林 慧 張沖沖 陳佳菁 康鍶鵬 陳遠(yuǎn)欽

胃腸道間質(zhì)瘤(gastrointestinal stromal tumor，GIST)是最常見的胃腸道間葉源性腫瘤，其生物學(xué)行為從良性到高度惡性跨度很大。目前主要依據(jù)GIST腫瘤大小、核分裂數(shù)以及發(fā)生部位等來判斷其惡性程度，尚缺少有價(jià)值的分子標(biāo)記用于預(yù)后估測(cè)。碳酸酐酶Ⅱ(carbonic anhydrase Ⅱ，CA Ⅱ)是1種含鋅金屬酶，能夠高效催化CO2的水合反應(yīng)，從而參與多種生理活動(dòng)。目前發(fā)現(xiàn)其在GIST、胃癌、胰腺癌、乳腺癌等多種腫瘤中表達(dá)，并可能與結(jié)直腸癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)[1]。本研究擬通過免疫組化技術(shù)檢測(cè)CA Ⅱ在GIST組織中的表達(dá)情況，探討其與GIST臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般材料

收集我院和福建醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院2009年～2012年手術(shù)切除的54例原發(fā)性GIST組織標(biāo)本，術(shù)前均未接受過任何治療，包括胃部GIST 37例，小腸GIST 17例?；颊吣挲g29～79歲，中位年齡58歲，其中男性26例，女性28例。按2008年改良的NIH危險(xiǎn)度評(píng)估方案分級(jí)：極低危7例，低危10例,中危10例,高危27例。所有病例免疫表型均為DOG-1、CD117陽性。

1.2 方法

標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林液固定，常規(guī)脫水、包埋、制片。免疫組織化學(xué)采用EnVision法，試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，CA Ⅱ兔抗人單克隆抗體(克隆號(hào)EPR5195)購自宜百康生物科技股份有限公司。操作步驟嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行，設(shè)陽性和陰性對(duì)照，抗體稀釋度為1∶400。

1.3 結(jié)果判定

CA Ⅱ陽性定位于胞質(zhì)，呈棕黃色。判斷標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[2-3]的方法，按陽性細(xì)胞百分率進(jìn)行評(píng)判：無陽性細(xì)胞為陰性，陽性細(xì)胞數(shù)<10%為弱陽性(+)，10%～50%為中等陽性(++)，>50%為強(qiáng)陽性(+++)。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果經(jīng)兩位高年資病理醫(yī)師獨(dú)立判定。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS 19.0軟件。采用Fisher確切概率法或秩和檢驗(yàn)，比較不同臨床病理資料組間的差異，P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CA Ⅱ表達(dá)情況

CA Ⅱ在GIST組織中呈彌漫(+++)或局灶性(+～++)表達(dá)。54例GIST組織中CA Ⅱ表達(dá)率為66.7%(36/54)，強(qiáng)陽性表達(dá)率為40.7%(22/54)，其中17例小腸GIST中均為彌漫表達(dá),而48.6%(18/37)的胃部GIST組織中無表達(dá),僅13.5%(5/37)呈強(qiáng)陽性表達(dá)。

2.2 CA Ⅱ表達(dá)與GIST臨床病理特征的關(guān)系

本組結(jié)果顯示CA Ⅱ表達(dá)水平與腫瘤直徑和危險(xiǎn)度分級(jí)顯著相關(guān)(P<0.01),而與患者性別和核分裂數(shù)無相關(guān)性(P>0.05)(表1)。其中CA Ⅱ表達(dá)水平與GIST危險(xiǎn)度分級(jí)呈正相關(guān)(γ=0.464，P=0.000)，高危GIST者中有66.7%(18/27)CA Ⅱ呈彌漫表達(dá)，而中低危GIST者則多呈局灶性表達(dá)。

表1 CA Ⅱ表達(dá)與GIST臨床病理特征的關(guān)系/例

本組17例小腸GIST樣本中有16例為高危，故本組僅分析不同原發(fā)部位的高危GIST組織中CA Ⅱ表達(dá)的差異，胃部GIST組織中CA Ⅱ表達(dá)水平顯著低于小腸GIST組織，秩和檢驗(yàn)結(jié)果顯示兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

表2 高危GIST中CA Ⅱ表達(dá)與腫瘤原發(fā)部位的關(guān)系/例

3 討論

CA是一族含鋅金屬酶，至少有14種同工酶，CA Ⅱ是其中1種胞質(zhì)酶，廣泛存在于人體腦、腎臟、胰腺、胃黏膜、骨骼肌等組織器官中，催化活性高[4]。目前CA Ⅱ在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的機(jī)制尚未完全明確，有研究認(rèn)為實(shí)體瘤胞外的PH值往往低于其鄰近的正常組織，CA Ⅱ有可能是通過可逆性催化CO2和HCO3-的相互轉(zhuǎn)化，參與細(xì)胞外微環(huán)境的酸化[5-6]。而胞外微環(huán)境的低PH值則一般被認(rèn)為是腫瘤富于侵襲性和預(yù)后差的1種標(biāo)志，因此CA Ⅱ表達(dá)水平的改變可能對(duì)腫瘤發(fā)生及其生物學(xué)行為有重要影響。從正常結(jié)直腸黏膜、息肉到癌組織，CA Ⅱ表達(dá)逐步降低提示其表達(dá)下調(diào)可能是結(jié)直腸癌發(fā)生的早期事件[7]。在子宮內(nèi)膜樣腺癌中，CA Ⅱ表達(dá)水平則要高于正常的子宮內(nèi)膜[3]。不同腫瘤間存在的這種差異提示CA Ⅱ在腫瘤中的表達(dá)可能具有細(xì)胞或組織類型的特異性[1]。

本研究顯示CA Ⅱ在多數(shù)GIST組織中過表達(dá)，且小腸GIST的表達(dá)水平要高于胃部發(fā)生的腫瘤，與Parkkila等[2]報(bào)道結(jié)果相符，但其對(duì)159例患者的隨訪結(jié)果認(rèn)為高表達(dá)CA Ⅱ能夠提示更好的預(yù)后，這卻與以往多認(rèn)為胃部GIST預(yù)后要好于其他部位相矛盾[8]。類似的情況同樣出現(xiàn)在不同的腫瘤類型中，胃癌組織中CA Ⅱ表達(dá)下調(diào)被認(rèn)為與腫瘤生長(zhǎng)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)[6]，而在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中，CA Ⅱ表達(dá)則與腫瘤大小有關(guān)，與其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)無關(guān)[1]。

本組病例中CA Ⅱ表達(dá)水平與腫瘤危險(xiǎn)度相關(guān)，但如果排除發(fā)生部位的影響，單純比較胃部GIST中兩者的關(guān)系，則發(fā)現(xiàn)CA Ⅱ表達(dá)在危險(xiǎn)度分組間的差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。除此之外,對(duì)于腫瘤直徑、核分裂數(shù)這2個(gè)危險(xiǎn)度分級(jí)的重要參數(shù)，我們得出的結(jié)論正好與Parkkila等[2]的研究結(jié)果相反，原因可能在于樣本選擇、主觀判斷、抗體種類、界值設(shè)定等方面存在的差異。但換個(gè)角度來看，危險(xiǎn)度分組中CA Ⅱ的表達(dá)差異在很大程度上可能是由腫瘤原發(fā)部位決定的，而這需要對(duì) CA Ⅱ表達(dá)調(diào)控及作用機(jī)制進(jìn)行更深入的研究。

近年來，研究發(fā)現(xiàn)惡性黑色素瘤、腦膜瘤、食管癌等多種腫瘤的新生血管內(nèi)皮細(xì)胞能夠表達(dá)CA Ⅱ，提示其可能在腫瘤血管生成中起作用，并與腫瘤惡性進(jìn)展有關(guān)[9-10]。同時(shí)，CA Ⅱ在內(nèi)皮的表達(dá)能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生自身抗體則意味著其能夠成為腫瘤生物治療的潛在靶點(diǎn)[9]。本研究中CA Ⅱ在腫瘤細(xì)胞中呈彌漫或局灶性表達(dá)，尚未明確其是否同樣表達(dá)于新生血管內(nèi)皮。

綜上所述，CA Ⅱ的表達(dá)主要受發(fā)生部位的影響，可能與GIST的發(fā)生發(fā)展有一定關(guān)系，其能否作為GIST的預(yù)后指標(biāo)或生物治療靶點(diǎn)，仍有待于進(jìn)一步的研究。

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