驗(yàn)鏡檢陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)目。與模型對(duì)照組相比，各治療組均可以使白色念珠菌減少且陰道上皮細(xì)胞脫落減少。蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量與中藥潔爾陰洗液療效相近似。由此得知，蕎麥黃酮復(fù)合物具有抑制白色念珠菌生長(zhǎng)的能力，并且可以減少陰道上皮細(xì)胞的脫落。

關(guān)鍵詞：蕎麥黃酮復(fù)合物；抗菌活性；白色念珠菌性陰道炎

一、材料

雌性SPF級(jí)昆明小鼠（天津市山川紅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司）；唐山市開灤醫(yī)院檢驗(yàn)科提供白色念珠菌臨床新分離菌株；蕎麥黃酮復(fù)合物（課題組成員已獲得專利）采用正交試驗(yàn)法以水加分離劑（殼聚糖）技術(shù)從蕎麥花葉提取的黃酮成分為主，配伍葛根、天花粉、麥冬、玄參和麻仁的水提物制成；顯微鏡（常州銳品精密儀器有限公司）、流式細(xì)胞儀（Sigma公司）。

二、方法

1.體外實(shí)驗(yàn)。取12支10ml滅菌試管。每支試管加入1.0ml培養(yǎng)基和1.0ml藥液（蕎麥黃酮復(fù)合物，西藥對(duì)照氟康唑和中藥對(duì)照潔爾陰），分別采用試管二倍稀釋法，稀釋倍數(shù)為：1：2～1：512。第11管不加菌液作為空白對(duì)照，第12管作為陽(yáng)性對(duì)照。

2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。將110只昆明雌性小鼠隨機(jī)挑出15只做空白對(duì)照組。剩余60只隔日皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.1ml·d-1使小鼠處于假發(fā)情狀態(tài)，6天后將密度為2.5×106cfu·mL-1的菌懸液20·L（即白色念珠菌孢子接種量為5×104cfu），灌注入小鼠陰道內(nèi)。在接種白色念珠菌孢子后第2與第5天對(duì)小鼠進(jìn)行模型鑒定。將造模成功的50只小鼠進(jìn)行隨機(jī)分組：模型對(duì)照組、西藥氟康唑組、中藥潔爾陰洗液對(duì)照組、蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量組、蕎麥黃酮復(fù)合物中劑量組及蕎麥黃酮復(fù)合物低劑量組。

三、指標(biāo)檢測(cè)

1.體外實(shí)驗(yàn)。采用MTT法，應(yīng)用流式細(xì)胞儀，檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組白色念珠菌數(shù)目。

2.體內(nèi)試驗(yàn)。于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用100ul PBS灌洗陰道5～6次，取10μl灌洗液置于清潔玻片上，鏡檢陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)。頸椎脫臼處死小鼠后，取陰道粘膜，Western-Blot法檢測(cè)各組IGFBP7蛋白含量。

四、統(tǒng)計(jì)分析方法

采用SPSSl6.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以表示。統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別采用卡方檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，P<0.05作為顯著性界限。

五、結(jié)果

1.體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表1顯示，正常對(duì)照組無(wú)白色念珠菌。模型組含有大量白色念珠菌（P<0.01）。中、西陽(yáng)性藥物及蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量組白色念珠菌數(shù)目明顯減少。蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量與中藥潔爾陰洗液對(duì)照組作用相近（P<0.01）。

表1蕎麥黃酮復(fù)合物對(duì)白色念珠菌數(shù)的影響

■

1p<0.05vs正常，2p<0.01vs 正常，3p<0.05vs 模型，4p<0.01vs模型

2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。各組小鼠陰道灌洗液脫落上皮細(xì)胞檢查結(jié)果：見表2。

表2 蕎麥黃酮復(fù)合物對(duì)陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)的影響

■

注：統(tǒng)計(jì)方法采用卡方檢驗(yàn)。χ2=24.263，ν=6，P<0.005，差異有顯著性意義，可以認(rèn)為七組藥物對(duì)小鼠陰道上皮脫落細(xì)胞抑制有差別。

六、討論

目前的研究表明，白念珠菌為該病的主要致病菌，妊娠、口服避孕藥物、糖尿病、使用抗生素以及免疫抑制劑導(dǎo)致的菌群失調(diào)與該病關(guān)系十分密切。迄今為止，臨床對(duì)本病的治療重點(diǎn)還是西醫(yī)抗真菌藥物直接殺滅病原菌，如氟康唑、制霉菌素等。藥物的毒副作用和菌株的耐藥性成為一個(gè)潛在的問題。隨著對(duì)本病認(rèn)識(shí)的深入以及醫(yī)學(xué)微生態(tài)學(xué)的研究，出現(xiàn)了新的替代療法：沖洗療法、乳酸桿菌、硼酸及大蒜素治療等。但是，由于藥物帶來(lái)的副作用或者使用的不便利性，一直沒有廣泛應(yīng)用于臨床。近年來(lái)，我國(guó)醫(yī)學(xué)不斷發(fā)展，中藥制劑新劑型不斷涌現(xiàn)，許多學(xué)者應(yīng)用念珠菌動(dòng)物模型，對(duì)中藥制劑的安全性及有效性進(jìn)行了研究。本次試驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)蕎麥黃酮復(fù)合物具有逆轉(zhuǎn)陰道上皮細(xì)胞脫落的作用，并且體外實(shí)驗(yàn)證明其可以抑制白色念珠菌生長(zhǎng)。而在藥物的副作用及遠(yuǎn)期療效方面的研究不夠深入。在以后的工作中，還可以篩選劑型穩(wěn)定、效高、價(jià)廉、副作用少、順應(yīng)性好的藥物進(jìn)行廣泛、多層次研究，以更好地服務(wù)于患者。

摘 要：為了觀察蕎麥黃酮復(fù)合物對(duì)小鼠真菌性陰道炎的影響，本文采用了體外實(shí)驗(yàn)MTT法評(píng)價(jià)蕎麥黃酮復(fù)合物對(duì)白色念珠菌的抑制作用以及體內(nèi)試驗(yàn)鏡檢陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)目。與模型對(duì)照組相比，各治療組均可以使白色念珠菌減少且陰道上皮細(xì)胞脫落減少。蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量與中藥潔爾陰洗液療效相近似。由此得知，蕎麥黃酮復(fù)合物具有抑制白色念珠菌生長(zhǎng)的能力，并且可以減少陰道上皮細(xì)胞的脫落。

關(guān)鍵詞：蕎麥黃酮復(fù)合物；抗菌活性；白色念珠菌性陰道炎

一、材料

雌性SPF級(jí)昆明小鼠（天津市山川紅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司）；唐山市開灤醫(yī)院檢驗(yàn)科提供白色念珠菌臨床新分離菌株；蕎麥黃酮復(fù)合物（課題組成員已獲得專利）采用正交試驗(yàn)法以水加分離劑（殼聚糖）技術(shù)從蕎麥花葉提取的黃酮成分為主，配伍葛根、天花粉、麥冬、玄參和麻仁的水提物制成；顯微鏡（常州銳品精密儀器有限公司）、流式細(xì)胞儀（Sigma公司）。

二、方法

1.體外實(shí)驗(yàn)。取12支10ml滅菌試管。每支試管加入1.0ml培養(yǎng)基和1.0ml藥液（蕎麥黃酮復(fù)合物，西藥對(duì)照氟康唑和中藥對(duì)照潔爾陰），分別采用試管二倍稀釋法，稀釋倍數(shù)為：1：2～1：512。第11管不加菌液作為空白對(duì)照，第12管作為陽(yáng)性對(duì)照。

2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。將110只昆明雌性小鼠隨機(jī)挑出15只做空白對(duì)照組。剩余60只隔日皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.1ml·d-1使小鼠處于假發(fā)情狀態(tài)，6天后將密度為2.5×106cfu·mL-1的菌懸液20·L（即白色念珠菌孢子接種量為5×104cfu），灌注入小鼠陰道內(nèi)。在接種白色念珠菌孢子后第2與第5天對(duì)小鼠進(jìn)行模型鑒定。將造模成功的50只小鼠進(jìn)行隨機(jī)分組：模型對(duì)照組、西藥氟康唑組、中藥潔爾陰洗液對(duì)照組、蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量組、蕎麥黃酮復(fù)合物中劑量組及蕎麥黃酮復(fù)合物低劑量組。

三、指標(biāo)檢測(cè)

1.體外實(shí)驗(yàn)。采用MTT法，應(yīng)用流式細(xì)胞儀，檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組白色念珠菌數(shù)目。

2.體內(nèi)試驗(yàn)。于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用100ul PBS灌洗陰道5～6次，取10μl灌洗液置于清潔玻片上，鏡檢陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)。頸椎脫臼處死小鼠后，取陰道粘膜，Western-Blot法檢測(cè)各組IGFBP7蛋白含量。

四、統(tǒng)計(jì)分析方法

采用SPSSl6.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以表示。統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別采用卡方檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，P<0.05作為顯著性界限。

五、結(jié)果

1.體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表1顯示，正常對(duì)照組無(wú)白色念珠菌。模型組含有大量白色念珠菌（P<0.01）。中、西陽(yáng)性藥物及蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量組白色念珠菌數(shù)目明顯減少。蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量與中藥潔爾陰洗液對(duì)照組作用相近（P<0.01）。

表1蕎麥黃酮復(fù)合物對(duì)白色念珠菌數(shù)的影響

■

1p<0.05vs正常，2p<0.01vs 正常，3p<0.05vs 模型，4p<0.01vs模型

2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。各組小鼠陰道灌洗液脫落上皮細(xì)胞檢查結(jié)果：見表2。

表2 蕎麥黃酮復(fù)合物對(duì)陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)的影響

■

注：統(tǒng)計(jì)方法采用卡方檢驗(yàn)。χ2=24.263，ν=6，P<0.005，差異有顯著性意義，可以認(rèn)為七組藥物對(duì)小鼠陰道上皮脫落細(xì)胞抑制有差別。

六、討論

目前的研究表明，白念珠菌為該病的主要致病菌，妊娠、口服避孕藥物、糖尿病、使用抗生素以及免疫抑制劑導(dǎo)致的菌群失調(diào)與該病關(guān)系十分密切。迄今為止，臨床對(duì)本病的治療重點(diǎn)還是西醫(yī)抗真菌藥物直接殺滅病原菌，如氟康唑、制霉菌素等。藥物的毒副作用和菌株的耐藥性成為一個(gè)潛在的問題。隨著對(duì)本病認(rèn)識(shí)的深入以及醫(yī)學(xué)微生態(tài)學(xué)的研究，出現(xiàn)了新的替代療法：沖洗療法、乳酸桿菌、硼酸及大蒜素治療等。但是，由于藥物帶來(lái)的副作用或者使用的不便利性，一直沒有廣泛應(yīng)用于臨床。近年來(lái)，我國(guó)醫(yī)學(xué)不斷發(fā)展，中藥制劑新劑型不斷涌現(xiàn)，許多學(xué)者應(yīng)用念珠菌動(dòng)物模型，對(duì)中藥制劑的安全性及有效性進(jìn)行了研究。本次試驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)蕎麥黃酮復(fù)合物具有逆轉(zhuǎn)陰道上皮細(xì)胞脫落的作用，并且體外實(shí)驗(yàn)證明其可以抑制白色念珠菌生長(zhǎng)。而在藥物的副作用及遠(yuǎn)期療效方面的研究不夠深入。在以后的工作中，還可以篩選劑型穩(wěn)定、效高、價(jià)廉、副作用少、順應(yīng)性好的藥物進(jìn)行廣泛、多層次研究，以更好地服務(wù)于患者。

摘 要：為了觀察蕎麥黃酮復(fù)合物對(duì)小鼠真菌性陰道炎的影響，本文采用了體外實(shí)驗(yàn)MTT法評(píng)價(jià)蕎麥黃酮復(fù)合物對(duì)白色念珠菌的抑制作用以及體內(nèi)試驗(yàn)鏡檢陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)目。與模型對(duì)照組相比，各治療組均可以使白色念珠菌減少且陰道上皮細(xì)胞脫落減少。蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量與中藥潔爾陰洗液療效相近似。由此得知，蕎麥黃酮復(fù)合物具有抑制白色念珠菌生長(zhǎng)的能力，并且可以減少陰道上皮細(xì)胞的脫落。

關(guān)鍵詞：蕎麥黃酮復(fù)合物；抗菌活性；白色念珠菌性陰道炎

一、材料

雌性SPF級(jí)昆明小鼠（天津市山川紅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司）；唐山市開灤醫(yī)院檢驗(yàn)科提供白色念珠菌臨床新分離菌株；蕎麥黃酮復(fù)合物（課題組成員已獲得專利）采用正交試驗(yàn)法以水加分離劑（殼聚糖）技術(shù)從蕎麥花葉提取的黃酮成分為主，配伍葛根、天花粉、麥冬、玄參和麻仁的水提物制成；顯微鏡（常州銳品精密儀器有限公司）、流式細(xì)胞儀（Sigma公司）。

二、方法

1.體外實(shí)驗(yàn)。取12支10ml滅菌試管。每支試管加入1.0ml培養(yǎng)基和1.0ml藥液（蕎麥黃酮復(fù)合物，西藥對(duì)照氟康唑和中藥對(duì)照潔爾陰），分別采用試管二倍稀釋法，稀釋倍數(shù)為：1：2～1：512。第11管不加菌液作為空白對(duì)照，第12管作為陽(yáng)性對(duì)照。

2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。將110只昆明雌性小鼠隨機(jī)挑出15只做空白對(duì)照組。剩余60只隔日皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.1ml·d-1使小鼠處于假發(fā)情狀態(tài)，6天后將密度為2.5×106cfu·mL-1的菌懸液20·L（即白色念珠菌孢子接種量為5×104cfu），灌注入小鼠陰道內(nèi)。在接種白色念珠菌孢子后第2與第5天對(duì)小鼠進(jìn)行模型鑒定。將造模成功的50只小鼠進(jìn)行隨機(jī)分組：模型對(duì)照組、西藥氟康唑組、中藥潔爾陰洗液對(duì)照組、蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量組、蕎麥黃酮復(fù)合物中劑量組及蕎麥黃酮復(fù)合物低劑量組。

三、指標(biāo)檢測(cè)

1.體外實(shí)驗(yàn)。采用MTT法，應(yīng)用流式細(xì)胞儀，檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組白色念珠菌數(shù)目。

2.體內(nèi)試驗(yàn)。于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用100ul PBS灌洗陰道5～6次，取10μl灌洗液置于清潔玻片上，鏡檢陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)。頸椎脫臼處死小鼠后，取陰道粘膜，Western-Blot法檢測(cè)各組IGFBP7蛋白含量。

四、統(tǒng)計(jì)分析方法

采用SPSSl6.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以表示。統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別采用卡方檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，P<0.05作為顯著性界限。

五、結(jié)果

1.體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表1顯示，正常對(duì)照組無(wú)白色念珠菌。模型組含有大量白色念珠菌（P<0.01）。中、西陽(yáng)性藥物及蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量組白色念珠菌數(shù)目明顯減少。蕎麥黃酮復(fù)合物高劑量與中藥潔爾陰洗液對(duì)照組作用相近（P<0.01）。

表1蕎麥黃酮復(fù)合物對(duì)白色念珠菌數(shù)的影響

■

1p<0.05vs正常，2p<0.01vs 正常，3p<0.05vs 模型，4p<0.01vs模型

2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。各組小鼠陰道灌洗液脫落上皮細(xì)胞檢查結(jié)果：見表2。

表2 蕎麥黃酮復(fù)合物對(duì)陰道上皮脫落細(xì)胞數(shù)的影響

■

注：統(tǒng)計(jì)方法采用卡方檢驗(yàn)。χ2=24.263，ν=6，P<0.005，差異有顯著性意義，可以認(rèn)為七組藥物對(duì)小鼠陰道上皮脫落細(xì)胞抑制有差別。

六、討論

目前的研究表明，白念珠菌為該病的主要致病菌，妊娠、口服避孕藥物、糖尿病、使用抗生素以及免疫抑制劑導(dǎo)致的菌群失調(diào)與該病關(guān)系十分密切。迄今為止，臨床對(duì)本病的治療重點(diǎn)還是西醫(yī)抗真菌藥物直接殺滅病原菌，如氟康唑、制霉菌素等。藥物的毒副作用和菌株的耐藥性成為一個(gè)潛在的問題。隨著對(duì)本病認(rèn)識(shí)的深入以及醫(yī)學(xué)微生態(tài)學(xué)的研究，出現(xiàn)了新的替代療法：沖洗療法、乳酸桿菌、硼酸及大蒜素治療等。但是，由于藥物帶來(lái)的副作用或者使用的不便利性，一直沒有廣泛應(yīng)用于臨床。近年來(lái)，我國(guó)醫(yī)學(xué)不斷發(fā)展，中藥制劑新劑型不斷涌現(xiàn)，許多學(xué)者應(yīng)用念珠菌動(dòng)物模型，對(duì)中藥制劑的安全性及有效性進(jìn)行了研究。本次試驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)蕎麥黃酮復(fù)合物具有逆轉(zhuǎn)陰道上皮細(xì)胞脫落的作用，并且體外實(shí)驗(yàn)證明其可以抑制白色念珠菌生長(zhǎng)。而在藥物的副作用及遠(yuǎn)期療效方面的研究不夠深入。在以后的工作中，還可以篩選劑型穩(wěn)定、效高、價(jià)廉、副作用少、順應(yīng)性好的藥物進(jìn)行廣泛、多層次研究，以更好地服務(wù)于患者。