仲秀秀 崔 文 張國(guó)安 侯 森 王 帥 周 健

(1山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，山東 濟(jì)南 250022；2濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院， 濟(jì)南 250062；3濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院，山東 濟(jì)寧 272067；4濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院司法鑒定中心，濟(jì)寧 272067)

甲狀腺癌是最常見的內(nèi)分泌腫瘤，其中甲狀腺乳頭狀癌和濾泡型是最多見的亞型[1-2]。脂聯(lián)素是脂肪細(xì)胞分泌的最豐富的內(nèi)分泌激素，很多研究認(rèn)為脂聯(lián)素對(duì)各種癌癥尤其是肥胖相關(guān)的癌癥起保護(hù)作用[3]。新近研究結(jié)果顯示，脂聯(lián)素受體與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[4]，但是脂聯(lián)素在甲狀腺乳頭狀癌中的作用還不明確。本文將重點(diǎn)探討脂聯(lián)素在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)與臨床特征之間的關(guān)系。

1 材料

1.1 組織來(lái)源

組織標(biāo)本來(lái)自濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院病理科2007年至2009年甲狀腺乳頭狀癌78例，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移58例和甲狀腺腺瘤12例。

1.2 試劑

一抗為鼠抗人單克隆抗體(ab222554),購(gòu)自abcam公司。二抗和DAB顯色液為GTVisionTMⅢ抗兔/鼠通用型免疫組化檢測(cè)型試劑盒。檸檬酸抗原修復(fù)液(pH 6.0)購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)科技有限公司。免疫組化相關(guān)的實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備。

1.3 方法

1.3.1免疫組織化學(xué) 載玻片處理：泡酸、自來(lái)水清洗、烤干、多聚賴氨酸(APES)掛膠，烤片。石蠟切片，厚度約4μm。方法步驟： 1)烤片60℃ 1h，二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水,PBS清洗；2)水浴鍋檸檬酸抗原修復(fù)97℃ 10min，室溫自然冷卻約1h，PBS清洗；3)3%過(guò)氧化氫1滴37℃ 10min，PBS清洗；4)一抗(1∶100)4℃過(guò)夜，PBS清洗；5)二抗37℃ 30min，PBS清洗；6)DAB顯色3min左右；7)蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水、透明，中性樹膠封片。顯微鏡下拍照，陰性對(duì)照選用PBS代替一抗。

1.3.2免疫組化分析 陽(yáng)性結(jié)果為棕黃色，主要在細(xì)胞膜和胞漿中表達(dá)。1)染色強(qiáng)度評(píng)分方法：0分(陰性)、1分(弱陽(yáng)性)、2分(中等陽(yáng)性)、3分(強(qiáng)陽(yáng)性)。2)染色范圍的評(píng)定:按照陽(yáng)性細(xì)胞百分率進(jìn)行評(píng)分，0分(0%)，1分(1%～25%)，2分(26%～50%)，3分(51%～100%)。3)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分率的乘積為免疫組化染色的最后評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，0～4分為陰性，6～9為陽(yáng)性。免疫組化切片有2位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理學(xué)專家對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行評(píng)定，一致率大于90%，其差異經(jīng)最后的商討判定染色結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 脂聯(lián)素表達(dá)與臨床病理聯(lián)系

脂聯(lián)素主要在甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：脂聯(lián)素在甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá)，陽(yáng)性率為(92.3%)，見圖1；脂聯(lián)素在甲狀腺腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率為(66.7%)，見圖2。兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見表1。

圖1 脂聯(lián)素在甲狀腺乳頭狀癌中的不同表達(dá)(×200)

圖2 脂聯(lián)素在甲狀腺腺瘤中的不同表達(dá)(×200)

2.2 通過(guò)對(duì)脂聯(lián)素的表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌的臨床特征分析

脂聯(lián)素的表達(dá)與患者的年齡、性別、絕經(jīng)情況、腫塊大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤組織侵襲浸潤(rùn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。術(shù)前體重和多發(fā)性與脂聯(lián)素的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 脂聯(lián)素的表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌的臨床病理聯(lián)系(n，%)

3 討論

脂聯(lián)素為脂肪細(xì)胞分泌的一種細(xì)胞因子。Kitahara CM等研究發(fā)現(xiàn)肥胖與甲狀腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)[5]。本文結(jié)果顯示，脂聯(lián)素在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)與術(shù)前體重有關(guān)，本結(jié)果與Kitahara CM等研究結(jié)果一致。

Mitsiades N等[6]發(fā)現(xiàn)，循環(huán)脂聯(lián)素與甲狀腺癌的發(fā)生成負(fù)相關(guān)，其水平高患甲狀腺癌的風(fēng)險(xiǎn)降低，被認(rèn)為是一種保護(hù)因子。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化法測(cè)定脂聯(lián)素在甲狀腺乳頭狀癌的表達(dá)，結(jié)果顯示甲狀腺乳頭狀癌脂聯(lián)素高表達(dá)，在甲狀腺乳頭癌的發(fā)生發(fā)展中起一定作用。

Cheng等[3]發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素受體1和脂聯(lián)素受體2在甲狀腺乳頭狀癌組織表達(dá)比癌旁組織高，脂聯(lián)素受體表達(dá)與癌組織的侵襲、多中心性和腫瘤的分級(jí)有關(guān)，脂聯(lián)素受體在甲狀腺乳頭狀癌癌組織中的過(guò)度表達(dá)被認(rèn)為與癌癥好的預(yù)后有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化的方法檢測(cè)78例甲狀腺乳頭狀癌和12例甲狀腺腺瘤組織標(biāo)本，脂聯(lián)素在甲狀腺乳頭狀癌中的陽(yáng)性表達(dá)率94.4%，在甲狀腺腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率66.74%,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)78例甲狀腺乳頭狀癌患者的臨床病理特征分析發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素在癌組織中高表達(dá)，并且與患者的腫瘤多發(fā)性有關(guān)，與Cheng等的研究結(jié)果一致。

綜上所述，甲狀腺乳頭狀癌中脂聯(lián)素表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌有關(guān)，術(shù)前體重的增加可能是甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生發(fā)展的一個(gè)重要因素，腫瘤組織脂聯(lián)素高表達(dá)可能與腫瘤多發(fā)性有關(guān)。甲狀腺乳頭狀癌組織中脂聯(lián)素分泌增多，降低甲狀腺腫瘤組織中脂聯(lián)素的表達(dá)，增加循環(huán)血液中脂聯(lián)素水平可能降低組織惡變改善預(yù)后,為甲狀腺乳頭狀癌的治療提供新的靶點(diǎn)。

[1] 侯森，崔文.瘦素脂聯(lián)素及其受體與甲狀腺癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J].濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，36(3)：221-224.

[2] 仲秀秀，張國(guó)安，崔文.脂聯(lián)素及其受體與惡性腫瘤相關(guān)性研究進(jìn)展[J]. 濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，36(5)：336-338.

[3] Dalamaga M,Diakopoulos KN,Mantzoros CS.The role of adiponectin in cancer:a review of current evidence[J].Endocr Rev，2012,33(4):547-594.

[4] Cheng SP,Liu CL,Hsu YC,et al.Expression and biologic significance of adiponectin receptors in papillary thyroid carcinoma[J].Cell Biochem Biophys，2013,65(2):203-210.

[5] Kitahara CM,Platz EA,Freeman LE,et al.Obesity and thyroid cancer risk among U.S.men and women:a pooled analysis of five prospective studies[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2011,20(3):464-472.

[6] Mitsiades N,Pazaitou-Panayiotou K,Aronis KN,et al.Circulating adiponectin is inversely associated with risk of thyroid cancer:in vivo and in vitro studies[J].J Clin Endocrinol Metab，2011,96(12):E2023-E2028.