宋莎莎，楊樂(lè)，俞令凱，林陳石，胡婭 （長(zhǎng)江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434023）

潰瘍性結(jié)腸炎 （ulcerative colitis，UC）是一種彌散的慢性非特異性炎癥性腸病，以大腸黏膜與黏膜下炎癥病變?yōu)橹?，該病反?fù)發(fā)作，遷延不愈，極大地影響患者生活質(zhì)量［1］。近年來(lái)，因其發(fā)病率逐年升高而倍受關(guān)注。UC病因不明確，尚無(wú)特效治療方法。清熱解毒中藥魚(yú)腥草具有抗菌、抗炎的作用，本實(shí)驗(yàn)探討?hù)~(yú)腥草主要有效成分魚(yú)腥草素對(duì)UC小鼠的治療作用。

1 材料與方法

1.1 試劑

合成魚(yú)腥草素 （亞硫酸氫鈉癸酰乙醛，魚(yú)腥草素鈉，sodium houttuyfonate，HOU，湖南省湘中制藥有限公司，批號(hào)：110403），葡聚糖硫酸鈉 （dextran sulfate sodium，DSS，上海寶曼生物科技有限公司，批號(hào)：9011－18－1）。

1.2 儀器

DDL－5M離心機(jī) （賽特湘儀有限公司），RM2235石蠟切片機(jī) （德國(guó)Leica），Microphot FXA光學(xué)顯微鏡 （日本Nikon）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

昆明種小鼠，雄性，體質(zhì)量18～22g。隨機(jī)分為6組：正常組 （A）、模型組 （B）、合成魚(yú)腥草素低劑量組 （C）、中劑量組 （D）、高劑量組 （E）。除正常組外，其余小鼠自由飲用5%DSS 7d，建立潰瘍性結(jié)腸炎模型。C、D、E組小鼠分別給予合成魚(yú)腥草素0.2、0.4、0.8g／kg，A、B組給予生理鹽水，灌胃給藥，1次／d，連續(xù)7d。

1.4 病理分析

取結(jié)腸組織8cm，行結(jié)腸大體形態(tài)損傷評(píng)分［2］：0分：黏膜無(wú)損傷；1分：黏膜充血，血管模糊；2分：黏膜接觸性出血；3分：黏膜自發(fā)性出血；4分：有明顯大小不等的潰瘍形成。肉眼觀察病變組織后，置于10%的福爾馬林液中固定24h，經(jīng)常規(guī)脫水、浸蠟、石蠟包埋，顯微鏡下觀察切片組織的炎癥浸潤(rùn)情況，根據(jù)文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分［3］，0分：黏膜固有層無(wú)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)；1分：黏膜固有層有少量中性粒細(xì)胞 （＜10個(gè)／高倍視野）浸潤(rùn)，累及少量隱窩；2分：黏膜固有層有多量中性粒細(xì)胞（10～50個(gè)／高倍視野）浸潤(rùn)，累及50%以上隱窩；3分：黏膜固有層有大量中性粒細(xì)胞 （＞50個(gè)／高倍視野）浸潤(rùn)，伴隱窩膿腫；4分：固有層明顯急性炎癥伴潰瘍形成。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 16.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以 （）表示，多組間比較采用方差分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癥狀

造模完成后，UC小鼠均出現(xiàn)腹瀉、粘液膿血便等典型UC活動(dòng)期癥狀，治療7d后，模型組小鼠癥狀無(wú)改善，合成魚(yú)腥草素低劑量組小鼠腹瀉，粘液膿血便等癥狀減輕，中高劑量組小鼠癥狀逐漸消失。

2.2 小鼠結(jié)腸病理組織學(xué)改變

與正常組比較，模型組表現(xiàn)為腸道的急性炎癥期，伴有黏膜的水腫糜爛，隱窩明顯減少，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。HOU治療組腸道黏膜被侵蝕及腺上皮消失等炎癥反應(yīng)明顯低于模型組，見(jiàn)圖1。

圖1 小鼠結(jié)腸壁粘膜層病理學(xué)觀察 （HE，×200）

2.3 小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)分

肉眼觀察結(jié)腸組織大體形態(tài)損傷和鏡下觀察結(jié)腸組織炎癥浸潤(rùn)情況，治療組評(píng)分均明顯低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05或P＜0.01）。見(jiàn)表1。

3 討論

魚(yú)腥草味辛，性寒涼，歸肺經(jīng)，具有清熱解毒、消癰排膿等功效，現(xiàn)代藥理研究認(rèn)為魚(yú)腥草有抗菌、抗病毒、抗炎、抗過(guò)敏、增強(qiáng)免疫功能的作用，臨床用于治療呼吸、消化、婦科、眼科及腫瘤等多種疾?。?］。魚(yú)腥草素為魚(yú)腥草揮發(fā)油中有效成分癸酰乙醛，將其與亞硫酸氫鈉成鹽，克服了天然魚(yú)腥草素結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定、不溶于水的缺點(diǎn)，得到具有相似生物活性的合成魚(yú)腥草素。

潰瘍性結(jié)腸炎的病因至今未明，可能與感染、免疫、遺傳、環(huán)境等多種因素相關(guān)?；颊卟∏槌３＿w延不愈，極易復(fù)發(fā)，嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量，且目前尚無(wú)有效治療方法，因此深入研究潰瘍性結(jié)腸炎的治療方法非常重要。動(dòng)物模型的建立是實(shí)驗(yàn)研究中非常關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。選擇復(fù)制動(dòng)物模型的方案時(shí)，應(yīng)充分考慮病因、發(fā)病機(jī)理、病理變化及表現(xiàn)癥狀等盡量與臨床接近。目前用于研究的潰瘍性結(jié)腸炎的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型大致可分為免疫法、化學(xué)法、復(fù)合法、基因模型以及中醫(yī)模型五大種類(lèi)［5］。本實(shí)驗(yàn)選用DSS誘導(dǎo)的小鼠UC模型，該方法建立的UC模型病理生理、組織形態(tài)、病程特點(diǎn)等與人類(lèi)UC近似，是一種較理想的UC動(dòng)物模型［6］。DSS是由蔗糖合成的一種硫酸多糖，市售DSS的分子量從5000到500000不等，經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇分子量40000的DSS建立UC模型。

潰瘍性結(jié)腸炎以慢性反復(fù)發(fā)作的腹痛腹瀉或粘液膿血便等為臨床特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)中，小鼠自由飲用5%DSS，5～7d后小鼠體質(zhì)量下降、懶動(dòng)，并有明顯的腹瀉、便血等癥狀，結(jié)腸組織呈明顯的急性炎癥改變。經(jīng)高、中、低三個(gè)劑量合成魚(yú)腥草素灌胃7d治療后，以上癥狀均有不同程度的緩解。低劑量組對(duì)UC癥狀有一定的改善作用，但評(píng)分與模型組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），中、高劑量組在緩解癥狀的同時(shí)，也顯著降低UC小鼠結(jié)腸大體形態(tài)評(píng)分和組織病理學(xué)評(píng)分 （中劑量組P＜0.05，高劑量組P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，在一定劑量范圍內(nèi)，合成魚(yú)腥草素對(duì)UC的治療效果隨劑量增高而增強(qiáng)，具有劑量依賴(lài)性。具體量效關(guān)系有待于進(jìn)一步研究。

表1 各組小鼠病變結(jié)腸組織肉眼觀及鏡下觀評(píng)分

［1］Liu FB，Li XY.Research of the quality of life of patients with ulcerative colitis：current status and future prospects ［J］.World Chinese Journal of Digestology，2011，19 （5）：498.

［2］黃紅麗，聶玉強(qiáng)，李瑜元 .潰瘍性結(jié)腸炎臨床嚴(yán)重程度分型與內(nèi)鏡病理分級(jí)的關(guān)系 ［J］.現(xiàn)代消化與介入診療，2008，13（2）：79－81.

［3］鐘英強(qiáng)，朱兆華，幸連春 .活動(dòng)期潰瘍性結(jié)腸炎活檢粘膜的病理組織學(xué)特征、分級(jí)及其與疾病程度的關(guān)系 ［J］.中華消化雜志，2003，23 （7）：414－417.

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［5］徐陽(yáng)，唐艷萍 .潰瘍性結(jié)腸炎中西醫(yī)動(dòng)物模型研究進(jìn)展 ［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2013，19（4）：469－472.

［6］張忠，程富勝，賈寧，等 .小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的建立及病理組織學(xué)比較 ［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2012，20（6）：69－71.