王貴軍+弓強(qiáng)

摘 要：為滿足栽培對(duì)種苗的需要，以款冬葉片為材料，進(jìn)行了愈傷組織誘導(dǎo)與分化，不定芽生根，試管苗的生根繼代、移栽和定植的研究。結(jié)果表明：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L是葉片愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基；MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L是愈傷組織分化培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基；1/2MS+NAA0.5mg/L+活性炭0.05%是不定芽根培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基。

關(guān)鍵詞：款冬；組織培養(yǎng)；培養(yǎng)基

中圖分類號(hào)S567.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A 文章編號(hào)1007-7731（2014）14-27-02

款冬別名蜂斗菜、水斗菜，系菊科多年生草本藥用植物，以其未開放的頭狀花序入藥，性溫，味甘，辛，微苦，有潤(rùn)肺、化痰、止咳等功效。款冬市場(chǎng)行情一直處于穩(wěn)定上升趨勢(shì)，市場(chǎng)銷量好，價(jià)格高，有很好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。但是，由于目前款冬遺傳育種基礎(chǔ)研究的缺乏和品種退化的問(wèn)題，其種苗供應(yīng)難以滿足當(dāng)前市場(chǎng)的需求。為此，筆者對(duì)款冬組織培養(yǎng)及快速繁殖進(jìn)行了研究，以期縮短新品種育成年限、提高育種效率，提供足夠的健康種苗。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及其處理方法 把生長(zhǎng)旺盛、無(wú)病害的幼嫩款冬葉片采回實(shí)驗(yàn)室，洗衣粉水中浸泡5min，自來(lái)水沖洗數(shù)次，除去殘余。在超凈工作臺(tái)上，用70%的酒精滅菌30s，無(wú)菌水沖洗1～2次，然后用0.1%的HgCl2滅菌5～6min，無(wú)菌水沖洗5～6次，并用濾紙吸干材料表面水分，滅菌后的材料切成0.5cm×0.5cm的小塊，分別接入不同的培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。以MS、1/2MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的6-BA、NAA、IAA。固體培養(yǎng)基力強(qiáng)度為200g/cm2。以MS為基本培養(yǎng)基加蔗糖30g/L，1/2MS為基本培養(yǎng)基加蔗糖15g/L。光照強(qiáng)度2 500～3 000lx；光照時(shí)間12h/d；培養(yǎng)基pH為5.8～6.0；培養(yǎng)溫度（25±2）℃。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng) 在超凈工作臺(tái)上，將無(wú)菌葉片切割成0.5cm×0.5cm的小塊，迅速接種到以MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度（6-BA，NAA）的培養(yǎng)基上，進(jìn)行嫩莖愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基接種50個(gè)小塊葉片，重復(fù)2次，培養(yǎng)25～30d（表1）。

表1 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)

[培養(yǎng)基編號(hào)&6-BA（mg/L）&NAA（mg/L）&接種塊數(shù)&1&0.1&0.1&50&2&0.3&0.1&50&3&0.5&0.1&50&4&1.0&0.1&50&5&1.0&0.2&50&]

1.2.2 芽的誘導(dǎo)分化培養(yǎng) 將已經(jīng)產(chǎn)生愈傷組織的良好外植體，以MS為基本培養(yǎng)基附加不同濃度的激素組合進(jìn)行試驗(yàn)（6-BA，NAA）直接繼代到新的培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)15～20d（表2）。

表2 芽的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)

[培養(yǎng)基編號(hào)&6-BA（mg/L）&NAA（mg/L）&接種數(shù)&1&1.0&0.1&50&2&2.0&0.2&50&3&3.0&0.2&50&4&3.0&0.3&50&5&4.0&0.3&50&]

1.2.3 無(wú)根苗的增殖培養(yǎng) 取具有展開小葉的叢生芽，接種在原分化培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，可在短期時(shí)間內(nèi)達(dá)到快速繁殖的目的（表3）。

表3 芽的增殖培養(yǎng)

[培養(yǎng)基編號(hào)&6-BA（mg/L）&NAA（mg/L）&接種數(shù)&1&1.0&0.1&50&2&2.0&0.2&50&3&3.0&0.2&50&4&3.0&0.3&50&5&4.0&0.3&50&]

1.2.4 試管苗的生根培養(yǎng) 將生長(zhǎng)良好的無(wú)根試管苗接種于生根培養(yǎng)基（1/2MS為基本培養(yǎng)基）上進(jìn)行生根培養(yǎng)，每個(gè)處理接種20塊（表4）。

表4 試管苗的生根培養(yǎng)

[培養(yǎng)基編號(hào)&NAA（mg/L）&接種數(shù)&1&0.1&20&2&0.5&20&3&1.0&20&]

（下轉(zhuǎn)32頁(yè)）

（上接27頁(yè)）

1.2.5 煉苗移栽 待款冬苗長(zhǎng)到約5～7cm，根長(zhǎng)約5～6cm，具有5～7片完整葉片時(shí)，進(jìn)行煉苗。3～4d后，將其從廣口瓶中取出洗凈培養(yǎng)基，移栽于經(jīng)過(guò)殺蟲滅菌的溫室中，在以下條件下進(jìn)行培養(yǎng)：溫度（25±2）℃；光照強(qiáng)度為2 000lx；光照12h/d。

2 結(jié)果與分析

2.1 愈傷組織的誘導(dǎo)與繁殖 將葉片接種于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)10～15d后，切口處明顯膨大，出現(xiàn)不同程度的增厚，30d后形成顆粒狀質(zhì)地、疏松的黃綠色愈傷組織。由上述試驗(yàn)得出，最適愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。

2.2 芽誘導(dǎo)分化 一般情況下，在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的配比對(duì)植物有明顯的影響，當(dāng)生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素比例較大時(shí)利于生根，較小時(shí)利于芽的分化。由上述試驗(yàn)可得，最佳誘導(dǎo)芽分化的培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。

2.3 試管苗生根 由根的誘導(dǎo)結(jié)果看，在一定范圍內(nèi)，隨著NAA濃度增加，生根率不斷增高，當(dāng)NAA濃度為0.5mg/L時(shí)，誘導(dǎo)苗生根效果最好，生根量多而粗，但隨著NAA濃度繼續(xù)升高，則會(huì)使根部愈傷化，抑制生根。

2.4 移栽煉苗 由于離體培養(yǎng)下的再生培養(yǎng)長(zhǎng)期在營(yíng)養(yǎng)豐富的無(wú)菌條件下生長(zhǎng)，根系活動(dòng)能力較低，直接接種于土壤中成活率極低，故先進(jìn)行適應(yīng)性培養(yǎng)。先將培養(yǎng)瓶的口打開，置于通風(fēng)處進(jìn)行大約7d的溫度、濕度適應(yīng)，經(jīng)過(guò)適應(yīng)性培養(yǎng)的苗可移入土壤中盆栽。將其小心的從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈基部的培養(yǎng)基，而后置于土壤中栽植，剛開始在室內(nèi)培養(yǎng)，并細(xì)心管理，15d左右可以拿出室外，成活率可達(dá)到90%以上。

3 結(jié)論與討論

款冬作為北方的一種重要的藥用植物，在組織培養(yǎng)研究方面幾乎為空白，故此研究可作為基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行初步的探索。本次研究在前人的基礎(chǔ)上，減小了激素濃度比，將6-BA的濃度設(shè)了很小的梯度差別，最大為1.0mg/L，發(fā)現(xiàn)小濃度的激素比可以誘導(dǎo)愈傷組織更好地生長(zhǎng)。本次研究的結(jié)論是：愈傷組織的最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L；根產(chǎn)生培養(yǎng)基是1/2MS+NAA0.5mg/L+活性炭0.05%。

隨著快速繁殖技術(shù)的大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用，款冬組織培養(yǎng)技術(shù)一定會(huì)逐漸成熟，從而大大提高款冬的藥用質(zhì)量，擴(kuò)大生產(chǎn)產(chǎn)量，更加充實(shí)中國(guó)的藥材市場(chǎng)。另外，隨著組培技術(shù)的不斷提高和完善，組培技術(shù)的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，相信與款冬相關(guān)的快繁技術(shù)、脫毒技術(shù)、培育新品種技術(shù)、人工種子技術(shù)等應(yīng)用，將大大改善款冬生產(chǎn)的現(xiàn)狀。

參考文獻(xiàn)

[1]張智慧，張金渝，金航.組織培養(yǎng)在藥用植物育種上的應(yīng)用[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2006，19（增刊）：496-499.

[2]韓碧文，李穎章.植物組織培養(yǎng)中器官建成的生理生化基礎(chǔ)[J].植物學(xué)通報(bào)，1993，10（2）：1-6.

[3]劉用生，李友勇，等.植物組織培養(yǎng)中活性炭的使用[J[.植物生理學(xué)通訊，1994，30（3）:214-217.

[4]何士劍，魯海平.款冬栽培技術(shù)[J].甘肅農(nóng)業(yè)科技，2003，11：53.

[5]王小菁.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在植物組織培養(yǎng)中的應(yīng)用[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：75. （責(zé)編：張宏民）

摘 要：為滿足栽培對(duì)種苗的需要，以款冬葉片為材料，進(jìn)行了愈傷組織誘導(dǎo)與分化，不定芽生根，試管苗的生根繼代、移栽和定植的研究。結(jié)果表明：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L是葉片愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基；MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L是愈傷組織分化培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基；1/2MS+NAA0.5mg/L+活性炭0.05%是不定芽根培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基。

關(guān)鍵詞：款冬；組織培養(yǎng)；培養(yǎng)基

中圖分類號(hào)S567.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A 文章編號(hào)1007-7731（2014）14-27-02

款冬別名蜂斗菜、水斗菜，系菊科多年生草本藥用植物，以其未開放的頭狀花序入藥，性溫，味甘，辛，微苦，有潤(rùn)肺、化痰、止咳等功效。款冬市場(chǎng)行情一直處于穩(wěn)定上升趨勢(shì)，市場(chǎng)銷量好，價(jià)格高，有很好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。但是，由于目前款冬遺傳育種基礎(chǔ)研究的缺乏和品種退化的問(wèn)題，其種苗供應(yīng)難以滿足當(dāng)前市場(chǎng)的需求。為此，筆者對(duì)款冬組織培養(yǎng)及快速繁殖進(jìn)行了研究，以期縮短新品種育成年限、提高育種效率，提供足夠的健康種苗。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及其處理方法 把生長(zhǎng)旺盛、無(wú)病害的幼嫩款冬葉片采回實(shí)驗(yàn)室，洗衣粉水中浸泡5min，自來(lái)水沖洗數(shù)次，除去殘余。在超凈工作臺(tái)上，用70%的酒精滅菌30s，無(wú)菌水沖洗1～2次，然后用0.1%的HgCl2滅菌5～6min，無(wú)菌水沖洗5～6次，并用濾紙吸干材料表面水分，滅菌后的材料切成0.5cm×0.5cm的小塊，分別接入不同的培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。以MS、1/2MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的6-BA、NAA、IAA。固體培養(yǎng)基力強(qiáng)度為200g/cm2。以MS為基本培養(yǎng)基加蔗糖30g/L，1/2MS為基本培養(yǎng)基加蔗糖15g/L。光照強(qiáng)度2 500～3 000lx；光照時(shí)間12h/d；培養(yǎng)基pH為5.8～6.0；培養(yǎng)溫度（25±2）℃。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng) 在超凈工作臺(tái)上，將無(wú)菌葉片切割成0.5cm×0.5cm的小塊，迅速接種到以MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度（6-BA，NAA）的培養(yǎng)基上，進(jìn)行嫩莖愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基接種50個(gè)小塊葉片，重復(fù)2次，培養(yǎng)25～30d（表1）。

表1 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)

[培養(yǎng)基編號(hào)&6-BA（mg/L）&NAA（mg/L）&接種塊數(shù)&1&0.1&0.1&50&2&0.3&0.1&50&3&0.5&0.1&50&4&1.0&0.1&50&5&1.0&0.2&50&]

1.2.2 芽的誘導(dǎo)分化培養(yǎng) 將已經(jīng)產(chǎn)生愈傷組織的良好外植體，以MS為基本培養(yǎng)基附加不同濃度的激素組合進(jìn)行試驗(yàn)（6-BA，NAA）直接繼代到新的培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)15～20d（表2）。

表2 芽的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)

[培養(yǎng)基編號(hào)&6-BA（mg/L）&NAA（mg/L）&接種數(shù)&1&1.0&0.1&50&2&2.0&0.2&50&3&3.0&0.2&50&4&3.0&0.3&50&5&4.0&0.3&50&]

1.2.3 無(wú)根苗的增殖培養(yǎng) 取具有展開小葉的叢生芽，接種在原分化培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，可在短期時(shí)間內(nèi)達(dá)到快速繁殖的目的（表3）。

表3 芽的增殖培養(yǎng)

[培養(yǎng)基編號(hào)&6-BA（mg/L）&NAA（mg/L）&接種數(shù)&1&1.0&0.1&50&2&2.0&0.2&50&3&3.0&0.2&50&4&3.0&0.3&50&5&4.0&0.3&50&]

1.2.4 試管苗的生根培養(yǎng) 將生長(zhǎng)良好的無(wú)根試管苗接種于生根培養(yǎng)基（1/2MS為基本培養(yǎng)基）上進(jìn)行生根培養(yǎng)，每個(gè)處理接種20塊（表4）。

表4 試管苗的生根培養(yǎng)

[培養(yǎng)基編號(hào)&NAA（mg/L）&接種數(shù)&1&0.1&20&2&0.5&20&3&1.0&20&]

（下轉(zhuǎn)32頁(yè)）

（上接27頁(yè)）

1.2.5 煉苗移栽 待款冬苗長(zhǎng)到約5～7cm，根長(zhǎng)約5～6cm，具有5～7片完整葉片時(shí)，進(jìn)行煉苗。3～4d后，將其從廣口瓶中取出洗凈培養(yǎng)基，移栽于經(jīng)過(guò)殺蟲滅菌的溫室中，在以下條件下進(jìn)行培養(yǎng)：溫度（25±2）℃；光照強(qiáng)度為2 000lx；光照12h/d。

2 結(jié)果與分析

2.1 愈傷組織的誘導(dǎo)與繁殖 將葉片接種于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)10～15d后，切口處明顯膨大，出現(xiàn)不同程度的增厚，30d后形成顆粒狀質(zhì)地、疏松的黃綠色愈傷組織。由上述試驗(yàn)得出，最適愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。

2.2 芽誘導(dǎo)分化 一般情況下，在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的配比對(duì)植物有明顯的影響，當(dāng)生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素比例較大時(shí)利于生根，較小時(shí)利于芽的分化。由上述試驗(yàn)可得，最佳誘導(dǎo)芽分化的培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。

2.3 試管苗生根 由根的誘導(dǎo)結(jié)果看，在一定范圍內(nèi)，隨著NAA濃度增加，生根率不斷增高，當(dāng)NAA濃度為0.5mg/L時(shí)，誘導(dǎo)苗生根效果最好，生根量多而粗，但隨著NAA濃度繼續(xù)升高，則會(huì)使根部愈傷化，抑制生根。

2.4 移栽煉苗 由于離體培養(yǎng)下的再生培養(yǎng)長(zhǎng)期在營(yíng)養(yǎng)豐富的無(wú)菌條件下生長(zhǎng)，根系活動(dòng)能力較低，直接接種于土壤中成活率極低，故先進(jìn)行適應(yīng)性培養(yǎng)。先將培養(yǎng)瓶的口打開，置于通風(fēng)處進(jìn)行大約7d的溫度、濕度適應(yīng)，經(jīng)過(guò)適應(yīng)性培養(yǎng)的苗可移入土壤中盆栽。將其小心的從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈基部的培養(yǎng)基，而后置于土壤中栽植，剛開始在室內(nèi)培養(yǎng)，并細(xì)心管理，15d左右可以拿出室外，成活率可達(dá)到90%以上。

3 結(jié)論與討論

款冬作為北方的一種重要的藥用植物，在組織培養(yǎng)研究方面幾乎為空白，故此研究可作為基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行初步的探索。本次研究在前人的基礎(chǔ)上，減小了激素濃度比，將6-BA的濃度設(shè)了很小的梯度差別，最大為1.0mg/L，發(fā)現(xiàn)小濃度的激素比可以誘導(dǎo)愈傷組織更好地生長(zhǎng)。本次研究的結(jié)論是：愈傷組織的最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L；根產(chǎn)生培養(yǎng)基是1/2MS+NAA0.5mg/L+活性炭0.05%。

隨著快速繁殖技術(shù)的大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用，款冬組織培養(yǎng)技術(shù)一定會(huì)逐漸成熟，從而大大提高款冬的藥用質(zhì)量，擴(kuò)大生產(chǎn)產(chǎn)量，更加充實(shí)中國(guó)的藥材市場(chǎng)。另外，隨著組培技術(shù)的不斷提高和完善，組培技術(shù)的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，相信與款冬相關(guān)的快繁技術(shù)、脫毒技術(shù)、培育新品種技術(shù)、人工種子技術(shù)等應(yīng)用，將大大改善款冬生產(chǎn)的現(xiàn)狀。

參考文獻(xiàn)

[1]張智慧，張金渝，金航.組織培養(yǎng)在藥用植物育種上的應(yīng)用[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2006，19（增刊）：496-499.

[2]韓碧文，李穎章.植物組織培養(yǎng)中器官建成的生理生化基礎(chǔ)[J].植物學(xué)通報(bào)，1993，10（2）：1-6.

[3]劉用生，李友勇，等.植物組織培養(yǎng)中活性炭的使用[J[.植物生理學(xué)通訊，1994，30（3）:214-217.

[4]何士劍，魯海平.款冬栽培技術(shù)[J].甘肅農(nóng)業(yè)科技，2003，11：53.

[5]王小菁.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在植物組織培養(yǎng)中的應(yīng)用[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：75. （責(zé)編：張宏民）

摘 要：為滿足栽培對(duì)種苗的需要，以款冬葉片為材料，進(jìn)行了愈傷組織誘導(dǎo)與分化，不定芽生根，試管苗的生根繼代、移栽和定植的研究。結(jié)果表明：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L是葉片愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基；MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L是愈傷組織分化培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基；1/2MS+NAA0.5mg/L+活性炭0.05%是不定芽根培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基。

關(guān)鍵詞：款冬；組織培養(yǎng)；培養(yǎng)基

中圖分類號(hào)S567.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A 文章編號(hào)1007-7731（2014）14-27-02

款冬別名蜂斗菜、水斗菜，系菊科多年生草本藥用植物，以其未開放的頭狀花序入藥，性溫，味甘，辛，微苦，有潤(rùn)肺、化痰、止咳等功效。款冬市場(chǎng)行情一直處于穩(wěn)定上升趨勢(shì)，市場(chǎng)銷量好，價(jià)格高，有很好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。但是，由于目前款冬遺傳育種基礎(chǔ)研究的缺乏和品種退化的問(wèn)題，其種苗供應(yīng)難以滿足當(dāng)前市場(chǎng)的需求。為此，筆者對(duì)款冬組織培養(yǎng)及快速繁殖進(jìn)行了研究，以期縮短新品種育成年限、提高育種效率，提供足夠的健康種苗。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及其處理方法 把生長(zhǎng)旺盛、無(wú)病害的幼嫩款冬葉片采回實(shí)驗(yàn)室，洗衣粉水中浸泡5min，自來(lái)水沖洗數(shù)次，除去殘余。在超凈工作臺(tái)上，用70%的酒精滅菌30s，無(wú)菌水沖洗1～2次，然后用0.1%的HgCl2滅菌5～6min，無(wú)菌水沖洗5～6次，并用濾紙吸干材料表面水分，滅菌后的材料切成0.5cm×0.5cm的小塊，分別接入不同的培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。以MS、1/2MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的6-BA、NAA、IAA。固體培養(yǎng)基力強(qiáng)度為200g/cm2。以MS為基本培養(yǎng)基加蔗糖30g/L，1/2MS為基本培養(yǎng)基加蔗糖15g/L。光照強(qiáng)度2 500～3 000lx；光照時(shí)間12h/d；培養(yǎng)基pH為5.8～6.0；培養(yǎng)溫度（25±2）℃。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng) 在超凈工作臺(tái)上，將無(wú)菌葉片切割成0.5cm×0.5cm的小塊，迅速接種到以MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度（6-BA，NAA）的培養(yǎng)基上，進(jìn)行嫩莖愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基接種50個(gè)小塊葉片，重復(fù)2次，培養(yǎng)25～30d（表1）。

表1 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)

[培養(yǎng)基編號(hào)&6-BA（mg/L）&NAA（mg/L）&接種塊數(shù)&1&0.1&0.1&50&2&0.3&0.1&50&3&0.5&0.1&50&4&1.0&0.1&50&5&1.0&0.2&50&]

1.2.2 芽的誘導(dǎo)分化培養(yǎng) 將已經(jīng)產(chǎn)生愈傷組織的良好外植體，以MS為基本培養(yǎng)基附加不同濃度的激素組合進(jìn)行試驗(yàn)（6-BA，NAA）直接繼代到新的培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)15～20d（表2）。

表2 芽的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)

[培養(yǎng)基編號(hào)&6-BA（mg/L）&NAA（mg/L）&接種數(shù)&1&1.0&0.1&50&2&2.0&0.2&50&3&3.0&0.2&50&4&3.0&0.3&50&5&4.0&0.3&50&]

1.2.3 無(wú)根苗的增殖培養(yǎng) 取具有展開小葉的叢生芽，接種在原分化培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，可在短期時(shí)間內(nèi)達(dá)到快速繁殖的目的（表3）。

表3 芽的增殖培養(yǎng)

[培養(yǎng)基編號(hào)&6-BA（mg/L）&NAA（mg/L）&接種數(shù)&1&1.0&0.1&50&2&2.0&0.2&50&3&3.0&0.2&50&4&3.0&0.3&50&5&4.0&0.3&50&]

1.2.4 試管苗的生根培養(yǎng) 將生長(zhǎng)良好的無(wú)根試管苗接種于生根培養(yǎng)基（1/2MS為基本培養(yǎng)基）上進(jìn)行生根培養(yǎng)，每個(gè)處理接種20塊（表4）。

表4 試管苗的生根培養(yǎng)

[培養(yǎng)基編號(hào)&NAA（mg/L）&接種數(shù)&1&0.1&20&2&0.5&20&3&1.0&20&]

（下轉(zhuǎn)32頁(yè)）

（上接27頁(yè)）

1.2.5 煉苗移栽 待款冬苗長(zhǎng)到約5～7cm，根長(zhǎng)約5～6cm，具有5～7片完整葉片時(shí)，進(jìn)行煉苗。3～4d后，將其從廣口瓶中取出洗凈培養(yǎng)基，移栽于經(jīng)過(guò)殺蟲滅菌的溫室中，在以下條件下進(jìn)行培養(yǎng)：溫度（25±2）℃；光照強(qiáng)度為2 000lx；光照12h/d。

2 結(jié)果與分析

2.1 愈傷組織的誘導(dǎo)與繁殖 將葉片接種于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)10～15d后，切口處明顯膨大，出現(xiàn)不同程度的增厚，30d后形成顆粒狀質(zhì)地、疏松的黃綠色愈傷組織。由上述試驗(yàn)得出，最適愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。

2.2 芽誘導(dǎo)分化 一般情況下，在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的配比對(duì)植物有明顯的影響，當(dāng)生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素比例較大時(shí)利于生根，較小時(shí)利于芽的分化。由上述試驗(yàn)可得，最佳誘導(dǎo)芽分化的培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。

2.3 試管苗生根 由根的誘導(dǎo)結(jié)果看，在一定范圍內(nèi)，隨著NAA濃度增加，生根率不斷增高，當(dāng)NAA濃度為0.5mg/L時(shí)，誘導(dǎo)苗生根效果最好，生根量多而粗，但隨著NAA濃度繼續(xù)升高，則會(huì)使根部愈傷化，抑制生根。

2.4 移栽煉苗 由于離體培養(yǎng)下的再生培養(yǎng)長(zhǎng)期在營(yíng)養(yǎng)豐富的無(wú)菌條件下生長(zhǎng)，根系活動(dòng)能力較低，直接接種于土壤中成活率極低，故先進(jìn)行適應(yīng)性培養(yǎng)。先將培養(yǎng)瓶的口打開，置于通風(fēng)處進(jìn)行大約7d的溫度、濕度適應(yīng)，經(jīng)過(guò)適應(yīng)性培養(yǎng)的苗可移入土壤中盆栽。將其小心的從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈基部的培養(yǎng)基，而后置于土壤中栽植，剛開始在室內(nèi)培養(yǎng)，并細(xì)心管理，15d左右可以拿出室外，成活率可達(dá)到90%以上。

3 結(jié)論與討論

款冬作為北方的一種重要的藥用植物，在組織培養(yǎng)研究方面幾乎為空白，故此研究可作為基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行初步的探索。本次研究在前人的基礎(chǔ)上，減小了激素濃度比，將6-BA的濃度設(shè)了很小的梯度差別，最大為1.0mg/L，發(fā)現(xiàn)小濃度的激素比可以誘導(dǎo)愈傷組織更好地生長(zhǎng)。本次研究的結(jié)論是：愈傷組織的最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L；根產(chǎn)生培養(yǎng)基是1/2MS+NAA0.5mg/L+活性炭0.05%。

隨著快速繁殖技術(shù)的大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用，款冬組織培養(yǎng)技術(shù)一定會(huì)逐漸成熟，從而大大提高款冬的藥用質(zhì)量，擴(kuò)大生產(chǎn)產(chǎn)量，更加充實(shí)中國(guó)的藥材市場(chǎng)。另外，隨著組培技術(shù)的不斷提高和完善，組培技術(shù)的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，相信與款冬相關(guān)的快繁技術(shù)、脫毒技術(shù)、培育新品種技術(shù)、人工種子技術(shù)等應(yīng)用，將大大改善款冬生產(chǎn)的現(xiàn)狀。

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