吳曉鵬+周學(xué)明+張俊燕

摘 要 研究瓊島染木樹莖中蒽醌類成分及其抗菌活性。綜合運(yùn)用多種色譜技術(shù)對(duì)瓊島染木樹莖的乙醇提取物進(jìn)行分離純化，通過核磁及質(zhì)譜對(duì)所得單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，并通過微量稀釋法對(duì)化合物進(jìn)行抗菌活性測(cè)試，結(jié)果表明，從瓊島染木樹莖的乙醇提取物中分離得到12個(gè)蒽醌類化合物。經(jīng)鑒定，分別為：（1）虎刺醇；（2）3-羥基-1-甲氧基-2-甲酯基蒽醌；（3）6-羥基-1-甲氧基-2-甲基蒽醌；（4）2-羥基-3-甲基蒽醌；（5）3-羥基-1，2-二甲氧基蒽醌；（6）2-羥基-1-甲氧基蒽醌；（7）1，3-二羥基-2-甲基蒽醌；（8）1，6-二羥基-2-甲基蒽醌；（9）1，3，6-三羥基-2-甲基蒽醌；（10）3-羥基-1-甲氧基-2-甲醚基蒽醌；（11）2-羥甲基-3-羥基蒽醌；（12）3-O-β-primeveroside。抗菌活性表明，大多蒽醌類化合物具有較好的抗菌活性。

關(guān)鍵詞 染木樹屬 ；瓊島染木樹 ；蒽醌 ；抗菌活性

中圖分類號(hào) O629

Abstract To study the antibacterial anthraquinone derivatives from the stems of Saprosma merrillii Lo. The compounds were isolated and purified by silica gel column， Sephadex LH-20 and Semi-Preparative HPLC. The structures of all compounds were elucidated on the basis of NMR and MS analysis. Antibacterial activity of all compounds was determined by the conventional broth dilution assay. Twelve anthraquinone derivatives were isolated and elucidated as damnacanthol：（1） 3-hydroxy-1-methoxy-2-carbomethoxyanthraquinone；（2） 6-hydroxy-1-methoxy-2-methylanthraquinone；（3） 2-hydroxy-3-methylanthraquinone；（4） 3-hydroxy-1，2-dimethoxyanthraquinone；（5） 2-hydroxy-1-methoxyanthraquinone；（6） 1，3-dihydroxy-2-methylanthraquinone；（7） 1，6-dihydroxy-2-methylanthraquinone；（8） 1，3，6-trihydroxy-2-methylanthraquinone； （9） 3-hydroxy-1-methoxy-2-methyl etheranthraquinone；（10） 2-hydroxymethyl-3-hydroxyanthraquinone；（11） and 3-O-β-primeveroside；（12） All compounds were isolated from this plant for the first time. Many of these compounds showed antibacterial activities.

Key words saprosma ； Saprosma merrillii ； anthraquinone ； antibacterial activities

瓊島染木樹（saprosma merrillii）屬于茜草科（Rubiaceae）染木樹屬（saprosma）植物，是海南特有藥用植物。染木樹屬植物作為民間藥物已有悠久的歷史，主要用于消炎退熱、腰腿疼痛的治療[1]。研究表明，染木樹屬植物主要含有環(huán)烯醚萜苷、生物堿、蒽醌以及三萜類化合物，具有抗氧化、抗菌以及抗腫瘤等多種生物活性[2-6]。本課題組前期從瓊島染木樹中發(fā)現(xiàn)了3個(gè)新三萜化合物、2個(gè)新硫代環(huán)烯醚萜苷和1個(gè)新酚苷類化合物，然而它們的抗菌活性并不明顯[7-9]。為了進(jìn)一步明確該植物中的抗菌活性成分，本課題組研究人員進(jìn)一步對(duì)其莖的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)分離。本研究運(yùn)用活性追蹤法對(duì)瓊島染木樹的乙醇提取物采用多種色譜技術(shù)進(jìn)行分離，通過NMR以及MS等多種波譜技術(shù)確定了化合物的結(jié)構(gòu)，并采用微量稀釋法對(duì)所有化合物進(jìn)行了7種致病菌的抗菌活性測(cè)試。

1 材料與方法

1.1 材料

瓊島染木樹莖于2014年6月采自海南省三亞市，經(jīng)海南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院鐘瓊芯教授鑒定為瓊島染木樹。

Bruker AV-400 MHz型核磁共振儀；Finnigan-MAT-95-MS低分辨質(zhì)譜儀（德國(guó)Finnigan公司）；安捷倫1260半制備高效液相（Agilent Eclipse XDB-C18柱：9.4×250 mm，5 μm）；十八烷基硅膠（12 nm-50 μm）（日本東京YMC公司）；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20[安法瑪西亞技術(shù)（上海）有限公司]；柱層析硅膠和薄層層析硅膠板（青島海洋化工廠）；色譜試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 化合物萃取、分離與純化

瓊島染木樹干燥的莖（4.5 kg）粉碎成粉末后用85 %的乙醇于室溫下浸泡（3×30 L，每次3 d）。過濾浸泡液并減壓濃縮得到乙醇浸膏，將乙醇浸膏分散在蒸餾水中再依次用石油醚、乙酸乙酯萃取并減壓濃縮得到石油醚部位（60 g）、乙酸乙酯部位（95 g）。將所得的乙酸乙酯部位用100目-200目硅膠拌樣，采用硅膠常壓柱依次用石油醚-乙酸乙酯（100：0→0：100，V/V）和氯仿-甲醇（2：1→1：1，V/V）進(jìn)行梯度洗脫。經(jīng)TLC檢測(cè)后合并相似流分后得5個(gè)組分（Fr.1-5）。Fr.2（15 g）組分用200-300目硅膠拌樣上柱用石油醚-乙酸乙酯（15：1，V/V）進(jìn)行洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)后合并相似流分后得3個(gè)小組分（Fr.2 a-2 c）。Fr.2 a由半制備高效液相（乙腈：水=60：40，V/V）進(jìn)行純化得到化合物3（12 mg）、4（8 mg）以及6（7 mg）；Fr.2b由半制備高效液相（甲醇：水=65：35，V/V）進(jìn)行分離純化得到化合物2（5 mg）以及化合物11（9 mg）。Fr.3（10 g）組分用200目-300目硅膠拌樣上柱用石油醚-乙酸乙酯（8：1，V/V）進(jìn)行洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)后合并相似流分后得3個(gè)小組分（Fr.3 a-3 c）。Fr.3a由凝膠柱（氯仿：甲醇=1：1，V/V）純化后得到化合物8（21 mg）。Fr.3 b由半制備高效液相（乙腈：水=51：49，V/V）進(jìn)行分離純化得到化合物1（6 mg）、化合物5（8 mg）以及化合物7（9 mg）。Fr.3 c由凝膠柱（氯仿：甲醇=1：1，V/V）除色素后再由半制備高效液相（乙腈：水=45：55，V/V）進(jìn)行分離純化得到化合物9（9 mg）以及化合物10（3 mg）。Fr.5（8 g）組分由ODS柱（甲醇：水=20：80，V/V）純化分離得到化合物12（10 mg）。

1.2.2 抗菌活性測(cè)試

采用微量稀釋法[10]對(duì)所有化合物進(jìn)行了抗菌活性測(cè)試，供試細(xì)菌為金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、四聯(lián)球菌（Micrococcus tetragenus）、白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）、大腸桿菌（Escherichia coli）、 藤黃八疊球菌（Micrococcus luteus）和蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus）7種。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

2.1.1 化合物1

淡黃色針晶（甲醇），mp 292-294 ℃。ESI-MS：m/z 307[M+Na]+。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：8.14（1H，d，J= 8.0 Hz，H-8），8.09（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），7.88（1H，dd，J=8.0，8.0 Hz，H-7），7.83（1H，dd，J=8.0，8.0 Hz，H-6），7.50（1H，s，H-4），4.56（2H，s，H-15），3.85（3H，s，1-OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：182.5（C-10），180.0（C-9），162.1（C-3），161.7（C-1），135.4（C-4a），134.6（C-7，8a），133.3（C-6），132.0 （C-10a），128.8（C-2），126.7（C-8），126.1（C-5），117.9（C-9a），109.8（C-4），62.4（5-OCH3），52.2（C-15）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道的虎刺醇一致，故鑒定化合物1為虎刺醇。

2.1.2 化合物2

淡黃色粉末（甲醇），mp 311-313 ℃。ESI-MS：m/z 335 [M+Na]+。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：8.14 （2H，d，J=7.6 Hz，H-5，8），7.80（2H，d，J=7.6 Hz，H-6，7），7.56（1H，s，H-4），3.86（3H，s，11-OCH3），3.84（3H，s，1-OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：182.1（C-10），179.6（C-9），164.9（C-11），159.6（C-3），159.5（C-1），136.9（C-4a），134.7（C-6），134.7（C-6），134.3（C-10a），133.6（C-7），132.0（C-8a），126.7（C-8），126.3（C-5），123.3（C-2），117.7（C-9a），110.1（C-4），62.6（1-OCH3），52.4（11-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道的3-羥基-1-甲氧基-2-甲酯基蒽醌一致，故鑒定化合物2為3-羥基-1-甲氧基-2-甲酯基蒽醌。

2.1.3 化合物3

淡黃色粉末（甲醇），mp 295-297 ℃。ESI-MS： m/z 291[M+Na]+。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：13.19（1H，s，6-OH），8.23（1H，d，J=8.0 Hz，H-8），7.66（1H，d，J=7.2 Hz，H-4），7.64（1H，d，J=7.2 Hz，H-3），7.63（1H，s，H-5），7.34（1H，d，J=8.0 Hz，H-7），3.90（3H，s，1-OCH3），2.34（3H，s，2-CH3）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz） δ：189.6（C-9），182.2（C-10），164.5（C-1），161.7（C-6），137.7（C-9a），137.2（C-4a），135.4（C-3），132.7（C-2），130.7（C-8），126.6（C-8a），122.1（C-7），119.5（C-4），116.0（C-10a），113.6（C-5），123.3（C-2），117.7（C-9a），110.1（C-4），56.7（1-OCH3），16.0（2-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道的6-羥基-1-甲氧基-2-甲基蒽醌一致，故鑒定化合物3為6-羥基-1-甲氧基-2-甲基蒽醌。

2.1.4 化合物4

淡黃色粉末（甲醇），mp 299-301 ℃。ESI-M：m/z 261[M+Na]+。1H-NMR（Acetone-d6，400 MHz） δ：8.16（1H，d，J=8.0 Hz，H-8），8.13（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），7.93（1H，s，H-4），7.88（1H，dd，J=8.0，8.0 Hz，H-7），7.84（1H，dd，J=8.0，8.0 Hz，H-6），7.50（1H，s，H-1），2.24（3H，s，3-CH3）；13C-NMR（Acetone-d6，100 MHz）δ：182.6（C-9），181.3（C-10），161.4（C-2），133.7（C-6），133.6（C-8a），133.5（C-4 a，10 a），134.1（C-7），132.0（C-9 a），130.0（C-3），126.7（C-8），126.5（C-5），125.5（C-4），111.4（C-1），16.5（2-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]的2-羥基-3-甲基蒽醌報(bào)道一致，故鑒定化合物4為2-羥基-3-甲基蒽醌。

2.1.5 化合物5

淡黃色針晶（甲醇），mp 235-237 ℃。ESI-M：m/z 307[M+Na]+。1H-NMR（Acetone-d6，400 MHz）δ：8.12（1H，d，J=7.6 Hz，H-8），8.10（1H，d，J=7.6 Hz，H-5），7.88（1H，dd，J=7.6，7.6 Hz，H-7），7.83（1H，dd，J=7.6，7.6 Hz，H-6），7.52（1H，s，H-4），3.86（3H，s，1-OCH3），3.83（3H，s，2-OCH3）；13C-NMR（Acetone-d6，100 MHz）δ：181.5（C-10），179.7（C-9），155.7（C-3），154.5（C-1），146.5（C-2），134.1（C-8a），133.9（C-7），132.9（C-6），131.5（C-10 a），129.8（C-4 a），126.0（C-8），125.5（C-5），118.7（C-9 a），110.3（C-4），60.7（1-OCH3），60.1（2-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]的3-羥基-1，2-二甲氧基蒽醌報(bào)道一致，故鑒定化合物5為3-羥基-1，2-二甲氧基蒽醌。

2.1.6 化合物6

淡黃色粉末（甲醇），mp 178-179 ℃。ESI-M：m/z 277[M+Na]+。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：8.56（1H，d，J=8.0 Hz，H-3），8.32（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），8.30（1H，d，J=8.0 Hz，H-8），8.10（1H，d，J=8.0 Hz，H-4），7.82（1H，dd，J=8.0，8.0 Hz，H-7），7.80（1H，dd，J=8.0，8.0 Hz，H-6），4.00（3H，s，1-OCH3）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：182.7（C-9），182.1（C-10），155.6（C-2），146.6（C-1），134.5（C-8 a），133.9（C-6，7），132.9（C-4 a），127.5（C-10 a），127.1（C-5），126.9（C-8），125.8（C-4），125.7（C-9 a），120.3（C-3），62.3（1-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道的2-羥基-1-甲氧基蒽醌一致，故鑒定化合物6為2-羥基-1-甲氧基蒽醌。

2.1.7 化合物7

淡黃色粉末（甲醇），mp 291-292 ℃。ESI-MS：m/z 277[M+Na]+。1H-NMR（Acetone-d6，400 MHz）δ：13.22（1H，s，1-OH），8.29（1H，d，J=8.0 Hz，H-8），8.21（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），7.91（1H，dd，J=8.0，8.0 Hz，H-7），7.90（1H，dd，J=8.0，8.0 Hz，H-6），7.36（1H，s，H-4），2.18（3H，s，2-CH3）；13C-NMR（Acetone-d6，100 MHz）δ：187.6（C-9），182.7（C-10），164.2（C-3），163.4（C-1），135.1（C-7），134.9（C-6），134.4（C-8 a），133.3（C-10 a），132.4（C-4 a），127.7（C-5），127.4（C-8），118.9（C-2），110.7（C-9 a），108.1（C-4），8.2（2-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道的1，3-二羥基-2-甲基蒽醌一致，故鑒定化合物7為1，3-二羥基-2-甲基蒽醌。

2.1.8 化合物8

淡黃色粉末（甲醇），mp 287-289 ℃。ESI-MS：m/z 277[M+Na]+。1H-NMR（Acetone-d6，400 MHz）δ：13.19（1H，s，1-OH），8.23（1H，d，J=8.0 Hz，H-8），7.66（1H，d，J=8.0 Hz，H-4），7.64（1H，d，J=8.0 Hz，H-3），7.63（1H，s，H-5），7.34（1H，d，J=8.0 Hz，H-7），2.34（3H，s，2-CH3）；13C-NMR（Acetone-d6，100 MHz）δ：189.6（C-9），182.2（C-10），164.5（C-1），161.7（C-6），137.7（C-9 a），137.2（C-4 a），135.4（C-3），134.4 （C-8 a），132.7（C-2），130.7（C-8），126.6（C-8 a），122.1（C-7），119.5（C-4），116.0（C-10 a），113.6（C-5），16.0（2-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道的1，6-二羥基-2-甲基蒽醌一致，故鑒定化合物8為1，6-二羥基-2-甲基蒽醌。

2.1.9 化合物9

淡黃色粉末（甲醇），mp 238-239 ℃。ESI-MS： m/z 293[M+Na]+。1H-NMR（Acetone-d6，400 MHz）δ：7.99（1H，d，J=8.4 Hz，H-8），7.39（1H，d，J=2.8 Hz，H-5），7.07（1H，dd，J=8.4，2.8 Hz，H-7），7.06（1H，s，H-4），2.05（3H，s，2-CH3）；13C-NMR（Acetone-d6，100 MHz）δ：187.4（C-9），183.8（C-10），164.4（C-3），164.0（C-1），163.4（C-6），133.5（C-4 a，10 a），130.4（C-8），126.8（C-8 a），122.0（C-7），119.4（C-2），113.6（C-5），109.3（C-9 a），108.0（C-4），8.2（2-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道的1，3，6，-三羥基-2-甲基蒽醌一致，故鑒定化合物9為1，3，6，-三羥基-2-甲基蒽醌。

2.1.10 化合物10

淡黃色粉末（甲醇），mp 195-196 ℃。ESI-MS：m/z 321[M+Na]+。1H-NMR（Acetone-d6，400 MHz）δ：8.26（1H，d，J=8.4 Hz，H-8），8.24（1H，d，J=8.4 Hz，H-5），7.78（1H，dd，J=8.4，8.0 Hz，H-7），7.76（1H，dd，J=8.4，8.0 Hz，H-6），7.61（1H，s，H-4），4.97（2H，s，H-11），3.91（3H，s，11-OCH3），3.56（3H，s，1-OCH3）；13C-NMR（Acetone-d6，100 MHz）δ：182.9（C-9），181.2（C-10），162.7（C-1），160.1（C-3），136.6（C-8 a），135.0（C-10 a），134.4（C-4 a），133.4（C-8），132.8（C-6），127.3 （C-7），126.8（C-5），122.5（C-9 a），118.7（C-2），112.5（C-4），69.5（C-11），62.2（11-OCH3），59.4 （1-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]報(bào)道的3-羥基-1-甲氧基-2-甲醚基蒽醌一致，故鑒定化合物10為3-羥基-1-甲氧基-2-甲醚基蒽醌。

2.1.11 化合物11

淡黃色粉末（甲醇），mp 225-227 ℃。ESI-MS：m/z 277[M+Na]+。1H-NMR （Acetone-d6，400 MHz）δ：8.25（1H，s，H-4），8.20（2H，m，H-6，7），7.89（2H，m，H-5，8），7.53（1H，s，H-1），4.60（2H，s，C-11）；13C-NMR （Acetone-d6，100 MHz）δ：182.7（C-9），181.4（C-10），160.1（C-3），136.4（C-8 a），134.4（C-7），133.9（C-6），133.4（C-4 a），133.3（C-10 a），133.1（C-9 a），126.6（C-5），126.5（C-8），126.2（C-1），118.7（C-9 a），124.8（C-2），111.3（C-4），57.7（C-11）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報(bào)道的2-羥甲基-3-羥基蒽醌一致，故鑒定化合物11為2-羥甲基-3-羥基蒽醌。

2.1.12 化合物12

淡黃色粉末（甲醇），mp 211-212 ℃。ESI-MS：m/z 587[M+Na]+。1H-NMR（Acetone-d6，400 MHz）δ：13.06（1H，s，1-OH），8.25（1H，dd，J=8.0， 2.0 Hz，H-8），8.24（1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-5），8.19（1H，m，H-7），8.17（1H，m，H-6），7.18（1H，s，H-4），5.14（1H，d，J=7.6 Hz，H-1'），4.62（2H，s，H-11），4.15（1H，d，J=7.2 Hz，H-1"），3.94（1H，d，J=9.2 Hz，H-6'a），3.69（2H，m，H-5'，5"），3.68（1H，m，H-6'b），3.55（2H，m，H-4'，4"），3.22（2H，m，H-3'，3"），2.99（2H，m，H-2'，2"）；13C-NMR （Acetone-d6，100 MHz）δ：187.6（C-9），182.0（C-10），162.4（C-1），162.3（C-3），135.3（C-7），135.2（C-6），134.2（C-10 a），133.4（C-4 a），133.2（C-8 a），127.3（C-8），127.0（C-5），123.9（C-2），111.8（C-9 a），106.8（C-4），104.5（C-4"），101.1（C-1'），76.9（C-5'），76.2（C-3'），76.1（C-3"），73.7（C-2'，2"），69.9（C-4"），69.5（C-4'），68.4（C-6'），66.1（C-5"），51.4（C-11）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]報(bào)道的lucidin 3-O-β-primeveroside一致，故鑒定化合物12為lucidin 3-O-β-primeveroside。

2.2 抗菌活性

由表1可知，化合物3對(duì)金黃色葡萄球菌有較好的抑制活性，其最小抑菌濃度MIC為1.25 μg/mL；化合物5對(duì)藤黃微球菌有較好的抑制活性，其MIC為1.25 μg/mL；化合物6對(duì)蠟狀芽胞桿菌有較好的抑制活性，其MIC為1.25 μg/mL；化合物7對(duì)大腸桿菌有較好的抑制活性，其MIC為1.25 μg/mL。

3 結(jié)論

本研究綜合運(yùn)用多種色譜技術(shù)對(duì)瓊島染木樹莖的乙醇提取物進(jìn)行分離純化，通過核磁及質(zhì)譜對(duì)所得單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定及通過微量稀釋法對(duì)化合物進(jìn)行抗菌活性測(cè)試，結(jié)果表明，從瓊島染木樹莖的乙醇提取物中分離得到12個(gè)蒽醌類化合物。經(jīng)鑒定，分別為：（1）虎刺醇；（2）3-羥基-1-甲氧基-2-甲酯基蒽醌；（3）6-羥基-1-甲氧基-2-甲基蒽醌；（4）2-羥基-3-甲基蒽醌；（5）3-羥基-1，2-二甲氧基蒽醌；（6）2-羥基-1-甲氧基蒽醌；（7）1，3-二羥基-2-甲基蒽醌；（8）1，6-二羥基-2-甲基蒽醌；（9）1，3，6-三羥基-2-甲基蒽醌；（10）3-羥基-1-甲氧基-2-甲醚基蒽醌；（11）2-羥甲基-3-羥基蒽醌；（12）3-O-β-primeveroside?？咕钚员砻鳎祯惢衔锞哂休^好的抗菌活性。

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